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仔猪黄白痢大肠杆菌耐药性检测及ERIC图谱分析 总被引：1，自引：0，他引：1
以47株黄白痢临床分离大肠杆菌为材料,通过Kirby-Bauer法检测细菌耐药表型并用PCR扩增Ⅰ型整合酶基因,进而对不同耐药谱菌株进行以肠杆菌科基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应(ERIC-PCR)基因分型并用统计分析软件SPSS 16.0聚类.耐药表型检测结果显示:47株大肠杆菌均呈多重耐药,共9种耐药表型;Ⅰ型整合子阳性菌株检出率为95.7%(45/47);ERIC-PCR扩增出现稳定可重复的基因指纹图谱,耐9~13种药物菌株(85.1%,40/47)的ERIC指纹图谱分别显示出2种主要谱型,各代表1个猪场的菌株类型.聚类分析提示,相同耐药谱的来自同一猪场和不同猪场分离株的平均相似率分别为68.7%和53.5%,显著高于47株菌的平均相似率37.3%.说明菌株耐药性可能与特定的ERIC指纹图谱相关,ERIC指纹图谱分析可作为考察猪源致病性大肠杆菌多重耐药表型与基因型特征的新视角. 相似文献
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宠物源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因流行性检测 总被引：3，自引：0，他引：3
【目的】对广州分离得到的宠物源(主要是宠物猫、狗)大肠杆菌进行质粒介导喹诺酮类耐药PMQR基因qnr、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因的流行性检测。【方法】采用琼脂平板稀释法对164株临床分离的宠物源大肠杆菌进行15种抗菌药物的最小抑菌浓度测定。通过PCR检测qnr、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因。建立大肠杆菌基因指纹图谱并对指纹图谱进行分析。【结果】164株宠物源大肠杆菌对12种兽医临床常用抗生素耐药率较高,且表现为多重耐药(5-14 耐)。在164株宠物源大肠杆菌中检测到3个菌株同时携带qnrA、qnrB和qnrS基因,其中2株也携带aac(6′)-Ib-cr基因。阳性菌株均能扩增出指纹图谱,具有两个以上PMQR基因的菌株多分布于B型和C型。【结论】广州市宠物源大肠杆菌对临床常用抗菌药物耐药较为严重,检测结果显示喹诺酮类耐药基因在本市宠物医学临床上传播广泛,PMQR基因的产生能力与其基因型有密切的关系。 相似文献
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为比较养殖区猪"养殖-屠宰-销售"产业链各个环节中大肠杆菌的耐药性状况,及其在动物与动物、与人之间传递的情况,采集猪产业链中多个环节的样品,分离大肠杆菌150株,用肉汤稀释法检测细菌对常用药物的最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),并对所有菌株进行脉冲场凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分型分析。研究结果表明养殖环节中(包括饲养员)细菌耐药程度普遍较高且呈现多重耐药性,屠宰、加工和销售过程中细菌耐药程度较低;在仔猪、哺乳母猪和怀孕母猪之间,及保育猪和饲养员之间存在PFGE型高度相似的菌株,而PFGE型相似菌株的耐药性则存在不同程度的差异。说明良好的屠宰条件在一定程度上能够阻断养殖环节形成的高耐药性菌株的传递,耐药性大肠杆菌菌株可以在密切接触的人和动物之间传播。评估猪产业链中动物源条件致病菌及耐药性的转移扩散风险,对食品安全和公共卫生具有一定参考价值。 相似文献
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利用质粒指纹图谱法对大肠杆菌耐药质粒遗传特性的研究 总被引：9，自引：1，他引：9
