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利用胶体金免疫层析法检测猪瘟强、弱毒抗体方法的建立 总被引：7，自引：0，他引：7
将猪瘟病毒(Hog Cholera Virus,HCV)E2蛋白用大肠杆菌表达纯化后用作弱毒抗原；猪瘟病毒(HCV)强毒株用PK-15细胞培养48h,破碎后进行蔗糖密度梯度离心,吸取30％～35％梯度之间的条带,纯化后用作强毒抗原,然后用胶体金标记抗原,运用双抗原夹心法于国内首先建立了HCV抗体检测的免疫层析试纸条。该方法操作简单、灵敏度高、特异性好,能区分强弱毒感染,适合猪瘟的临床诊断。 相似文献
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胶体金免疫层析法在猪瘟强、弱毒抗体检测上的应用 总被引：5，自引：0，他引：5
猪瘟兔化弱毒株（HCLV）E2基因插入到原核表达质粒pET30a（＋）中,以BL21（DE3）为表达宿主,表达蛋白纯化后用作弱毒抗原;将猪瘟病毒（HCV）强毒株用PK15细胞培养48 h,破碎后进行蔗糖密度梯度离心,吸取30%～35%梯度之间的条带,纯化后用作强毒抗原,然后用胶体金标记强弱毒抗原.运用双抗原夹心法于国内首先建立了HCV抗体检测的免疫层析试纸条,该试纸条的建立在典型猪瘟标记疫苗的研制与应用上具有重要的血清学鉴别功能,对于监测猪瘟病毒的流行情况和疫苗免疫情况及制定免疫程序具有重要作用.同时该方法还具有操作简单、灵敏度高、特异性好、能区分强弱毒感染等特点,适合猪瘟的临床诊断. 相似文献
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运用胶体金免疫层析技术,建立一种操作简单、灵敏度高、特异性好,能区分强弱毒感染,适合临床诊断的检测猪瘟病毒的方法。本试验利用大肠杆菌表达猪瘟病毒E2蛋白作为弱毒抗原,利用PK15细胞培养纯化后的猪瘟病毒强毒用作强毒抗原,研制了胶体金免疫层析猪瘟病毒抗体检测试纸条。结果显示,经过37℃破坏,该试验方法制备的试纸条仍具有很好的稳定性;与间接血凝法、美国IDEXX酶免试剂比较,发现该试纸条灵敏度在一定程度上优于前者;用多种病毒、病原菌阳性血清考核,显示该试纸条亦具有较高特异性。该试纸条的研制为猪瘟的快速诊断提供了一种更加实用的方法。 相似文献
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鉴别猪瘟强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法的建立 总被引：13，自引：0，他引：13
[目的]建立一种能区分猪瘟病毒（classical swine fever，CSFV）强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应（RT-nPCR）检测方法。[方法]根据GenBank上登录的现有CSFV基因组全序列，选择高度保守区设计了一对CSFV通用引物，并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗和强毒特异性引物，建立了一种能区分猪瘟强毒和弱毒的RT-nPCR鉴别诊断方法。[结果]应用该方法从猪瘟兔化弱毒疫苗和石门强毒株基因组中扩增出了大小分别为447和343bp的一条特异性片段，从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为447和343bp的两条特异性片段，但对牛病毒性腹泻病毒和其它常见猪源病毒细胞培养物以及正常细胞基因组进行检测时均为阴性。该方法可以检测出0．04pg的CSFV RNA。对从黑龙江省采集的15份疑似猪瘟病料进行了检测，结果表明，有14份类似猪瘟强毒，1份类似弱毒疫苗。限制性片段长度多态性和种系发生分析证实了RT-nPCR的检测结果。[结论]本研究建立的RT-nPCR可以有效区分猪瘟强毒和弱毒，减少了未感染的免疫猪被误杀的可能性。 相似文献
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为了研制灵敏、准确、特异及稳定的非洲猪瘟抗体快速检测试纸产品,以非洲猪瘟病毒（ASFV）p72蛋白为检测抗原,以金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）为拦截线,对比重组蛋白p72的不同状态对试纸检测性能影响,优化标记条件、喷膜浓度、样品垫缓冲体系及成分、显色时间等因素,确定ASFV抗体检测试纸产品化的具体参数,并对试纸的特异性、均一性、准确性及稳定性进行鉴定。结果显示,试纸的检测敏感性为1∶51 200,优于商业化ASFV检测试剂盒,与其他猪源病毒阳性血清无交叉反应,变异系数小于10%,在临床样本检测中未见假阴性及假阳性结果,具有良好的敏感性、特异性、均一性及准确性;经加速稳定试验验证,可以室温保存1 a以上;与进口商品化试剂盒的总符合率为91.6%。综上,成功研制了ASFV抗体检测试纸,且试纸的检测性能良好,可以用于ASFV抗体的快速筛查。 相似文献
