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DDRT-PCR技术研究进展 总被引：2，自引：0，他引：2
mRNA差异显示技术能简便快速地了解不同细胞或者同类细胞在不同生长阶段、不同生理条件下的基因表达情况,为研究生命活动过程提供重要信.本文对差异显示技术的基本原理、方法改进以及应用进行综述. 相似文献
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mRNA差异显示技术自1992年建立以来,成为分子生物学领域的一个研究热点,并在许多领域得到了较为广泛的应用.阐述了mRNA差异显示技术的基本原理,综述了其现存的问题及近几年该技术的改进、完善与发展.如引物设计、PCR参数优化、假阳性克服、cDNA片段克隆测序及完整基因的筛选.此外,对其在植物抗病基因克隆研究中的应用做了简要介绍. 相似文献
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[目的]研究不同发育时期牛体外受精胚胎在基因表达模式上的差异。[方法]利用单个胚胎mRNA差异显示技术,对单个8细胞期胚胎与囊胚进行mRNA差异显示,获得1条特异表达条带,对其进行克隆、测序,并与GenBank进行对比。[结果]该序列与牛核糖体蛋白L31（ribosomal protein L31,RPL31）基因序列具有99%的同源性。采用实时定量PCR技术检测8细胞期和囊胚期胚胎RPL31的mRNA表达量,结果表明,RPL31在8细胞期胚胎的相对表达量为囊胚期胚胎的3.2倍。[结论]为揭示和阐明控制牛早期胚胎发育的相关机理提供依据。 相似文献
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目的 利用mRNA差异显示技术有效地比较组织或细胞间的差异表达基因。方法 以玉米自交系B37Htl与玉米大斑病菌0号及1号小种构成非亲和性互作与亲和性互作体系,利用mRNA差异显示技术对接种玉米大斑病菌后玉米叶片早期表达基因进行分析,寻找玉米抗大斑病相关基因表达片段。结果 提取玉米总RNA;经引物筛选。获得8条随机引物;经聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测,获得差异片段62条。结论 利用mRNA差异显示技术能够获得玉米抗大斑病相关基因片段。 相似文献
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简述了 m RNA差异显示技术的基本原理及其在基因表达差异、基因的鉴定与克隆、激素调控机理、抗逆性机理等方面的应用 ,并对其在植物生理研究中存在的问题与改进的方法做了介绍 相似文献
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以西瓜花蕾为材料,初步建立了mRNA差异显示技术体系。利用改进的SDS/酚法、改进的异硫氰酸胍法和BIOZOL试剂提取法提取西瓜花蕾总RNA,比较RNA产率、纯度和电泳图谱等分析来确立适于西瓜花蕾RNA分离的方法。研究结果表明,改进的异硫氰酸胍法提取的RNA呈现28S rRNA,18S rRNA和5S rRNA 3条较清晰的条带,其A260/A280值可达1.944,具有很高的纯度。用异硫氰酸胍法提取的总RNA进行差异显示分析表明,可得到理想的扩增片段。 相似文献
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利用DDRT-PCR技术,比较了1 mmol/L SA诱导第4天与未经SA诱导的甜瓜感白粉病品种卡拉克赛的基因表达差异.共获得差别条带19条,在SA诱导后出现差异带15条,在未诱导的对照中出现差异带4条.对其中的8条差异片段回收、克隆,用EcoRI/HindIII双酶切和PCR扩增.对其中的cDNA3-4-1测序,在BLAST上比较同源性,发现其与拟南芥热激转录因子hsf8基因具有83%的核苷酸同源性.说明1 mmol/L SA处理的甜瓜叶片在mRNA水平上发生了明显的变化,SA诱导了热激转录因子hsf8基因的大量表达,从而可能影响热激蛋白hsp70的表达,对维持蛋白质结构,稳定胞内环境具有积极作用. 相似文献
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水稻滇一型不育系及保持系花药mRNA差异显示* 总被引：2，自引：0，他引：2
运用mRNA差异显示技术,对水稻滇一型雄性不育系和保持系花药基因表达差异进行了比较研究。以专门设计用于差异显示的90对PCR引物组合,分析滇一型10对不同品系的不育系和保持系花药基因表达差异。结果表明:这90个引物组合均有扩增产物,扩增的cDNA片段在100～2000bp之间;不育系和保持系花药cDNA扩增带型相似。在这90个引物组合中仅有15对引物组合在单对的不育系和保持系间显示多态性,而且大多数的多态性引物组合仅扩增出一条差异带。在所找到的差异中,一般总是保持系有一条带,而不育系没有对应的带或是一条很弱的带。该结果表明不育系和保持系花药mRNA差异很少。所幸的是,在这些引物组合中,只有T8×P1引物组合(5′-ATGCTGAGTGATATCTTTTTTTTTG×5′-ATTAACCCTCACTAAATGCTGGGGA-3′)在10对不育系和保持系间扩增出一个共同的差异cDNA片断:保持系在750~1000bp之间有一条带,而不育系没有对应的带或是一条表达很弱的带,这很可能就是保持系和不育系的育性基因表达差异的结果。 相似文献
