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1.
应用聚合酶链式反应(PCR)技术检测牛结核病 总被引：2，自引：0，他引：2
本试验应用聚合酶链式反应(PCR)技术原理,研究建立了牛结核病PCR检测方法。试验结果表明:该方法的敏感性测定模板浓度为30.4pg,特异性测定牛结核分枝杆菌在478bp出现特异扩增带。通过对298头份牛奶和229份牛全血样本进行检测,检出阳性牛奶样本33份,阳性全血样本43份;鲜牛奶样本同时还用罗氏培养后采取PCR方法进行检测,检出阳性样本34份;全血样本同时还用PPD进行皮内试验,检出阳性样本52份。试验表明:牛结核病PCR检测方法具有敏感性高、特异性强、快速等优点,为牛结核病的早期诊断提供了科学依据。 相似文献
2.
应用自制牛结核病PCR诊断试剂盒对贵州省某奶牛场共计150份血样、奶样标本中结核分枝杆菌进行检测,结果显示:PCR试剂盒对111份奶样标本进行检测,8份为阳性,阳性检出率7.2%;PCR试剂盒对39份血样标本的检测,12份为阳性,阳性检出率为30.76%。本试验共计检测贵阳附近某奶牛场1 200头份奶牛,先采用PPD检测牛结核病阳性牛和可疑牛,再用PCR法进行检测,PCR检出阳性牛共计20头份,阳性检出率为1.67%;PPD检出阳性牛24头份,检出率为2%。总之,PCR试剂盒在检测牛结核病不同标本中显示出快速、特异等优点,这为今后牛结核病的检测工作提供了一条新途径。 相似文献
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结核病与BCG疫苗接种个体TaqMan探针荧光定量PCR诊断方法的建立及初步应用 总被引：1，自引：1，他引：0
为快速鉴别诊断结核病(TB),本研究以GenBank登录的致病性结核分枝杆菌复合群、人型结核杆菌和牛分枝杆菌特有基因为对象,设计并合成引物及探针,建立TaqMan探针荧光定量PCR检测方法。实验结果表明,该方法对标准质控菌株反应呈阳性,对卡介苗(BCG)及其他微生物样品反应呈阴性;对结核分枝杆菌或牛分枝杆菌标准菌株的检测灵敏度可达单个菌细胞水平。对45份结核菌素PPD皮肤试验结果为阳性的临床样本进行TaqMan探针荧光定量PCR检测,36份为阳性;而对PPD检测为阴性的50份临床样本进行检测时,7份为阳性。本研究结果表明,所建立的方法可用于TB的鉴别诊断,可对由BCG接种或环境中分枝杆菌引起的PPD检测假阳性样本进行鉴别,对TB的快速检测和早期诊断具有重要意义。 相似文献
4.
目的：利用可以鉴别分支杆菌属中结核分枝杆菌、牛分支杆菌、非结核分枝杆菌多重PCR方法,检测奶牛场麻雀组织中分支杆菌感染情况。方法根据结核分枝杆菌种特异基因目的片段MTP40、分枝杆菌属特异基因32kD、结核分枝杆菌复合群特异基因IS6110插入序列,设计合成三对特异性引物,扩增对32kD的506bp、MTP40的396bp和IS6110的984bp片段,以此方法检测奶牛场麻雀肺组织中分支杆菌感染情况,并对阳性结果的目的片段进行克隆测序。结果在分析的21份麻雀肺组织中,检测出2例非结核分枝杆菌阳性病料,阳性率9.52%。2例阳性样本PCR扩增得到的片段与GenBank收录的32kD基因同源性分别为95.8%和97.2%。结论麻雀肺组织中存在分支杆菌感染阳性病例提示该牛场中生物体内存在分支杆菌潜伏感染,并可能导致奶牛的潜伏感染以及干扰结核检疫。 相似文献
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牛分枝杆菌特异性PCR检测方法的建立及初步应用 总被引：12，自引：0，他引：12
根据已发表的牛分枝杆菌的pncA的基因序列，设计和合成了一对可扩增294bp目的片段的引物，建立了特异性检测牛分枝杆菌的PCR方法。对牛分枝杆菌国际参考株和国内分离株成功扩增出294bp的特异性基因片段；对人结核分枝杆菌、副结核分枝杆菌、鸟胞内分枝杆菌和草分枝杆菌DNA的PCR扩增结果均为阴性。本PCR方法检测的敏感度可达到50pg。对10份牛分枝杆菌培养阳性和10份阴性样品的DNA分别进行了PCR检测，结果10份阳性样品中有9份样品为PCR扩增阳性，阳性符合率为90％（9／10）；而10份阴性样品则PCR扩增全部为阴性，阴性符合率为100％（10／10）。本方法可做为牛分枝杆菌的快速检测和流行病学调查的工具。 相似文献
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利用TB_PCR试剂盒对牛结核病的检测 总被引：5，自引：0，他引：5
