共查询到19条相似文献，搜索用时 31 毫秒
1.
根据异性孪生不育母牛是性染色体嵌合体（XX/XY），而正常母牛性染色体型为XX这一现象，通过检测被检母牛体内是否存在Y染色体特异的Sry基因，研究开发了一种基于PCR技术的检测异性孪生不育母牛的方法。利用该项技术，可以快速、准确的检测出异性孪生不育母牛。 相似文献
2.
肌细胞生成素(myogenin,MyoG)在肌肉细胞分化过程中起着中心调控的作用。为了研究牛(Bos)MyoG基因启动子的启动效率和组织特异性。本研究首先克隆了牛MyoG基因启动子区域,以pDsRed2载体为外源载体,红色荧光蛋白为目的基因,构建了pDsRed-BosMyoG真核表达载体。利用脂质体介导转染体外培养的绵羊(Ovis aries)骨骼肌卫星细胞和成纤维细胞,最后通过实时定量PCR和Western blot检测红色荧光蛋白的表达,从而确定牛MyoG基因启动子的启动效率及组织特异性。结果显示,pDsRed-BosMyoG转染绵羊骨骼肌卫星细胞后在显微镜下可观察到红色荧光蛋白的表达,但在转染后的成纤维细胞中并没有观察到红色荧光蛋白的表达。在mRNA水平上,转基因骨骼肌卫星细胞中红色荧光蛋白mRNA表达量明显高于转基因成纤维细胞(P0.01)。Western blot结果显示,转基因骨骼肌卫星中高表达红色荧光蛋白,而在转基因成纤维细胞中并未检测到此蛋白。结果表明,本研究克隆得到的牛MyoG基因启动子可以特异性的在绵羊骨骼肌卫星细胞中驱动外源基因的高表达,是一种有效的肌肉细胞特异性启动子。克隆MyoG基因的启动子,探讨启动子区域的启动活性,有助于从理论上揭示MyoG基因表达的关键调控位点,同时也有利于揭示肌肉发育调控的相关机理,为改良家畜肉质研究提供实验依据。 相似文献
3.
为了分析定时输精技术在母牛繁殖过程中发挥的作用,为牛品种改良工作提供有效依据,将采用Ovsynch程序开展试验,对散养的母牛进行定时输精,统计分析母牛第一发情期的受胎率。试验结果显示,实施定时输精的实验组母牛的受胎率高达72.8%,高出自然发情母牛11个百分点。因此,可以将定时输精技术应用于牛品种的改良工作中。 相似文献
4.
纤维红外吸收特性及其在皮棉杂质检测中的应用 总被引：14，自引：0，他引：14
皮棉异性纤维杂质检测技术是近几年来国内外研究的难点。为有效检测皮棉中与棉纤维外观极其相似的异性纤维杂质，提出了一种显微近红外成像方法用于检测皮棉中异性纤维。该方法将棉纤维与异性纤维在特定红外波段的吸收特性差别，转化为近红外光谱成像系统中两者的灰度、形态图像特征差别，通过显微光路对图像特征差别放大，利用图像分割技术将异性纤维目标分割出来。试验结果表明，采用显微近红外成像方法捕获的图像中，异性纤维灰度、形态特征明显，其检测结果与实际相符，此方法可有效识别皮棉中异性纤维杂质。 相似文献
5.
基于自适应域值分割与力矩的棉花异性纤维分类方法 总被引：1，自引：1，他引：0
为能够准确统计出棉花中所含异性纤维的重量和数目,提出一种机器视觉与图像处理技术,对棉花异性纤维进行检测分类。在提取棉花异性纤维原始图像的基础上,采用灰度处理和滤波技术完成图像的预处理,采用自适应域值技术来完成棉花异性纤维图像分割,在分割出的二值化图像基础上,采用挖空内点法和邻域搜索法进行轮廓提取,提出以异性纤维轮廓的面积与周长平方之比作为力矩,对棉花异性纤维进行分类。通过对300个棉花异性纤维样本图像进行了试验,分类准确率可以达到96%。结果表明该技术和分类力矩可以准确的对棉花异性纤维进行初分类。 相似文献
6.
