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1.
本研究将GHRH基因克隆到塞姆利基森林病毒(SFV)复制子质粒型表达载体pCMV-Rep-lacZ,构建了真核表达载体pCMV-Rep-GHRH。采用脂质体介导将表达质粒pCMV-Rep-GHRH转染293细胞,经RT-PCR、IFA、Tricine-SDS-PAGE和Western Blot检测,证明表达质粒pCMV-Rep-GHRH在293细胞中正确地表达了GH-RH多肽分子。本研究还利用放免法检测质粒载体转染细胞培养上清中GHRH浓度,初步比较了RNA复制子载体pCMV-Rep-GHRH和普通载体(pIRES-GHRH和pcDNA3-GHRH)的表达效率,结果表明,转染48 h,RNA复制子载体表达GHRH的含量显著高于普通载体,分别比pIRES-GHRH和pcDNA3-GHRH高出36.12%(P<0.05)和67.94%(P<0.05)。结论:构建的真核表达载体pCMV-Rep-GHRH能够在真核细胞293中表达GHRH多肽分子,且表达水平显著高于普通载体,为下一步更好地调控动物生长以提高动物生产性能奠定基础。 相似文献
2.
猪日本乙型脑炎病毒(JEV)是引起以母猪流产为主要特征的繁殖障碍性疾病病原之一,笔者拟构建JEV的DNA型复制子载体,并利用该载体表达外源基因。以JEV毒株SA14-14-2为基础,去除病毒结构蛋白基因prM和部分E基因而保留全部非结构蛋白和非编码区序列,插入FMDV2A和丁肝病毒核酶序列构建复制子表达载体pAC-JEV,实时定量PCR、间接免疫荧光、Western blotting方法检测JEV自身蛋白(NS3)表达,验证复制子的自主复制能力。在pAC-JEV的结构蛋白C基因下游插入EGFP基因、猪流感病毒的HA和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的GP5基因构建重组复制子pAC-JEV-EGFP、pAC-JEV-HA、pAC-JEV-GP5和NS5基因缺失载体pAC-JEV-ΔNS5,该复制子载体转染BHK-21,荧光显微镜直接观察EGFP表达,Western blotting方法检测外源蛋白质(GFP、GP5、HA)表达情况。结果表明:随着转染时间延长,复制子转染细胞内NS3的表达逐渐增加,表明所构建的JEV复制子表达载体具有自主复制能力。EGFP mRNA转录水平和EGFP蛋白质荧光信号随着转染时间的延长逐渐增加,并且荧光信号可持续8d以上,携带猪流感病毒的HA和猪繁殖与呼吸综合征病毒的GP5基因的复制子载体转染BHK-21细胞后,HA和GP5能有效表达,说明复制子具有表达外源蛋白质的能力。该复制子表达载体的成功构建,为深入研究JEV各蛋白质的功能、各蛋白质与细胞内蛋白质相互作用关系以及基于复制子载体的疫苗开发等提供了技术平台。 相似文献
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甲病毒属于披膜病毒科,是一类有包膜的单股正链RNA病毒。近些年来,国内外有关甲病毒载体的研究非常活跃,其已被用于疫苗研究、基因治疗以及分子生物学等研究领域。基于甲病毒载体的构造原理,将其分为三类,分别为复制完全型载体、复制缺陷型载体和DNA/RNA载体。就这三类载体的改造过程进行了探讨,并对这三类载体的特点及其应用研究进展等方面进行了阐述,以期为开发出更安全、更有效的甲病毒载体提供参考。 相似文献
4.