应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术制备的ＴＢ－ＰＣＲ试剂盒对来自新疆６个牛场的２３８份血样、奶样、口腔分泌物标本中结核分枝杆菌进行检测,结果显示：ＴＢ－ＰＣＲ试剂盒对４０份奶样样本进行检测,７头为阳性,阳性检出率１７．５％。ＴＢ－ＰＣＲ试剂盒对１７８份血样标本的检测,２３头牛为阳性,阳性检出率为１２．９２％。ＴＢ－ＰＣＲ试剂盒对２０份口腔分泌物标本中结核分歧杆菌检测结果均为阴性。本试验中共计检测６个牛场的２３８份不同标本的ＰＣＲ阳性牛共计２７头,阳性检出率为３．０２％。将ＰＣＲ和传统的ＰＰＤ检测方法的结果比较显示ＰＰＤ检出阳性率高于ＰＣＲ,ＰＰＤ检出阳性牛３９头,检出阳性率６．７％。本试验对口腔分泌物标本的检测结果不理想。总之,ＴＢ－ＰＣＲ试剂盒在检测牛结核病不同标本中显示出快速、特异等优点。为今后牛结核病的检测 相似文献
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR检测试剂盒的研制 总被引：1，自引：1，他引：0
根据GenBank中猪传染性胸膜肺炎放线杆菌apxⅣA基因序列,设计了1对引物,通过对PCR反应条件进行优化,研制了检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的PCR试剂盒。该试剂盒扩增的阳性条带为600 bp,特异性与敏感性结果显示,该PCR检测试剂盒的最低核酸检测量为50 CFU/mL,而对金黄色葡萄球菌、链球菌、多杀性巴氏杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、副猪嗜血杆菌、大肠杆菌的扩增结果均为阴性。-20℃至少可保存12个月,且重复性良好。应用该PCR试剂盒对41份临床样本进行了检测,其PCR检测结果与细菌学检测结果相一致。结果表明,猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR检测试剂盒能够对APP临床样品进行快捷、灵敏、准确的检测。 相似文献
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《畜牧兽医学报》2016,(4)
本研究的目的是探索副结核分枝杆菌特异性蛋白MAP0862在牛副结核病血清学诊断中的作用,建立牛副结核病特异性ELISA诊断方法。将通过原核表达获得的副结核特异性蛋白MAP0862纯化并定量后作为包被抗原,经过一系列条件优化后初步建立了牛副结核病间接ELISA诊断方法。使用牛副结核阳性血清、牛布病阳性血清、牛结核阳性血清、卡介苗免疫牛血清、牛大肠杆菌阳性血清以及健康阴性牛血清对该方法的验证表明其具有良好的特异性。使用该方法对300份临床血清进行检测,结果表明该方法与IDEXX副结核检测试剂盒的符合率为94.3%。基于副结核特异性蛋白质MAP0862建立的间接ELISA诊断方法能有效检测牛副结核病。 相似文献
10.
本文报道应用两种活体诊断方法检测牛结核病的试验结果。2010～2011年度,应用PPD皮内变态反应方法分3批次对5156头奶牛和奶水牛实施监测,监测阳性数57头,阳性率1.11%。采集该57头牛抗凝全血,应用γ-干扰素酶联免疫吸附试验进行检测,检出阳性样品3份,阳性率5.26%。对14头第一批PPD皮内变态反应阳性牛进行病理检验和进行细菌分离培养和PCR检测,结果3份样品分离培养呈阳性,其中1份PCR鉴定为结核分枝杆菌,2份为非分枝杆菌。PCR方法检测的14份组织样品中,2份为结核分枝杆菌阳性,1份为牛结核分枝杆菌阳性。结合病理剖检和病原PCR诊断,分析比较PPD皮内变态反应试验和γ-干扰素酶联免疫吸附试验的敏感性和特异性,由于PPD纯度、非特异性反应、结果判定的主观性等因素,导致PPD皮内变态反应监测检出假阳性率较高。 相似文献
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牛结核病是一种重要的人畜共患病,尽管许多国家已经实施了牛群净化,但其仍然威胁人类的公共卫生健康。本研究利用抗牛γ干扰素特异性单克隆抗体,通过免疫金标记技术,建立了胶体金免疫层析试纸条检测牛γ干扰素的方法。研充结果证明,该方法对牛γ干扰素具有高度特异性,与其它动物干扰素没有交叉反应,检测牛γ干扰素的灵敏度与进口ELISA试剂盒相当。试纸条在室温保存6个月、4℃保存12个月,其特异性及灵敏度没有明显变化。对田间送检的23份全血经结核特异性刺激后进行检测,结果与进口结核ELISA试剂盒符合率为91．3％。研究表明,本研究建立的牛γ干扰素免疫层析检测方法具有特异、敏感、稳定、操作简单快捷等特点,适合用于牛结核的快速特异检测。 相似文献
12.