应用牙釉蛋白(AML)基因鉴别牛早期胚胎性别 总被引：2，自引：1，他引：2
牛牙釉蛋白（AML）基因定位于牛X染色体和Y染色体上的同源区域.实验根据牛X、Y染色体AML基因第五内含子上序列同源性只有45.1%以及X、Y染色体该区段之间存在多处碱基缺失的特点,合成了1对性别特异性引物.该引物经扩增后母牛只得到1条467 bp的来自X染色体的扩增条带,而公牛能得到1条源自X染色体的467bp片段的扩增条带和1条源自Y染色体的341 bp的扩增条带.经基因组DNA验证,该引物的公母鉴定准确率为100%,同时该对引物具有高度的牛特异性.定量分析AML基因引物的反应灵敏度,发现1次PCR（30个循环）能扩增出0.5ng的基因组DNA,2次PCR（共50个循环）能扩增出20pg的基因组DNA.将AML基因引物与SRY基因引物的反应灵敏度相比较,结果表明前者的灵敏度比后者的高8～10倍.用AML基因反应体系鉴定了26枚优质胚胎,其中24枚有扩增结果,13枚鉴定为公牛,11枚鉴定为母牛. 相似文献
7.
籼型光敏核不育水稻Hs—1可育和不育幼穗mRNA差异表达分析 总被引：8，自引：1，他引：8
本研究利用DD－PCR技术分析了光酶核不育籼稻Hs-1可育和不育幼穗mRNA的表达差异，结果表明：在148个DD－PCR反应中，10个反应可扩增出有差异且可重复的cDNA片段，其中4个反应可扩增出1－4条差异片段，6个反应可护增出4个以上的差异片段，且这些差异处段可只出现在可育幼穗中或同时出现在可育和不育幼穗中，共获得43个差异cDNA片段，其中21个可能与光敏核不育性相关，本研究认为，寻找光敏核不育基因在可育和不育条件下差异表达的起始发育时期是从mRNA水平分离这一基因的关键。光敏核不育基因的表达可能会引起其它一些mRNA的合成，从而产生较多的差异片段，进一步鉴定这些差异片段与不育的关系十分重要。 相似文献
8.
9.
牛血管生成素样蛋白4(Angiopoietin-like protein4,ANGPTL4)是一种与脂肪代谢相关的分泌蛋白,为研究ANGPTL4基因在调节脂肪和能量代谢中的作用,本实验采用DNA测序技术和PCR-RFLP技术,对南阳牛、郏县红牛、鲁西牛、秦川牛共计789头个体该基因的多态性进行了分析,并对检测到的多态位点与南阳牛的生长性状进行了相关性分析。多态性检测结果显示,该基因(NC_007305.4)第3和第5外显子各存在1处SNP(1422T>C,4899C>T),分别为错义和同义突变。相关性分析结果表明,2处突变位点不同基因型对南阳牛12月龄平均日增重均有显著影响(P<0.05);且第3外显子突变位点不同基因型对南阳牛12月龄体重指标也有显著影响(P<0.05)。研究结果提示,该基因2处突变位点有可能对牛的生长性状产生影响,可作为牛潜在分析育种标记。 相似文献
10.
甘蓝型油菜显性核不育系的分子标记辅助选择 总被引：2，自引：0，他引：2
为探究分子标记BE10对甘蓝型油菜显性核不育系选育中的作用,本研究以甘蓝型油菜核不育系为材料,利用分子标记BE10,检测甘蓝型油菜显性核不育系的自交分离群体和纯合型不育株,并通过田间育性观察,验证分子标记BE10辅助选择的可靠性。结果表明,基因型为MS5~aMS5~b的可育株自交,其后代的育性表现为3∶1(可育∶不育),基因型分离结果为1MS5~aMS5~a:2MS5~aMS5~b:1MS5~bMS5~b。选取可育株自交,三分之二的单株后代分离比例与上一世代相同,三分之一的单株后代群体因携带纯合型的MS5~a而表现为100%可育。利用分子标记BE10的辅助选择,不仅能鉴定出后代群体是否有MS5~b不育基因,提高不育系的选育效率,还能从育性表现为3∶1(可育∶不育)的自交系中筛选出纯合型不育株;结合无性繁殖技术,用纯合型不育株的无性系与临保系生产全不育系,可有效提高全不育系的纯度,为杂交种选育和杂交种子生产提供了新思路和新途径。 相似文献
11.
A novel approach to the quantification of bovine milk in ovine cheeses using a duplex polymerase chain reaction method 总被引：4，自引：0，他引：4
Mafra I Ferreira IM Faria MA Oliveira BP 《Journal of agricultural and food chemistry》2004,52(16):4943-4947
A duplex Polymerase Chain Reaction (PCR) method able to detect bovine milk in ovine cheeses was developed. This method is based on the mitochondrial 12S and 16S rRNA genes to generate fragments of different lengths. The proposed methodology presents an alternative DNA extraction procedure faster and more economical than the kits commercially available. A linear normalized calibration curve was obtained between the log of the ratio of the bovine band intensity and the sum of bovine and ovine band intensities versus the log of cow's milk percentage. The method was applied successfully to the detection and quantification of raw, pasteurized, and powdered bovine milk in different cheeses. The proposed duplex PCR provides a simple, sensitive, and accurate approach to detect as low as 0.1% bovine milk in cheeses and to quantify bovine milk in ovine cheeses in the range of 1-50%. 相似文献
12.