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为建立快速、简便检测猪瘟病毒(CSFV)抗体的方法,本研究采用胶体金和量子点免疫层析技术,将纯化的重组CSFV E2蛋白作为捕捉抗原,以纯化的抗CSFV E2蛋白多克隆抗体和HRP兔抗猪IgG分别包被于硝酸纤维素膜上,作为质控线(C线)和检测线(T线),优化反应条件,制备免疫层析试纸条,用于临床检测。结果表明,制备的2种试纸条都可用于检测CSFV标准阳性血清,使用不同批次试纸条进行检测,结果无差异。2种试纸条与CSFV阳性血清反应呈阳性,与伪狂犬病毒(PRV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和圆环病毒2型(PCV2)反应呈阴性;胶体金试纸条在临床样品中阳性检出率为84.38%(81/96),与CSFV抗体检测ELISA试剂盒检测阳性符合率为92.05%(81/88);量子点试纸条阳性检出率为87.50%(84/96),与ELISA试剂盒检测阳性符合率为95.45%(84/88)。本研究制备的2种试纸条都具有较好的特异性、敏感性、重复性和稳定性。 相似文献
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猪瘟胶体金快速诊断试纸条的研制 总被引：4，自引：0，他引：4
采用柠檬酸钠还原法制备胶体颗粒,用猪瘟(CSF)抗体标记纯化,并包被在玻璃纤维膜上,另外将纯化的CSF抗体和羊抗鼠抗体包被在硝酸纤维膜上,组装成CSF快速检测条,对猪瘟病毒进行检测.结果表明:使用所研制的CSF快速检测条检测收集的70份待检样品,共检出猪瘟阳性病例26例,而经病毒分离鉴定阳性病例有28例,阳性符合率达92.8%;将5份阳性猪瘟病毒稀释后用试纸条和ELISA方法进行敏感性实验,结果表明,诊断试纸条的敏感性较高,用试纸条对鸽新城疫病毒、鸡减蛋综合症病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒进行检测,无交叉反应. 相似文献
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<正> 目前,我国普遍应用猪瘟兔化弱毒苗,因而绝大多数猪的体液内都含有特异性抗体,也就无法应用检查特异性抗体的办法来诊断猪瘟病。近年来,应用猪瘟病毒高免血清标记荧光素诊断新技术,比传统的动物实验、血清学鉴定方法发展了一步。但由于受到同属病毒交叉反应的影响,仍然有相当程度的假阳性,如猪瘟荧光抗体对牛腹泻病毒(称BVDV)、猪瘟兔化弱毒均呈阳性反应. 能够认别单一抗原决定簇的单克隆抗体的出现和应用,解决了这一难题。现将荷兰 相似文献
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本文应用猪瘟单抗酶联试剂先后检测了２０９份种猪血清抗体。１９９７年检测结果表明：猪群的猪瘟弱毒抗体阳性率为２９４％,强毒抗体阳性率为９２％。说明该猪群免疫效果不确实,且有猪瘟强毒感染。通过加强免疫和淘汰强毒抗体阳性猪,使得猪瘟弱毒抗体阳性率在１９９８年达到了８１０％,猪瘟强毒抗体阳性率下降为１０％。对强毒阳性猪再淘汰,并加强消毒,基本上净化了该猪场。说明猪瘟单抗酶联试剂可用于检测猪瘟的免疫水平,同时对种猪的隐性感染可作出早期诊断。 相似文献
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利用反转录 ( RT)和 PCR技术完成了 5株近期 ( 1 997～ 1 998年 )猪瘟流行毒和 1株猪瘟 C-株弱毒疫苗毒 (兰州 ) Erns(或称 E0 )基因的核酸序列测定。通过序列分析发现 ,这 5株流行毒与 C-株疫苗毒的核酸序列同源性为 83%～ 84%;推导的氨基酸序列同源性为 88%～ 91 %,我国 50～ 60年代流行的中国石门株 ( SM)的核酸序列同源性为 85%;氨基酸序列同源性为 89%～ 91 %。而 5株流行毒间的核酸序列同源性为 91 %～ 98%;氨基酸序列同源性为 94%～ 98%。 相似文献
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仙人掌提取物是一种新型中草药提取物,为研究其对断奶仔猪的免疫促进及其生产性能的作用,试验选用21日龄杜×长×大三元杂交断奶仔猪96头,随机分成4组,分别为对照组和3个试验组,试验期为42 d。在免疫前及免疫后第14、21、28、35和42天从前腔静脉采血,分离血清,间接方法测定猪瘟抗体,于第14天称重。采用在整个保育期饲料中添加不同剂量的仙人掌提取物和猪瘟疫苗颈部接种断奶仔猪,研究猪瘟兔化弱毒疫苗与不同剂量仙人掌提取物处理后对断奶仔猪免疫机能及生长性能的影响。结果表明,仙人掌提取物按400mg·kg-1剂量添加与猪瘟疫苗使用,能够显著提高断奶仔猪猪瘟抗体水平,促进疫苗的免疫效果。同时发现不同剂量的仙人掌提取物组均能不同程度提高断奶仔猪生长性能。 相似文献
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广西猪瘟流行毒与C-株疫苗毒gp55（E2）主要抗原区DNA序列差异的比较 总被引：7，自引：1，他引：7
