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传染性法氏囊病病毒VP2/VP0基因在重组鸡痘病毒中的表达 总被引:3,自引:1,他引:2
以鸡痘病毒复制非必需区TK基因为侧翼,在牛痘病毒A型包涵体晚期启动子(ATI)与16个串联的突变型早期痘苗病毒p7.5启动子组成的复合启动子的下游,分别插入编码传染性法氏囊病病毒(IBDV)结构蛋白VP2和VP2-4-3(VP0)的基因片段后,进行了同源重组和蓝斑筛选,获得2株重组病毒vUTALacVP2-7和vUTALacVP0-10。经ELISA、SDS-PAGE和Westernblot检测表明,重组病毒vUTALacVP2-7能表达VP2,vUTALacVP0-10能表达VP2和VP3,VP2和VP3的Mr分别为41000和32000。 相似文献
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绿脓杆菌外毒素A recA基因的融合及融合蛋白的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
将绿脓杆菌recA基因克隆到pUC18中,构建了中间载体pUCR18;然后以正确的向位及阅读框架将recA基因亚克隆到毒性基因缺失的绿脓杆菌外毒素A(PEA)基因中,构建了PEA-recA融合基因质粒pERA;融合基因经BamHI及EcoRI酶切,以正确阅读框架插入带有T7表达启动子的质粒pET-17b,构建了可表达PEA-recA融合基因的质粒pERA-17b。经酶切分析及PCR扩增检测证明,绿脓杆菌recA已插入PEA毒性基因中。pERA-17b转化到DE3溶原态大肠杆菌HMS174中,经IPTG诱导,表达了PEA-RecA蛋白。SDS-PAGE和凝胶薄层扫描PEA-RecA蛋白,表明PEA-RecA的分子量约为90000,与理论推算相符,表达率占菌体总蛋白量3.429%,用PEA抗血清和抗RecA单克隆抗体作免疫印迹分析,PEA-RecA与它们都有免疫学反应 相似文献
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组织型纤溶酶原激活剂基因在小鼠体内的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
将组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)基因cDNA经多次亚克隆插入到真核表达载体pSVL的SV40启动子和pcDNA3的CMV启动子下游,构建了重组质粒pSVL-tPA和pcDNA3-tPA。分别将这2种重组质粒直接注射于小鼠骨骼肌,观察了t-PA基因在小鼠体内的表达情况。体外凝血试验结果显示,注射重组质粒DNA后,第5天凝血时间有所延长,第15~20天达到高峰,小鼠体外凝血时间平均延长7min左右,延长时间与基因注射量呈明显的正相关。 相似文献
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不同启动子对重组痘苗病毒表达狂犬病病毒糖蛋白基因的影响 总被引:1,自引:1,他引:1
以血凝素(HA)基因为侧翼,将狂犬病病毒糖蛋白基因cDNA置于不同类型的痘苗病毒复合启动子下游,构建了4种表达质粒。重组表达质粒转染已感染WR株痘苗病毒的BHK21细胞,并通过鸡红细胞吸附试验,筛选、纯化出与表达质粒对应的4组HA-重组痘苗病毒:vSFJ1-10RVgp,vSFJ2-16RVgp,vRJ1-10RVgp,vRJ2-10RVgp。经间接免疫荧光试验(IFA)鉴定,从4组重组病毒中每组各鉴定出1株阳性重组病毒。Westernblot检测显示,重组病毒感染的BHK21细胞裂解物上清中有1种蛋白与抗RVGP的McAb发生特异反应,分子量为69000。在重组病毒感染早期,RVGP的表达量以vSFJ1-10RVgp最高;而在感染晚期,则以vSFJ2-16RVgp最高。4株重组病毒免疫小鼠,均能够不同程度地诱导小鼠产生抗RVGP特异性抗体。 相似文献
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人血清白蛋白(HSA)轩基因小鼠的制备 总被引:3,自引:0,他引:3
以绵羊金属硫蛋白基因(mTM)为启动子,构建了2种结构的HSA质粒:poMTHSA和poMTHSAUD。其中poMTHSA是将HSAcDNA直接置于oMT启动子的控制下,以PSPORT1为载体构建而成;而POMTHSAUD另融有HSA基因5,3侧翼序列(包括内含子1,2,13,14)。将这2种结构的质粒用NotⅠ线化后,注入昆明种小鼠受精卵的雄原核,再移植到假孕受体鼠的输卵管。共注射577枚受精 相似文献