构建了小反刍兽疫病毒(PPRV)辅助质粒和微型复制子(minireplicon)并进行功能学研究。RT-PCR克隆PPRV疫苗株N75/1N、P和L基因,亚克隆至有T7启动子的原核表达载体pGEM3Z构建完成3个辅助质粒,分别命名为pGEM3Z-N、pGEM3Z-P和pGEM3Z-L,并通过全基因合成构建含PPRV病毒5′端启动子序列(AGP)、3′端启动子序列(GP)、T7转录终止信号、丁型肝炎病毒核酶序列HamRZ及氯霉素乙酰转移酶(CAT),获得PPRV微型复制子重组质粒pGEM3Z-CAT。构建完成的微型复制子及辅助质粒在表达T7RNA多聚酶(T7RNP)感染痘病毒VTF7-3后,通过脂质体法优化4种质粒配比,并将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光分析CAT的表达情况,荧光显微镜观察到荧光的表达,并通过免疫印迹分析CAT蛋白的表达,表明构建的PPRV微型复制子具有转录和复制功能,这将有助于进一步开展以PPRV反向遗传操作为基础的免疫学及蛋白功能研究。 相似文献
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为评价马流感病毒(EIV)HA基因核酸免疫效果,本研究以甲病毒复制子载体pSFV1CS分别构建了表达EIV H3N8亚型的美洲型和欧洲型HA基因的重组真核表达质粒。并将其转染293T细胞,经间接免疫荧光鉴定表明HA基因获得表达;以重组质粒免疫的BALB/c鼠能够检测到特异性抗体产生,而且HI抗体水平持续升高,同时小鼠体内IFN-γ、IL-4分泌水平也有所升高。攻毒后小鼠表现轻度临床症状,但病毒分离和RT-PCR均未检测到病毒。上述结果表明,该重组质粒pSFV1CS-EIV-HA具有良好的免疫原性并且可以诱导免疫动物产生较高免疫应答的能力。 相似文献
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"自杀性"DNA疫苗研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
DNA疫苗作为第三代全新的疫苗,具有传统疫苗和其他基因工程苗不可比拟的优点.但由于其安全性方面存在着一些尚待解决的问题,使得实际应用受到限制."自杀性"DNA疫苗是基于常规的DNA疫苗和自主复制型RNA疫苗而发展起来的一种新型疫苗.由于其制备原理和过程与常规DNA疫苗相类似,所以它具备常规DNA疫苗在制作、运输储存以及免疫等各方面的优点.同时由于它以甲病毒复制子为基础能诱导转染细胞自主凋亡,故比常规DNA疫苗更为安全有效.文章针对"自杀性"DNA疫苗载体的构建、作用机理、优点以及国内外研究情况作一介绍. 相似文献
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广义的"羊痘"包括山羊痘、绵羊痘和结节皮肤病,是羊、牛等反刍动物的重要皮肤传染病,三者分别由山羊痘病毒(Goatpox virus, GTPV)、绵羊痘病毒(Sheeppox virus, SPPV)和结节皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus, LSDV)感染引起,也可交叉感染。GTPV、SPPV和LSDV同属于痘病毒科(Poxviridae)羊痘病毒属(Capripoxvirus)成员,三者统称"羊痘病毒(capripoxvirus, CaPV)"。CaPVs基因组为两端共价闭合的线性双链DNA,对外源基因容纳性较强。病毒本身具有强启动子,可启动外源基因的转录进而对其进行蛋白表达。因此,CaPVs是理想的活疫苗载体,可在体内表达外源抗原并诱导特异性免疫反应。文章综述了CaPVs的基本特征、弱毒活疫苗及CaPV活载体疫苗的研究进展,以期为CaPV活载体疫苗的研究提供参考。 相似文献
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家蚕质型多角体病毒RNA聚合酶的基因克隆及鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RDRP)是RNA病毒增殖复制的重要酶类,具有转录酶和聚合酶的双重活性.家蚕质型多角体病毒(Bombyxmoii cytoplasmic polyhedrosis virus,BmCPV)是呼肠孤病毒科,质多角体病毒属的代表种,为双链RNA病毒.已有的BmCPV冷冻电镜三维重构的研究结果表明,在病毒衣壳五重轴的内表面各有一花形结构,位于B-突起(B-spike)的近内侧,推测为转录酶复合物(TEC),可能是BmCPV结构蛋白VP2的对应成分. 相似文献
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绪言牛白血病病毒(Bovine Leuko virus)属于反录病毒科(Retroviridae)RNA肿瘤病毒亚科(Oncovirinae)中的牛C型肿瘤病毒属(Bovine type C Oncovirus group)成员。 相似文献
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八、披风病毒科(Togaviridae) 1.甲病毒属(Alphavirus) 代表种:辛得比斯病毒(Sindbis virus); 其他种:包括方马脑脊髓炎病毒(Fastern equine encephalomyelitis virus)、Semliki森林病毒(Semliki forest virus)、委内瑞拉马脑脊髓炎病毒(Venezuelan equine encephaomyelitis virus)、西方马脑脊髓炎病毒(Western equine encephalomyelitis virus)等24个种。 相似文献