应用Real time PCR方法测定瘤胃液功能菌群数量 总被引：3，自引：1，他引：2
摘要：【目的】本文拟采用real time PCR技术对瘤胃液中三种功能菌即脂解厌氧弧杆菌（Anaerovibrio lipolytica,AL）,琥珀酸酸丝状杆菌(Fibrobacter succinogene,FS)和黄色瘤胃球菌(Ruminococcus flavefaciens,RF)的16S rDNA基因拷贝数进行测定,并建立起反映瘤胃液中三种功能菌的数量的方法。【方法】在相同日粮的情况下,不同个体牛在同一时间点、以及相同个体牛在不同时间点时采集瘤胃液微生物样品,并总DNA。根据三种菌16SrDNA保守序列设计特异性引物,利用Real time PCR技术考察三种功能菌的数量差异和变化。【结果】通过数据统计分析发现,不同个体动物间的三种功能菌的数量在相同时间点的差异不显著;而在不同时间点相同个体动物瘤胃中三种功能菌数量差异显著（P＜0.05）。 相似文献
13.
睾丸特异蛋白基因对奶牛早期胚胎性别的鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
为方便性别鉴定方法在现场应用，利用睾丸特异蛋白基因（TSPY）建立奶牛早期胚胎的非电泳性别鉴定方法。本实验首先设计并合成TSPY雄性特异引物和雌、雄共有引物并利用已知性别的奶牛血液DNA检测了利用TSPY基因鉴定胚胎性别的可能性。结果显示：雄性特异引物和共有引物对在10pg～60pg范围内性别符合率均为100%；采用非电泳的方法检测TSPY基因鉴定了49枚胚胎的性别，同时，用LAMP法对其中的6枚胚胎的性别鉴定结果进行验证，结果二者完全一致；对其中鉴定为雌性的21枚进行移植，结果9头出生的犊牛均为母牛。结果表明，TSPY基因是一个很好的雄性特异标记，非电泳检测TSPY基因对奶牛早期胚胎性别的鉴定结果准确可靠。 相似文献
14.
Lopparelli RM Cardazzo B Balzan S Giaccone V Novelli E 《Journal of agricultural and food chemistry》2007,55(9):3429-3434
Mozzarella cheese obtained from buffalo (Bubalus bubalis) milk is a typical Italian product certificated by means of the European Protected Designation of Origin (PDO). Mozzarella cheese can also be obtained from bovine milk or bovine/buffalo milk mixtures, but in this case, it cannot be sold as PDO product, and its label must report the actual ingredients. However, bovine milk in PDO products was frequently detected in the past, suggesting fraudulent addition or accidental contamination. Several methods based on end-point polymerase chain reaction (PCR) have been profitably applied in a large number of tests to detect the presence of undeclared ingredients, also in dairy products. In the present study we report a real-time PCR method able to quantify bovine milk addition to pure buffalo cheese products. We validated a normalized procedure based on two targets: bovine mitochondrial cytochrome b (cyt b) to detect and quantify the bovine DNA and nuclear growth hormone (GH) gene used as a universal reference marker. With the use of this real-time PCR assay, 64 commercial mozzarella di bufala cheese samples purchased at local supermarkets, dairy shops, or directly from cheese manufacturers were analyzed. The results obtained demonstrate that most of the commercial samples were contaminated with bovine milk. Therefore, this assay could be conveniently employed to carry out routine and accurate controls aimed not only to discourage any fraudulent behavior but also to reduce risks for consumer health. 相似文献
15.
建立了一种检测Ⅱ型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2)的实时荧光PCR(real-time fluorescence polymerase chain reaction)方法。用Primer Express2.0和Oligo6.0设计针对Ⅱ型猪链球菌荚膜抗原基因簇中cps2I基因的引物和Taqman荧光探针。通过常规PCR方法扩增得到81 bp DNA片段，克隆到pMD18-T载体，测序表明得到的序列为目的基因片段。在Lightcycler荧光PCR仪上对Ⅱ型猪链球菌的扩增曲线表明，该实时荧光PCR具有良好的特异性，可成功地扩增Ⅱ型猪链球菌，而参考猪链球菌(S.suis)、大肠杆菌(Escherichia coli )、沙门氏菌(Salmonella)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureu)、志贺氏菌(Shigella)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytoge)和空白对照都是阴性；该检测方法可达到检测10个细菌的灵敏度，反应过程仅需30 min完成；在两个不同时间检测同一浓度的菌液，每次做20个重复，2次检测所得的Ct (threshold，阈循环)值之间无统计学差异(P > 0.05)，方法稳定性好。该实时荧光PCR检测Ⅱ型猪链球菌的方法可用于出入境检疫和动物防疫监督部门的疫情监测。 相似文献
16.