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猪生殖和呼吸综合征中国分离株ORF7基因的克隆及鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究利用对应于ATCCVR-2332及LVORF7基因保守序列的1对均为28个碱基的引物10011PCS、1010PCR对PRRSV中国分离株B13进行RT-PCR,结果扩增出了1条包括完整ORF7基因的510bp的DNA片段。纯化此扩增产物,并对其进行EcoRI/PstI双酶切,与用EcoRI、PstI双酶切及碱性磷酸酶处理的PUC18载体连接。转化大肠杆菌。结果得到了1个B13ORF7基因与PUC18载体的重组质粒PUC18B13ORF710。通过EcoRI/PstI及PCR证明此重组质粒即为B13ORF7基因与PUC18载体的重组质粒。从而为ORF7基因及所表达的核衣壳蛋白进一步研究奠定了基础。 相似文献
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NDV融合蛋白裂解位点基因的重组昆虫杆状病毒表达载体的构建… 总被引:1,自引:0,他引:1
将新城疫病毒(NDV)F46E9株和LaSotaE4株的融合蛋白裂解位点(Fc)基因从本实验室构建的重组质粒pUCF46Fc和pUCLaFc中用EcoRI和SalI切出。将这2个毒株的Fc基因定向克隆入昆杆状病毒表达载体pSXIVVIX3的EcoRI和SalI位点之间,获得2个毒株的Fc基因克隆pX3F46Fc和pX3LaFc。重组质粒用EcoRI/SalI,PstI酶切法,PCR和核酸探针法进行 相似文献
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利用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增克隆传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)HZ株VP2基因,并对VP2基因全序列测定,序列分析和聚类分析,同时将 VP2基因与真核表达载体 pcDNA3相连接。结果克隆到 VP2基因全序列共 1356bp,分析表明HZ株与欧洲超强毒株UK661高度相似,同时将VP2基因正向插入pcDNA3的CMV启动子下游,得到了VP2基因的真核表达质粒。为IBDV分子流行病学和基因工程疫苗的研究奠定了物质基础。 相似文献
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从母牛接种过A组BRV株NCDV-Lincoln(P1:G6)苗的两个吡邻牛场分离到两株牛轮状病毒(BRV),编号为NS-1和NS-2,Northern-blotting试验表明,NS-1和NS-2有相的的A组RNA电泳模式,而且全部基因片段同源,体外中和试验表明,NS-1株病毒能被G6特异性单克隆抗体(McAs)和抗BRVB641株(P5:G6)豚鼠高免血清(GPAS)中和,但不被G10特异性M 相似文献
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以PstI酶切含禽多杀性巴氏杆菌保护性荚膜抗原基因片段PCA10的重组质粒rPCA10,收集基因片段PCA10,经修饰后依次连接到系列高效表达载体PEV—Vrf1~3的BamHI切点上,转化至E.coliRRI(pRK248cIts)中。经快速检测,这3种载体的重组子中均有PCA10插入。以间接ELIsA检测重组子转化菌,只有PEV—Vr13载体的重组子转化菌与禽巴氏杆菌保护性荚膜抗原(PCA)抗血清呈阳性反应,且OD值为原克隆菌株rPCA10的3倍,初步证明PC10已克隆至高效表达载体PEV—Vrf3上,而且读码框架正确。用ELIsA阳性表达克隆株PcA71—Vrf3免疫小鼠和鸡,均达到70%的保护率。 相似文献
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作者对传染性氏囊病病毒(IBDV)变异株GES的大基因片A编码的VP3结构基因进行修饰,使之编码中和表位B69。该表位只在HBD古典株中发现,将可编码VP,VP4和修饰的IBDV变株VP3各结构蛋白的较大片段A的嵌合性cDNA克隆在重组件状病毒中表达。用一组中和性单克隆抗体(MAb)对所表达的嵌合性蛋白进行测定,表明该嵌合性蛋白不但包含GLS变异株的所有表位,而且包含只在古典株中发现的B69中和表 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的表达 总被引:11,自引:2,他引:11