为研究鸡源大肠杆菌耐药性及耐药的生物学特性，选用30株来自不同地区的鸡源大肠杆菌，在药敏试验的基础上，对耐药菌质粒进行了指纹图谱分析。结果表明：30株鸡源大肠杆菌对氨苄青霉素、青霉素、四环素的耐药率为100.00%，对氯霉素、庆大霉素、利福平、红霉素的耐药率为60.00%-93.33%，多重耐药率为26.67%-80.00%，质粒图谱比较发现：来源相同的菌株质粒图谱相同或相似；来源不同的菌株质粒图谱一般不同。聚类分析表明：30株大肠杆菌遗传距离在0.224-0.416处聚成五类，其中同一地区聚为一类。这表明同一地区的大肠杆菌病的病原之间有一定的同源性。其次，这30株大肠杆菌在遗传距离为0.864处聚成一大类，说明它们之间有一定程度的遗传相关性。 相似文献
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对广西地区56株仔猪致病性大肠杆菌进行菌毛基因的多重PCR检测及质粒DNA指纹图谱分析。多重PCR检测结果证实该方法可用于各大肠杆菌野生菌株的检测,且适用于仔猪大肠杆菌性腹泻病的快速诊断和流行病学调查。质粒DNA指纹图谱分析发现这56个菌株质粒的获得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株的质粒图谱一般不同。所有菌株都含有1条大小相同的质粒带,表明广西流行的猪大肠杆菌性腹泻病主要是由携带相同质粒的大肠杆菌引起。试验结果表明,质粒DNA指纹图谱法可作为大肠埃希氏菌分型的分子生物学方法。 相似文献
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为了调查江苏地区奶牛场大肠杆菌中bla_(NDM)基因的分子流行病学特征。从江苏部分地区3个奶牛场采集样品134份,使用PCR和测序的方法筛选bla_(NDM)阳性大肠杆菌,同时对其进行超广谱β-内酰胺酶类基因的检测,采用药敏试验检测bla_(NDM)阳性大肠杆菌对19种常用抗生素的敏感性,通过多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)对携带NDM基因的大肠杆菌进行亲缘关系分析,通过质粒结合试验验证bla_(NDM)基因的可转移性。结果显示,从134份奶牛场样品中共分离15株bla_(NDM)阳性大肠杆菌,包括NDM-1和NDM-5 2种变体。15株bla_(NDM)阳性大肠杆菌对多种抗生素均呈现不同程度的耐药,奶牛场15株bla_(NDM)阳性大肠杆菌包括7种ST型,分别是ST410、ST846、ST206、ST101、ST1642、ST3076、ST1626,同一种ST型在粪便样品和环境样品中同时存在,表明相同ST型bla_(NDM)阳性大肠杆菌可在动物与环境间相互传播。PFGE试验结果表明,15株bla_(NDM)阳性大肠杆菌可以分为11个簇,同一样品的分离株倾向于相同的簇,在比较小的范围内存在PFGE图谱相同的现象;对15株菌株的结合子进行bla_(NDM)基因的转移性试验结果表明,15株大肠杆菌的bla_(NDM)耐药基因均通过质粒结合转移至受体菌J53。表明,bla_(NDM)阳性大肠杆菌在江苏省部分地区奶牛场中流行相对较为严重,存在多重耐药现象,推测bla_(NDM)基因主要通过质粒结合转移的方式进行水平传播,这为食品源耐药菌的监测及风险评估提供了依据。 相似文献
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【目的】了解2010-2016年四川省食品动物源大肠杆菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)情况及其耐药基因的变迁。【方法】以2010―2016年收集的444株食品动物源大肠杆菌(鸡源225株，猪源219株)为对象，采用纸片扩散法和微量肉汤稀释法分别检测其产ESBLs情况和药物敏感性；采用PCR测序法和脉冲场凝胶电泳(PFGE)检测携带ESBLs菌株的基因型特征和部分菌株的亲缘关系。【结果】444株大肠杆菌中，产ESBLs菌株的检出率为27.7%，其中鸡源菌和猪源菌检出率分别为42.2%和12.8%。2010-2016年产ESBLs菌株从16.9%升高至40.4%，鸡源菌株ESBLs检出率随时间变化比猪源菌更明显；ESBLs阳性菌株对大多数药物的耐药率显著高于阴性菌株，且多重耐药性问题更严重；产ESBLs菌株携带的耐药基因以blaTEM和blaCTX-M为主，并以blaTEM-1(63.3%)、blaTEM-52(32.1%)、blaCTX-M-55(42.2%)、blaCTX-M-65(27.8%)和blaCTX-M-14(21.1%)为主要流行亚型，且检出率及ESBLs基因亚型复杂性呈逐年上升趋势；ESBLs阳性菌株有广泛PFGE谱型，即便携带相同基因型的菌株也不存在亲缘关系。【结论】四川食品动物源大肠杆菌产ESBLs菌株检出率及其耐药基因亚型的复杂程度呈逐年上升趋势，ESBLs是造成多重耐药性的主要原因，ESBLs耐药基因以水平传播为主。 相似文献