为评价牛γ-干扰素ELISA检测方法检测牛结核的效果及国产试剂盒的检测效果,本试验首先将国产试剂盒与Prionics试剂盒对42份相对阳性的样品和105份相对阴性的样品进行对比研究。然后对5个规模化牛场的3000头奶牛首先进行国产单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验,3天后选取皮内变态反应阳性和可疑及部分阴性牛共418头,进行牛γ-干扰素试验。结果国产试剂盒对阳性和阴性样品的检测敏感性和特异性分别为95.2%和100%,与Priobics试剂盒的符合率为99.3%。表明国产试剂盒与进口试剂盒的检测能力一致,牛γ-干扰素检测方法准确可靠。5个牛场的3000头奶牛单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验阳性为138头,可疑105头。γ-干扰素试验对418头奶牛的检测,其中阳性74头,与颈部皮内变态反应（可疑牛暂时视为阴性）的符合率为60.5%。 相似文献
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鸡毒支原体PCR检测试剂盒的研制与应用 总被引：2，自引：0，他引：2
根据基因库中鸡毒支原体 1 6SrRNA的序列研制PCR检测试剂盒 ,用于检测鸡毒支原体 (MG)。结果表明该MG PCR检测试剂盒对不同MG参考菌株和地方分离株均能特异性地扩增出 732bp条带 ,而对其他禽支原体和禽病病原体的扩增结果为阴性。该MG PCR试剂盒最低能检测出 1 0 0fg的MGDNA模板。保存期测定结果表明 ,该MG PCR试剂盒在 - 2 0℃条件下保存至 1 ,3 ,6和 9个月时 ,其敏感性无明显变化 ,仍能检测到 1 0 0fg至 1pg的MGDNA模板。保存至 1 2个月时其敏感度虽降低了 1个滴度 ,但仍能 1 0 0 %检出人工感染鸡的临床样品 相似文献
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为寻求一种快速灵敏的环形泰勒虫病PCR检测方法,基于环形泰勒虫裂殖体表面蛋白（Theirelia annulata surface protein,TaSP）基因序列保守区设计特异性引物,通过PCR技术扩增出该基因长为393 bp的高免疫原性区片段。用该引物对环形泰勒虫、中华泰勒虫、瑟式泰勒虫、尤氏泰勒虫、吕氏泰勒虫、绵羊泰勒虫、马泰勒虫、驽巴贝斯虫、牛巴贝斯虫基因组模板进行特异性试验,对环形泰勒虫基因组模板进行梯度稀释后扩增,以确定试验的敏感性,同时用本试验建立的方法与常规显微镜镜检方法对150份血清样品进行检测。特异性试验结果显示,在被检测的9个样本中,只有环形泰勒虫基因组模板中扩增出了符合大小的特异核苷酸片段;敏感性试验结果表明,PCR对环形泰勒虫的扩增效率可达到10-10;通过对150份血清样品的检测,并与血涂片方法进行比较,结果显示PCR方法具有特异性强、敏感度高等特点,适用于牛环形泰勒虫病的检测。 相似文献
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牛副结核分枝杆菌实时荧光定量 PCR 检测方法的建立 总被引：1，自引：1，他引：0
根据GenBank上公布的牛副结核分枝杆菌C-2染色体的ISMav2基因保守区域序列设计合成1对特异性引物,建立了一套SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测牛副结核分枝杆菌(Mycobacterium paratuberculosis)的方法。以实验室构建的牛副结核分枝杆菌pMD-ISMav2阳性重组质粒为标准品,通过优化反应条件,建立了标准曲线,其相关系数为0.999。以构建的标准品为模板,进行了特异性和敏感性试验。结果显示,该方法检测布氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、链球菌DNA均为阴性;最低可检测到相当于每微升1.96×101拷贝数的标准品阳性质粒。本研究建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感和快速等优点,可用于牛副结核杆菌病的监测。 相似文献
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Laboratory confirmation methods are important in bovine cysticerosis diagnosis as other pathologies can result in morphologically similar lesions resulting in false identifications. We developed a probe-based real-time PCR assay to identify Taenia saginata in suspect cysts encountered at meat inspection and compared its use with the traditional method of identification, histology, as well as a published nested PCR. The assay simultaneously detects T. saginata DNA and a bovine internal control using the cytochrome c oxidase subunit 1 gene of each species and shows specificity against parasites causing lesions morphologically similar to those of T. saginata. The assay was sufficiently sensitive to detect 1 fg (Ct 35.09 ± 0.95) of target DNA using serially-diluted plasmid DNA in reactions spiked with bovine DNA as well as in all viable and caseated positive control cysts. A loss in PCR sensitivity was observed with increasing cyst degeneration as seen in other molecular methods. In comparison to histology, the assay offered greater sensitivity and accuracy with 10/19 (53%) T. saginata positives detected by real-time PCR and none by histology. When the results were compared with the reference PCR, the assay was less sensitive but offered advantages of faster turnaround times and reduced contamination risk. Estimates of the assay's repeatability and reproducibility showed the assay is highly reliable with reliability coefficients greater than 0.94. 相似文献