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聚合酶链式反应技术的研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
聚合酶链式反应技术自诞生以来,已在生物学及相关学科中得到了广泛应用,并得以不断的深入和发展。本就近年来研究和发展出现的一些特殊ＰＣＲ技术,如：逆转录ＰＣＲ、反向ＰＣＲ、定量ＰＣＲ、锚定ＰＣＲ、重组ＰＣＲ、长ＰＣＲ、热起动ＰＣＲ、免疫ＰＣＲ、复合ＰＣＲ、差向显示ＰＣＲ等作一简这,以供参考。 相似文献
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提出了２种在西文ＤＯＳ环境下用ＰＡＳＣＡＬ语言编程直接显示点的阵汉字的方法，并系统地总结了直接显示汉字的种种途径和实现方法，给出了部分示例源程序，评述了各方法的性能 相似文献
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RNA分子表达技术研究进展 总被引：3，自引：0，他引：3
RNA作为基因表达的产物,在基因研究中处于重要的地位。随着生物技术的发展,越来越多的RNA分子技术被建立起来,为基因克隆和基因表达研究提供了有利的工具。根据RNA分子表达技术的技术基础,将RNA分子技术分为4类:以分子杂交为基础的差示筛选、扣除杂交、RNase保护分析、基因芯片和微阵列;以PCR技术为基础的差异显示PCR、cDNA扩增片段长度多态性;以消减杂交和PCR相结合为基础的cDNA代表性差示分析、抑制性消减杂交、交互式扣除RNA差别显示技术、全长基因获得消减杂交、基因鉴定集成法、快速消减杂交;以测序为基础的表达序列标签、基因表达系列分析、表达序列标签串联排列连接、GeneCalling等技术。 相似文献
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【目的】克隆分析凡纳滨对虾HSPIO~因,为研究其在寒冷耐受过程中发挥调控功能提供参考依据。【方法】搜索EST库获得凡纳滨对虾HSPIO~因序列,再通过RACE—PCR扩增获得凡纳滨对虾HSP10基因cDNA全长序列,对其进行生物信息学分析,并通过荧光定量PCR分析HSPIO基因的组织表达及低温胁迫下表达量的变化。【结果】凡纳滨对虾HSP10基因cDNA全长720bp,包含306bp的开放阅读框,编码102个氨基酸。以各物种的HSP10蛋白序列构建系统进化树,能较好反映各物种间的进化关系。荧光定量PCR分析结果显示,凡纳滨对虾HSPIOmRNA在各组织中呈遍在表达,其中以肌肉中的表达量最高。低温表达谱分析结果显示,凡纳滨对虾HSPIOmRNA在低温处理凡纳滨对虾的各组织中均呈下调表达,当处理温度降至13℃,其在肝胰腺中表达量降至最低。【结论】凡纳滨对虾HSP10在结构和进化上较保守,其mRNA表达量在低温胁迫下呈下降趋势,可能在寒冷耐受过程中发挥负调控作用。 相似文献
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油菜花粉多糖对荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α产生及其mRNA表达的影响 总被引：2，自引：0，他引：2
【目的】研究油菜花粉多糖（LBPP）对荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α的诱生及其mRNA表达的影响。【方法】通过动物抑制性肿瘤法制备肿瘤模型,采用双抗体夹心ELISA法检测IL-2、TNF-α含量,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测IL-2、TNF-α mRNA的表达。【结果】LBPP有明显抗肿瘤作用,200 mg•kg-1高剂量组抑瘤率可达51.26%,明显优于环磷酰胺46.22%;LBPP可显著促进荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α分泌（P＜0.01）,提高荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α mRNA的表达（P＜0.01）,高剂量组提高率分别达56.37%、105.24%、1364%和1289%。【结论】LBPP通过提高机体IL-2、TNF-α mRNA的表达而发挥抗肿瘤作用。 相似文献
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[目的]研究紫锥菊多糖(EPS)在内毒素(LPS)损伤小肠上皮细胞(IEC-6)时对肿瘤坏死因子(TNF)表达的影响,以探讨 EPS对损伤细胞的作用机制。[方法]采用 TRIzon试剂提取总RNA,RT-PCR扩增 TNF-α mRNA,琼脂糖凝胶电泳,并进行电泳及图像分析。[结果]50μg/ml EPS 可以部分抑制 LPS 刺激 IEC-6产生的TNF-α mRNA水平,而200、500μg/ml EPS随着浓度的增加,其抑制 TNF-α mRNA的水平逐渐增加;将 IEC-6分别用50、100、200及500μg/ml EPS预处理24 h,然后用10μg/ml LPS刺激达1、4 h,采用 RT-PCR方法分析得, LPS诱导 TNF-α mRNA表达被 EPS有效地抑制,4 h的抑制率高于1 h的抑制率。[结论]EPS通过抑制 LPS刺激细胞分泌 TNF-α mRNA的产生而起到肠道粘膜的保护作用,且 EPS对这种抑制作用具有浓度及时间依赖性。 相似文献