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【目的】了解福建省猪源mcr-1基因阳性细菌的流行性、耐药特性及分布特征。【方法】从福建省7个地市的21个猪场采集313份粪便样本，应用PCR方法筛选、分离和鉴定mcr-1基因阳性细菌；采用K-B琼脂扩散试验进行药敏检测，分析mcr-1基因阳性细菌的耐药性，并使用PCR方法分析其耐药表型；进一步采用多位点序列分型（MLST）方法鉴定mcr-1基因阳性大肠杆菌的类型，使用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析方法对mcr-1阳性大肠杆菌进行聚类分析，探明其分布特征和亲缘关系。【结果】从313份猪粪便中共分离获得43株mcr-1基因阳性细菌，其中大肠杆菌39株。耐药性结果显示，分离菌株对磺胺甲基异恶唑、氟苯尼考、链霉素、强力霉素、恩诺沙星、新霉素、阿莫西林、头孢噻肟、林可-壮观、亚胺培南、呋喃妥因、利奈唑胺和替加环素的耐药率分别为90.1%，83.7%，74.4%，67.4%，67.4%，58.1%，53.5%，39.5%，34.9%，11.6%，4.6%，0和0。磺胺类耐药基因中的sul1、sul2和sul3基因检出率较高，分别达到81.4%，90.7%和74.4%；喹诺酮类耐药基因中仅有qnrS和aac(6′)-Ib-cr被检出，其检出率分别为51.2%和30.2%；氯霉素类耐药基因中Cat2和cmlA基因的检出率较高，分别达到86.0%和74.4%；氟苯尼考耐药基因（floR）的检出率为83.7%；金属β-内酰胺酶耐药基因（NDM-1）的检出率为23.2%；多药耐药基因（cfr）的检出率为7.0%；而替加环素耐药基因（tet(X)）未被检出。39株mcr-1基因阳性大肠杆菌除了4株不能分型外，其他35株共分为19个ST型，具有高度多样性，其中ST10为优势型，共有9株菌株。PFGE图谱显示，39株mcr-1基因阳性大肠杆菌共获得30种PFGE谱型，具有多态性特征，分为6组克隆群。【结论】福建猪源mcr-1基因阳性细菌主要为大肠杆菌，少部分为肠杆菌科其他菌株，且分离菌株具有明显的多重耐药性；mcr-1基因阳性大肠杆菌在地域分布上具有多态性和高度多样性特点。 相似文献
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新疆某猪场分离的大肠杆菌对抗生素耐药性调查 总被引：4，自引：2，他引：2
【目的】调查新疆某规模化养猪场分离的大肠杆菌对临床常用抗生素的耐药情况。【方法】对养殖场粪样中分离出的大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法,测定最小抑菌浓度。【结果】从该猪场共采集543份粪样,分离到454株大肠杆菌。分离的大肠杆菌对临床常用抗菌药物有不同程度的耐药。其中,对氨苄西林和阿莫西林/克拉维酸耐药率最高,达60.0%以上;对头孢噻呋最敏感,耐药率也达10.8%;3耐以上的菌株占64.5%。【结论】该猪场大肠杆菌对常用抗生素耐药情况较为严重,须在临床治疗细菌性疾病中避开使用不敏感的抗生素。 相似文献
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【目的】了解上海市动物源食品中山夫登堡沙门菌Salmonella Senftenberg的流行情况、耐药性和分子分型情况.【方法】于2008—2012年在上海分离鉴定得到15株动物食品源山夫登堡沙门菌,通过琼脂稀释法进行最小抑菌浓度测定,并应用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)对菌株进行分子分型研究.【结果和结论】15株山夫登堡沙门菌有7株对磺胺异恶唑具有耐药性(46.7%),除1株对链霉素耐药外(6.67%),对其他抗生素均较为敏感.PFGE分型分为10个基因型.部分不同来源的基因型(X3,X4,X5)具有高度的相似性(88.2%),表明这些不同来源的菌株可能存在流行相关性. 相似文献