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A commercially available (cELISA) kit for diagnosing Anaplasma marginale infection in cattle was validated for diagnosing A ovis infection in sheep using the bovine serum controls as supplied by the manufacturer (BcELISA) and sheep serum controls from pathogen-free sheep (OcELISA). True positives were identified using two previously established assays, a nested PCR (nPCR) test and an indirect immunofluorescent assay (IFA). The BcELISA was also applied to sera from various species of wild ruminants, comparing the results with the IFA. Receiver operating characteristic (ROC) analysis indicated that the predicted threshold inhibition for the BcELISA was 19.2. The sensitivity for the BcELISA was 98.2% and the specificity was 96.3%. The predicted threshold inhibition decreased to 14.3 for the OcELISA; the sensitivity was 96.5% and the specificity was 98.1%. There was >/=90% concordance between IFA and nPCR, as well as between the BcELISA at 19% inhibition cutoff and either IFA or PCR. Concordance between the cELISA and IFA using sera from elk, mule deer, bighorn sheep, pronghorn antelope, and black-tailed deer ranged from 64% to 100%. This commercially available cELISA test kit can be used very effectively to test domestic sheep for infection with A. ovis using the kit-supplied controls (i.e. the BcELISA) and a 19% inhibition cutoff; the kit may also be useful for detecting intra-erythrocytic Anaplasma infections in wild ruminants. 相似文献
18.
Salimi-Bejestani MR McGarry JW Felstead S Ortiz P Akca A Williams DJ 《Research in veterinary science》2005,78(2):177-181
An ELISA was developed for the detection of Fasciola hepatica antibody in serum of cattle. The assay was applied to sera from 258 naturally infected cattle, 256 non-infected cattle and six calves experimentally infected with F. hepatica. The diagnostic sensitivity and specificity of the ELISA test was 98% (95% confidence intervals, 96-100%) and 96% (95% confidence intervals, 93-98%) respectively at a cut-off value of 15% positivity. The results using sera from the experimentally infected calves showed that antibodies were first detected 2-4 weeks after infection. The ELISA test was also compared to the commercially available Bio-X bovine F. hepatica ELISA kit. A subset of 39 positive sera and 47 negative sera were selected from the samples used to evaluate the in-house test. The results indicated that the agreement between the two tests was almost perfect (k statistic=0.82). 相似文献
19.
González Llamazares OR Gutiérrez Martín CB Alvarez Nistal D de la Puente Redondo VA Domínguez Rodríguez L Rodríguez Ferri EF 《Veterinary microbiology》1999,70(1-2):55-66
A field comparison of the interferon-gamma (IFN-gamma) assay and the single intradermal cervical tuberculin (SICT) test for the diagnosis of bovine tuberculosis was conducted. A total of 1136 cattle belonging to 85 herds placed in 'Castilla y León' (northwestern Spain) were chosen, and 21 of these herds were subjected to the diagnostic assays two or three times at intervals of at least 4 months. All the animals positive to any of the tests were slaughtered and tuberculosis was confirmed by culture isolation method (CIM) and further identification by means of PCR. Only 10.6% of cattle reacted with the bovine PPD in the SICT test, a percentage that increased to 12.8% in the IFN-gamma assay. The sensitivity of the IFN-gamma assay compared to CIM was shown to be higher (84.9%) than that of the SICT test (80.2%), but the combination of both tests offered the highest sensitivity (92.9%). The number of false positive reactors (those animals in which CIM was negative) was considerably higher for the IFN-gamma assay than for the SICT test and, conversely, the number of false negative animals (M. bovis isolation but negative immunological result) was higher for the skin test than for the interferon assay. In the herds tested twice, tuberculosis was eradicated after the second cycle of testing in 50%, and in 75% after the third cycle in herds tested three times. The combination of these two techniques instead of separately seems, therefore, to be useful in eradication programmes against bovine tuberculosis. 相似文献