应用PCR技术检测饲料中的鱼源性成分 总被引：1，自引：0，他引：1
PCR方法在动物源性饲料检测中有很好的应用前景。为了有效检测反刍动物饲料中的鱼源性成分，降低疯牛病传播风险，本研究根据鱼线粒体1DNA 6S rRNA序列设计并筛选了鱼源性特异引物，使用Qiagen公司的组织DNA提取试剂盒提取核酸。PCR特异性检测结果表明，引物NC_Fish2480/2501F/ NC_Fish2565/2586R与牛、羊、猪、鸡成分无交叉反应；灵敏性检测结果表明，该引物可以检测到0.1%的鱼源性成分。该方法的建立为饲料中鱼源性成分的PCR检测提供了依据。 相似文献
17.
Myoliquefaction of Pacific hake has been attributed to proteolytic action associated with parasitic infection. Among the two infecting species of Kudoa, Kudoa paniformis and Kudoa thyrsites, the former is reported to be more virulent for the "soft flesh" phenomenon in Pacific hake. The objective of this research was to develop a sensitive and specific polymerase chain reaction (PCR) assay to detect infection of hake by K. paniformis. Primers based on specific regions ( approximately 1562 bp) of the small subunit ribosomal DNA of K. paniformis successfully amplified the target DNA segments from both spore and muscle extracted DNA templates. DNA sequencing confirmed the veracity of this method to distinguish parasitic infection by K. paniformis versus K. thyrsites. The established PCR method was applied to investigate Kudoa infection in 44 Pacific hake samples using DNA extracted from muscle and/or spores, and the results were compared to infection evaluated by microscopic examination of extracted spores. 相似文献
18.
牛支原体(Mycoplasma bovis是感染牛的一种重要的致病性病原体.本研究利用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立了牛支原体的快速检测方法.该方法以牛支原体保守性基因uvrC为靶序列设计了5条特异引物,在58℃等温条件下,60 min即可完成反应.LAMP方法能检测出20 pg牛支原体DNA,较PCR方法高100倍,用牛鼻支原体(M.bovirhinis)、无乳支原体(M.agalactiae)、精氨酸支原体(M.ariginini)、牛副流感病毒(BPIV)、牛腺病毒(BADV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)作特异性检测,两种方法均有很高的特异性.本研究还将荧光显色剂钙黄绿素(calcein)和Mn2+用于LAMP反应结果的可视化检测.临床鼻拭子样品煮沸后,可直接进行等温扩增,省去了DNA提取步骤.在对167个临床鼻拭子样本的检测中,LAMP方法检测结果阳性率(26.95％)高于PCR方法检测出阳性率(19.16％),这证明本研究所建立的方法,与PCR法比较更适于临床样品的检测.研究结果表明,LAMP方法具有操作简便、快速、高效、敏感、特异、经济等特点,适于基层实验室监测的广泛使用. 相似文献
19.
He X Carter JM Brandon DL Cheng LW McKeon TA 《Journal of agricultural and food chemistry》2007,55(17):6897-6902
The castor seed contains ricin, which is one of the most potent biological toxins and is widely considered to be a threat agent for bioterrorism. In this study, a rapid and sensitive PCR method was applied to the detection of castor contamination in milk and liquid egg samples. The targeting gene sequence of the primer set, Ricin-F4/R4, was not found in either the bovine or chicken genome. Primers against a highly conserved sequence from the 18S ribosomal RNA gene were used as a positive control for DNA extraction and PCR reaction efficiency. The quantity and quality of DNA prepared from castor spiked or nonspiked milk and egg samples obtained from three different DNA extraction methods were compared. The cetyl trimethylammonium bromide (CTAB) method yielded the highest quality of DNA and is most suitable for the sensitive detection of castor DNA by real-time PCR in both milk and liquid egg matrixes. However, taking time and cost into consideration, a commercial kit designed for extraction of DNA from stool samples could be used as an alternative method for the routine extraction of DNA from milk for real-time PCR assays. The egg matrix was found to inhibit PCR amplification and interfere with two of the three methods tested for DNA extraction. Egg yolk had a greater negative effect on PCR amplification than the egg white matrix. Our results affirm the necessity of performing individual validations for each food matrix. Both real-time PCR systems used in this study, TaqMan and SYBR Green I dye, were capable of detecting 100 ng of castor acetone powder, corresponding to 5 ng of ricin, in 1 mL of milk or liquid egg, well below the toxic dose for humans. On the basis of these results, the real-time PCR method for detection of intentional castor contamination is applicable to milk and egg matrixes. 相似文献