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分离鉴定某蛋鸡养殖场病鸡的病原并对病原的部分重要生物学特性进行研究.通过病理剖检、细菌和菌落形态观察、分子生物学鉴定、生化试验和动物回归试验,确定从8只病鸡分离的21株病原菌为大肠杆菌.对30种抗菌药物的药物敏感性试验分析表明,这些菌株存在广泛的多重耐药,特别是对青霉素G、阿莫西林、卡那霉素、甲氧嘧啶、复方新诺明、四环素、氯霉素和万古霉素耐药严重,对头孢哌酮、头孢曲松、头孢他啶、氨曲南、阿米卡星、妥布霉素较为敏感.对超广谱β-内酰胺酶(ESBL)表型及基因型分析可知,所有菌株均为产ESBL大肠杆菌,其主要的ESBL耐药基因为bla_(TEM). 相似文献
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从山东省诸城地区6个集约化养鸡场的大肠杆菌感染鸡群的死鸡、毛蛋的心血中分离到32株细菌,经形态、培养特性及生化反应鉴定为大肠埃希氏杆菌(Escherichia.coli)简称大肠杆菌(E.coli)。对其作动物回归试验结果表明,全部为致病性大肠杆菌。从而证明从死鸡(毛蛋)心血中分离到的大肠杆菌与其致病性密切相关。将分离到的鸡大肠杆菌的14株优势血清型菌株进行了质粒DNA分析,通过碱裂解法小量提取质粒,然后对质粒进行了琼脂糖凝胶电泳分析,用hindⅢ限制性内切酶对质粒进行了酶切分析,结果表明:质粒的得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株的质粒图谱一般不同。将血清型和质粒图谱比较发现:同一血清型可以有不同的质粒图谱,不同血清型可以有相似的质粒图谱,血清型与质粒图谱没有直接的联系。本试验同一来源菌株的质粒指纹图谱相同、但它们的血清型不一致的现象可作为自然条件下同一质粒在不同血清型大肠杆菌中扩散转化的一个分子生物学依据。 相似文献
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为了解湘西黄牛粪源大肠埃希菌的耐药情况,从湘西黄牛主产区花垣县和凤凰县6个不同规模的湘西黄牛养殖场采集黄牛肛门拭子样品,用麦康凯培养基和大肠埃希菌特异性引物分离、鉴定大肠埃希菌;采用K–B法对分离的大肠埃希菌进行5类共18种常用抗菌药物的敏感性试验;利用超高通量荧光定量PCR对16株多重耐药大肠埃希菌的7类共22种耐药... 相似文献
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为了解新疆焉耆县不同动物源沙门氏菌（Salmonella）对临床常用抗菌药物耐药和携带耐药基因的情况，以及不同动物源耐药沙门氏菌之间的亲缘关系，从新疆焉耆县几个规模化养殖场分别采集鸡、牛、猪及羊肛拭子样；对样品中分离出的沙门氏菌运用琼脂稀释法进行13种抗菌药物的最小抑菌浓度测定；并对耐药菌株通过PCR方法进行相关耐药基因的检测；采用MLST方法分析不同动物源耐药沙门氏菌之间的亲缘关系。结果显示：①分离鸡源沙门氏菌110株（27.5%；110/400），牛源沙门氏菌63株（64.9%；63/97），猪源沙门氏菌40株（10.0%；40/400），羊源沙门氏菌17株（6.8%；17/250）。②牛源沙门氏菌对氨苄西林、卡那霉素以及氟苯尼考这3种抗菌药物的耐药率均在50.0%以上，以7耐（33.3%）为主；猪源沙门氏菌对四环素的耐药率高于本地区其他动物源菌，多药耐药结果显示在0耐~7耐均有分布。③牛源沙门氏菌和羊源沙门氏菌中blaTEM、blaOXA、oqxA、oqxB、aac(6′)-Ib-cr、ant(3″)-Ia、aadA2和tetB基因的携带率高于鸡源和猪源沙门氏菌的携带率，但blaCMY-2、qnrB、qnrS和tetA这4种耐药基因仅在猪源沙门氏菌中检出。④筛选出8株多药耐药且携带多种耐药基因的沙门氏菌，MLST分析发现8株菌的ST型均为ST34，进化树分析显示它们之间存在较近的亲缘关系。结果表明，焉耆县被检养殖场的动物粪便中均分离出沙门氏菌，且对13种不同抗菌药物表现出不同程度的耐药，存在多种耐药基因共存的情况，不同动物源耐药沙门氏菌间存在克隆传播的机制。 相似文献
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健康鸡猪体内大肠杆菌对四环素的耐药性及耐药基因分布 总被引：8，自引：1，他引：7
