鹅细小病毒VP2基因在大肠杆菌中的表达及纯化   总被引：2，自引：0，他引：2  

贺云霞  王君伟  王立群  Ulrich Neumann 《中国兽医学报》2004,24(2):126-128

将鹅细小病毒 (GPV) VP2基因插入原核表达载体 p PROEX- HTb,获得重组表达质粒 p PROEX- HTb- VP2。将其转化大肠杆菌 DH5α,用 IPTG诱导表达 ,表达菌体蛋白中可产生与预期大小相符的约 72 0 0 0的蛋白。以光密度扫描对该表达产物进行定量分析 ,表达产物约占菌体总蛋白的 14 %。经 His- tag金属螯合层析纯化 ,获得纯度较高的 6 His- VP2融合蛋白。 Western- blot结果表明 ,所得蛋白与鹅抗 GPV高免血清有较好的免疫反应性 ,说明在 VP2的 N端融合 6个组氨酸不影响其与特异抗体结合的活性。  相似文献   

副猪嗜血杆菌病研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

叶飞  贺云霞  徐慧  孙慧玲  王宏俊  龚玉梅  张培君 《动物医学进展》2011,32(2):101-104

副猪嗜血杆菌(HPS)是猪上呼吸道的一种常见病原菌.在一定的条件下,可引起猪的格拉瑟病(Glasser's disease),常与猪流感病毒并发,引起断奶前后仔猪以多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎等为特征的临床症状,给养猪业带来很大的损失.为了更加全面的了解该病原菌,论文就近年来副猪嗜血杆菌病的病原学、流行病学、致病机理、...  相似文献   

副猪嗜血杆菌外膜蛋白pilA基因的克隆与表达     

叶飞  张培君  田德雨  孙慧玲  王宏俊  龚玉梅  贺云霞 《安徽农业科学》2011,(13):7837-7838,7867

[目的]克隆和表达副猪嗜血杆菌菌毛蛋白pilA基因。[方法]对已发表的HPS的pilA序列进行分析,合成引物,并以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS的pilA编码基因,获得目的基因片段;构建重组表达质粒,经IPTG诱导表达至大肠杆菌BI21（DE3）中,进行SDS-PAGE与Western blot检测。[结果]表达的重组蛋白分子质量与预期的43 kD一致。[结论]该研究为制备亚单位疫苗和诊断试剂奠定了基础。  相似文献   

一例猪圆环病毒2型和大肠杆菌、溶血葡萄球菌混合感染的诊断   总被引：1，自引：1，他引：0  

徐慧  叶飞  贺云霞  李方正  龚玉梅  张培君 《中国畜牧兽医》2010,37(9):220-222

山东德州某猪场发生猪高热、呼吸系统疾病甚至死亡的疫情。采集病料提取病变组织总DNA或RNA进行猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒的PCR或RT-PCR检测。PCR扩增出353 bp的猪圆环病毒2型特异性条带。同时进行细菌分离培养、生化鉴定等试验,诊断为猪圆环病毒2型和大肠杆菌、溶血葡萄球菌混合感染。  相似文献   

副猪嗜血杆菌aroA基因自杀载体的构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

贺云霞  徐慧  叶飞  孙慧玲  王宏俊  龚玉梅  黄秀芬  张莉  张培君 《黑龙江畜牧兽医》2011,(13)

为了构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变自杀载体,试验采用自杀质粒介导的同源重组方法首先构建了自杀质粒pSD,根据副猪嗜血杆菌aroA基因设计PCR特异性引物,上游引物5'末端加BamHⅠ位点,下游引物5'末端加SalⅠ位点,PCR扩增aroA基因后连接到T载体,经酶切位点分析发现在aroA中有1个HindⅢ位点,将氯霉素表达盒通过该位点,构建T-aroA-cm载体,再通过BamHⅠ和SalⅠ将aroA-cm定向克隆到自杀质粒pSD中。结果表明:成功获得aroA基因插入突变自杀载体。说明进一步进行同源重组,从而构建副猪嗜血杆菌aroA基因插入突变株。  相似文献   

鹅细小病毒NS2基因的克隆和序列分析   总被引：5，自引：0，他引：5  

邢明伟  王君伟  贺云霞  布日额 《中国预防兽医学报》2003,25(3):195-197

本研究参考CerBank发表的GPV B株全基因序列，设计并合成一对引物，通过PCR技术扩增出GPV H1株NS2基因，目的片段长约1．4kb，将目的片段克隆到pMD18-T载体后进行序列测定和分析，结果表明：GPV H1株NS2基因全长1356bP，编码451个氨基酸，与国外已发表的GPV B株相比核苷酸序列同源性为98．75％，推导氨基酸序列同源性为98．67％。  相似文献   

副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白研究进展     

李淑芳  张培君  龚玉梅  侯娜  赵兴绪  贺云霞 《动物医学进展》2012,33(8):77-80

副猪嗜血杆菌是猪革拉泽氏病的病原体,该病是近年来严重危害养猪业的细菌性传染病之一,呈世界性分布。副猪嗜血杆菌相关致病性毒力因子的研究目前很少,关于转铁结合蛋白更是鲜为人知。在此对副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白的结构、形成机制、影响因素及其免疫原性进行综述,对阐明致病菌的慢性感染机理有一定的生物学意义。  相似文献   

鸡白痢沙门氏菌的分离与鉴定(英文)   总被引：1，自引：0，他引：1  

安辉  张大华  陈小玲  徐福洲  贺云霞  黄秀芬  李桂萍  孙惠玲 《农业科学与技术》2012,(3):661-663,668

[目的]探索20日龄雏鸡出现有关节肿胀,拉白色稀粪和少量死亡等症状的疾病病因,为鸡场的疾病诊断和防治提供建议和有效措施。[方法]采集病鸡样品并进行了细菌学检验。通过细菌分离、PCR、生化试验和回鸡试验鉴定出5株鸡白痢沙门氏菌。[结果]用这些分离株感染SPF雏鸡,能复制出与自然感染一致的病例。[结论]鸡白痢沙门氏菌是造成该养殖场本次疾病的主要病原。  相似文献   

溶血性曼氏杆菌的分离鉴定     

徐慧  贺云霞  龚玉梅  叶飞  王宏俊  孙惠玲  张培君 《黑龙江畜牧兽医》2009,(12)

溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)原名溶血性巴氏杆菌(Pasteurella haemolytica),是巴氏杆菌属的一个新成员.该菌是绵羊肺炎、新生羔羊急性败血症的病原菌,还可以导致牛的呼吸道疾病、羊的呼吸道疾病和败血症,也是牛的运输热、圈舍热的主要致病菌.  相似文献   

鹅细小病毒VP2基因原核及真核表达载体的构建   总被引：4，自引：0，他引：4  

贺云霞王君伟  马广鹏王立群 UlrichNeumann 《中国兽医科技》2003,33(5):30-33

将鹅细小病毒VP2基因在克隆到原核表达载体pPROEX-HTb及真核转移载体pFASTBAC-HTb中，重组真核转移载体在DH10BAC中经转座作用，成功构建了表达VP2基因的原核表达载体pPROEX-HTb-VP2和杆状病毒表达载体BAC-VP2。经限制性内切酶酶切及PCR分析，确定为阳性重组子。  相似文献