将含有传染性支气管炎病毒(IBV)广东地方分离株D41的S1基因cDNA(从ATG到S前体蛋白裂解位点)的片段克隆到具有多角体启动子(PXIV)和人工合成启动子(Psyn)的杆状病毒转移载体质粒pSX-IVVI+X3中,构建了重组转基因载体质粒pSXIVVI+X3-S1.D41。用该重组转移质粒与无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒TnNPV-SVI-GDNA(occ-,gal+)共转染草地夜蛾(Sf9)细胞,筛选并纯化出既能表达S1基因又能形成多角体的重组病毒TnNPV-IBVS1-occ+(occ+,gal-)。通过间接ELISA和Western-blot等方法在感染了重组病毒的Sf9细胞中成功地检测到分子量约62000的S1基因表达产物。虽然该重组S1糖蛋白可能由于N-糖基化不完全而分子量小于天然蛋白,但它可以像正常病毒粒子一样,被鸡抗IBVD41株血清特异识别。 相似文献
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将新城疫病毒(NDV)F46E9株和LaSotaE4株的融合蛋白裂解位点(Fc)基因从本实验室构建的重组质粒pUCF46Fc和pUCLaFc中用EcoRI和SalⅠ切出。将这2个毒株的Fc基因定向克隆入昆虫杆状病毒表达载体pSXIVVI+X3的EcoRI和SalⅠ位点之间,获得2个毒株的Fc基因克隆pX3F46Fc和pX3LaFc。重组质粒用EcoRI/SalⅠ、PstⅠ酶切法、PCR和核酸探针法进行了鉴定,证明插入的基因来自pUCF46Fc和pU-CLaFc,插入的位置和方向都正确。这2个载体的构建为Fc基因在昆虫细胞系统的表达创造了条件。 相似文献
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应用杆状病毒系统高效表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GPS基因 总被引:1,自引:0,他引:1
将猪繁殖与呼吸综合征症病毒CH-al株囊膜糖蛋白(GP5)一向克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHisB中,与太毒线性DNA(Bac-N-Blue^TMDNA)共转染昆虫细胞sf9,经过三轮蚀斑纯化后,获得重组杆状病毒rBac=GP5。用该重组病毒感染sf9细胞后,应用间接免疫荧光试验、SDS-PAGE和Western blot检测表明,GP5基因在杆癍病毒系统中获得了高效表达,表达产物因糖基 相似文献
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以PCR方法克隆得到猪源大肠杆菌ST1基因缺失CooH端了后两个编码密友和终止密码的DNA片段,并以该片段为探针,筛选了以载体pBluescript构建的猪大肠力P55质粒DNA文库,得到插入片段约5.5kb阳性克隆,亚克隆了约0.5kb含ST基因的TaqI酶切片段,并对该基因核苷酸序列进行了分析。应用竞争性ELISA测定了ST基因在不同启动子调控下的表达情况,在T7启动子调控下,ST基因在大肠 相似文献
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编码在IBDV变异株GLS大基因组片段A的VP2结构基因经过修饰后,编译出只在IBDV标准株才能见到的中和表位,编码有VP3,VP4的大片段A的一个嵌合cDNA克隆和修饰过的变异IBDVVP2结构蛋白在一重组杆状病毒中得到表达。用一组中和单抗(MAb)对表达的嵌合蛋白评价后指出,此嵌合蛋白不仅含有以前用MAb鉴定过的所有GLS变异株表位,而且还含有只有标准株才见到的B59中和表位,这种亚单位疫苗对 相似文献
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将马立克氏病病毒gB基因用EcoR I从质粒pUR-MDVEgB中切下。两端补平后,插入到质粒pEFgpt12s的Pst I酶切位点。构建了含有完整的MDVgB基因的转移载体pEFgpt12s-gB。这个载体的特点是,它含有两个启动子,在强的复合启动子Spromoter的下游是插入的gB基因,另一个反向启动子vvP7.5的下游 是标记基因Ecogpt,它的两端是FPV的非必需区。携带gB基因的质粒pEFgpt12s-gB通过磷酸钙的方法转染用282e4株FPV感染3-4h的鸡胚成纤维细胞。通过药物筛选 ,得到含有gB基因的重组病毒。通过PCR、免疫荧光检测,证实了重组病毒中含有gB基因,并且gB糖蛋白也得到了表达。 相似文献