【目的】四环素作为人类和动物临床上广泛使用的广谱抗生素,其耐药性问题一直为全球所关注。健康动物体内的共生性大肠杆菌作为耐药指示菌和耐药基因的贮存库,了解其对四环素的耐药性及耐药机制对于疾病的防控具有重要意义。【方法】从健康鸡、猪体内分离大肠杆菌,用微量肉汤法检测其对四环素的耐药性,并用PCR方法对耐药菌株中8种四环素耐药基因的携带情况进行调查,运用统计学方法分析鸡、猪体内大肠杆菌分离株的耐药性和耐药基因分布情况的差异。【结果】总共分离鉴定出大肠杆菌269株,其中86.2%的菌株对四环素产生了耐药性,健康猪体内大肠杆菌分离株的耐药性明显高于健康鸡体内分离株(P0.05)。tet(A)、tet(B)和tet(M)3种四环素耐药基因广泛存在于健康鸡、猪体内的共生大肠杆菌中,所携带比例分别为87.9%、28.4%和15.5%;所有对四环素耐药的大肠杆菌均携带tet(A)或tet(B)基因,其中25.0%和2.6%的耐药菌株分别携带有2种和3种耐药基因,tet(M)基因与tet(A)或tet(A)+tet(B)基因共存于对四环素耐药的大肠杆菌中;健康鸡、猪体内耐药性大肠杆菌在tet(A)+tet(M)基因携带率方面的差异具有统计学意义(P0.01)。【结论】健康鸡、猪体内的大肠杆菌分离株普遍对四环素耐药,四环素耐药基因广泛分布于大肠杆菌分离株中,大肠杆菌对四环素的耐药机制以主动外排作用为主,核糖体保护基因在大肠杆菌对四环素耐药机制方面的作用尚待进一步的研究。 相似文献
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【目的】了解广州市售肉类食品源大肠埃希菌的污染和耐药情况。【方法】自2011年7月至8月,从广州市各大农贸市场和超市采集市售肉类样品310份,其中猪肉253份,鸡肉57份。采用选择性培养基分离鉴定大肠埃希菌Escherichia coli,琼脂稀释法测定大肠埃希菌对19种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC)。【结果】310份样品中共分离到213株大肠埃希菌,分离率为68.7%,其中猪肉源177株,鸡肉源36株。受试菌株对复方新诺明、链霉素和四环素的耐药率超过75.0%,对氨苄西林、萘啶酸、氯霉素、新霉素、氟苯尼考、磷霉素、环丙沙星、安普霉素、恩诺沙星、庆大霉素和头孢唑啉的耐药率为10.0%~60.0%,而对头孢西丁、头孢曲松、头孢他啶、黏菌素和阿米卡星表现较为敏感,耐药率小于5.0%。鸡肉源大肠埃希菌对头孢唑啉、头孢西丁、头孢曲松、头孢他啶和磷霉素的耐药率均高于猪肉源大肠埃希菌,差异极显著(P0.01)。213株大肠埃希菌中82.2%为多重耐药菌。【结论】广州市售肉类食品存在较为严重的多重耐药大肠埃希菌污染,且鸡肉源大肠埃希菌耐药性较猪肉源大肠埃希菌严重。 相似文献
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掌握新疆塔城地区不同来源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药情况,可以为今后塔城地区建立细菌耐药数据库提供信息。采集新疆塔城地区某养殖场饮用水样（12份）、饲料样（49份）、牛粪样（56份）和养殖户家羊粪样（20份）,分离大肠杆菌。采用琼脂稀释法对分离的大肠杆菌进行耐药性检测,通过卡方检验比较不同来源大肠杆菌耐药性的差异。结果表明：饮用水源菌对恩诺沙星、环丙沙星、阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林耐药率达100%;饲料源菌对阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林的耐药率分别为61.2%和51.0%;牛源菌对阿莫西林/克拉维酸和环丙沙星的耐药率均为14.3%;羊源菌对阿莫西林/克拉维酸和环丙沙星的耐药率分别为40.0%和35.0%。饮水源大肠杆菌对恩诺沙星、环丙沙星、阿莫西林/克拉维酸和氨苄西林的耐药率显著高于牛源菌、羊源菌和饲料源菌（P<0.05）。此外,不同来源大肠杆菌对头孢噻呋、阿米卡星、庆大霉素、安普霉素和氟苯尼考均敏感。多药耐药结果显示：饲料源菌以0耐（38.8%）和4耐（38.8%）为主;牛源菌以0耐（786%）为主;羊源菌以0耐（50.0%）为主;饮水源菌以4耐（100%）为主。上述结果表明不同来源大肠杆菌对被检抗菌药物的耐药情况差异显著,共性之处为不同来源大肠杆菌对被检药物的中介率均较高,暗示如不改变用药方案,近期耐药菌株数有迅速增长的风险。 相似文献
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