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《中国动物传染病学报》2016,(2)
为研究猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)编码的微小RNA(micro RNA,mi RNA)的功能,本研究通过生物信息学预测结合双荧光素酶报告系统验证方法,对病毒mi RNA(virus mi RNA,vmi RNA)进行靶基因鉴定。结果表明,PRV编码的prv-mi R-LLT1、prv-mi R-LLT7和prv-mi R-LLT9对病毒转录极早期基因IE180有抑制作用,prv-mi R-LLT7对参与调控病毒复制的UL48基因有抑制作用。初步研究表明这些vmi RNA可能在病毒感染过程中具有基因调控作用,本研究结果为进一步研究PRV vmi RNA在病毒复制、免疫逃避及潜伏感染过程中的功能奠定了基础。 相似文献
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麻疹病毒属病毒非结构蛋白结构及功能研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
麻疹病毒属在分类上属于副黏病毒科副黏病毒亚科,其成员包括麻疹病毒(Measles virus,MV)、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)、牛瘟病毒(Rinderpest virus,RPV)、海豹瘟病毒(Phocine distemper virus,PDV)和小反刍兽疫病毒(Peste-des-petits-ruminants virus,PPRV). 相似文献
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本研究利用RNAi介导的病毒抗性的原理,以柑橘上发生频繁、危害严重的柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)为研究对象,以期得到对CYVCV具有抗性的转基因植株。根据CYVCV的CP基因和RP基因序列设计含有不同酶切位点的特异性扩增引物,获得RNA干扰片段,分别构建RNA干扰载体ihpCP-pGN、ihpRP-pGN和ihpCPRP-pGN,将干扰载体转入农杆菌EHA105后,采用农杆菌介导法进行柑橘的遗传转化,获得两株转基因阳性植株,为培育抗CYVCV病毒柑橘品种提供技术参考和理论基础。 相似文献
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通过负链RNA病毒反向遗传操作技术,成功救获了表达增强绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组印地安纳株水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus Indiana serotype)、救获的重组病毒保持了野生型VSV高滴度生长特性,细胞连续传代10次仍保持GFP的稳定表达及生物学特性不变。本研究为VSV作为新型重组活病毒载体疫苗和肿瘤治疗载体研制及基础病毒学相关研究提供了理想的技术平台。 相似文献
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自2005年从幼儿检测到博卡病毒(Boca virus)以来,包括中国在内的很多国家报道了人的博卡病毒感染和研究情况,自2009年从猪群中检测到博卡病毒以来,包括从临床健康猪、断奶多系统衰竭综合征、高热病和具有腹泻症状的猪群中检测到博卡病毒的报道也陆续增多.但其致病性研究还不够,进一步研究博卡病毒具有重要的现实意义.
1 病毒
博卡病毒(Boca virus)是细小病毒科、细小病毒亚科、博卡病毒属的成员.包括人博卡病毒(Human Boca virus,HBoV)、猪博卡病毒(Porcine Boca virus,PboV).PboV与犬小病毒(Canine minute virus,MVC)和牛细小病毒(Bovine parvovirus,BPV)同源性较高. 相似文献
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冠状病毒属于尼多病毒目(Nidovirales),冠状病毒科(Coronaviridae),冠状病毒属(Coronavirus)成员,为单股正链RNA病毒,根据其基因组和抗原性的特征又分为3个群:第1群主要包括猪传染性胃肠炎病毒(Transmissiblegastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV)和人冠状病毒229E(Humancoronavirus 229E,HcoV-229E);第Ⅱ a群主要有小鼠肝炎病毒(Mouse hepatitis virus,MHV),第Ⅱ b群主要有严重的急性呼吸综合征冠状病毒(Severe acute respiratory synd-rome coronavirus,SARS-CoY);第Ⅲ群主要包括鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,my)、人冠状病毒0C43(Human coronavirus NL63,HCoV-NL63)[1,2]. 相似文献
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《中国预防兽医学报》2022,(2)
盖塔病毒(Getah virus,GETV)是一种由蚊媒传播的单股正链RNA病毒,属于披膜病毒科甲病毒属.该病毒自1955年在马来西亚分离至今,已遍布欧亚大陆和东南亚,1964年在中国南部的海南省首次发现GETV,迅速蔓延,近年来我国报道已有超过15个省份出现动物盖塔病毒疫情,造成一定的经济损失.该病毒宿主范围广,在猪... 相似文献