采用反转录 PCR(RT- PCR)和套式 PCR(nest Polym erase Chain Reaction,n PCR)扩增出 3株广西省近期 (1999～ 2 0 0 0年 )猪瘟流行野毒的 E2 基因 ,将其分别克隆于 PMD- 18T载体上并进行了核苷酸序列测定 ,根据 C株及 Brescia和 Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行氨基酸序列推导 ,同时进行了同源性比较及 E2 糖蛋白结构的分析。结果表明 ,所测 3株 HCV E2 基因的长度均为 1170 bp,编码的氨基酸序列均包括完整信号肽序列和部分跨膜序列 ,共由 384个氨基酸组成。3株流行毒的 E2 基因核苷酸序列同源性为 90 .10 %～ 98.5 4%,相应的氨基酸序列同源性为 89.5 9%～ 97.92 %。这 3株流行毒与 C-株兔脾组织毒 (疫苗种毒 ) E2 基因的核苷酸序列同源性为 82 .87%～ 83.99%,相应的氨基酸序列同源性为 86 .98%～ 90 .10 %,表明近期猪瘟流行毒与 C-株疫苗毒的 gp5 5蛋白之间存在一定的差异。 相似文献
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采用 RT- PCR和 n PCR扩增出 3株河南省近期 (1999～ 2 0 0 0年 )猪瘟流行野毒的 E2 基因 ,分别克隆于 PMD- 18T载体 ,对其进行了核苷酸序列测定及氨基酸序列推导 ,同时进行了同源性比较及 E2 糖蛋白结构的分析。结果表明 ,所测 3株 HCV E2 基因的长度均为 116 9bp。编码的氨基酸序列均包括完整信号肽序列和部分跨膜序列 ,共由 384个氨基酸组成。3株流行毒的 E2 基因核苷酸序列同源性在 99%以上 ,相应的氨基酸序列同源性也在 99%以上 ;这 3株流行毒与 C-株兔脾组织毒 (疫苗种毒 ) E2 基因的核苷酸序列同源性在 83.14 %～ 83.2 3% ,相应的氨基酸序列同源性在 88.14 %～ 88.6 8%。经遗传发生关系分析 ,C-株兔组织毒 C-株细胞毒属于组群 1(group 1) ,河南省近期流行猪瘟毒属于组群 2 (group 2 ) ,近期猪瘟流行毒与 C-株疫苗毒的 gp5 5蛋白之间存在一定的差异 相似文献
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应用正向间接血凝试验对豫南地区 2 0个猪场的 85 7份血清进行了猪瘟、口蹄疫的抗体水平检测 ,猪瘟免疫合格 (≥ 1∶ 16 ) 6 34份 ,合格率为 73.98% ;口蹄疫免疫合格 (≥ 1∶ 12 8) 4 33份 ,合格率为 5 0 .5 3% ;跟踪监测2 0组猪瘟、口蹄疫母源抗体 ,结果显示 ,断奶前仔猪的猪瘟、口蹄疫抗体水平与对应母猪保持一致 ,断奶后 2 0～ 30日 ,其抗体水平逐步衰减至免疫保护临界线上 相似文献
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1材料与方法
1．1二联营的制备与质量检验
1．1．1毒株来源与二联苗的制备。禽A型为杀性巴氏杆菌（APM）效力检验用强毒为C48．1株,鸡新城疫病毒（NDV）效力检验用强毒为北京株、APM1502株和NDVLaSota株,均购自中国兽药监察所。将APM强毒1502株培养菌液与NDV弱毒LaSota株感染鸡胚尿囊液混合,经甲醛溶液灭活后,按马闻天等的方法制备5批二联油乳剂灭活疫苗（批号05-1—05-5）。 相似文献
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马传染性贫血病马与弱毒疫苗免疫马的区别试验 总被引：1，自引：0，他引：1
本文应用淋巴细胞杂交瘤技术研制出具有抗马传染性贫血病驴白细胞弱毒抗原株系特异性的单克隆抗体（McAb）的酶结合试剂，以斑点试验（DB）与琼脂免疫双扩散试验（ID）相结合的方法，用于马传贫病马与马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马血清抗体的鉴别。使用本方法对339匹实验马进行测试，共检出马传贫病马11匹，马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马239匹，既未接种弱毒疫苗又未感染马传贫马89匹。另外，对106匹人工马传贫病马和21匹马传贫弱毒疫苗免疫马作了病理学验证，结果与免疫学检测相符。疫区在清除病马之后，病情停息。疫苗免疫马经贸易成交，更换畜主后，再次检疫未发现马传贫病例。结果表明，本方法对马传贫病马与马传贫驴白细胞弱毒疫苗免疫马的区别诊断有实用价值。 相似文献
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本实验结果证实PAP法在检测、定位猪瘟病猪组织中的病毒抗原是一种特异性强、敏感性高的一种新技术。主要优点是:①背景浅,阳性显色好,色深清楚;②适于检测、定位微量抗原。为病理诊断和鉴别诊断提供了可靠的形态学和免疫学依据。 相似文献