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1.
[目的]提高克隆猪的大批量生产效率,优化体外与体内培养体系。[方法]将所获得的猪体细胞克隆胚胎用含不同Vc浓度的培养液培养,比较体外囊胚发育力和囊胚细胞数,筛选出合适的培养浓度,然后用此浓度培养后的胚胎进行体内手术移植,统计克隆猪的分娩率和产仔情况。[结果]克隆胚胎在激活后用40μg/m L Vc处理22 h,体外培养未显著增加囊胚率,但显著提高了囊胚细胞数。体内移植结果显示,添加Vc未提高妊娠率,但增加了窝均总仔数,克隆效率差异显著。[结论]Vc处理有利于增强体细胞克隆胚的体内和体外发育能力。 相似文献
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延边黄牛核移植胚胎的活性氧含量的测定 总被引：1，自引：0，他引：1
为了研究延边黄牛体细胞克隆胚胎内部的活性氧水平,以延边黄牛孤雌激活胚胎为对照,用2,′7′-二氯荧光素二乙酸酯和二氢乙锭两种染料分别对体细胞克隆胚胎进行染色,测定其内部超氧阴离子和过氧化氢含量。结果表明,2细胞期处理组间超氧阴离子水平差异不显著(P0.05),其它细胞期体细胞克隆组均显著高于孤雌激活组(P0.05),过氧化氢水平各细胞期体细胞克隆胚胎均显著高于孤雌激活胚胎(P0.05)。因此,延边黄牛体细胞克隆胚胎氧化损伤水平显著高于孤雌激活胚胎。 相似文献
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革胡子鲶全血培养制备染色体条件探索 总被引：2，自引：0，他引：2
[目的]探究革胡子鲶全血培养及染色体制备的条件方法。[方法]革胡子鲶消毒后用含有肝素的一次性注射器采血,采用RP-MI1640全培养基进行体外全血细胞培养。通过对革胡子鲶血液的细胞培养温度、秋水仙素浓度及加入时间、低渗时间及温度等各种条件的筛选,建立起较成熟的革胡子鲶全血细胞的培养和染色体制备的试验方法。[结果]5 ml培养基中加入0.2 ml全血,26℃下培养72h,在结束培养前6 h加入终浓度0.1μg/ml秋水仙素,低渗35 min,可获得较好的染色体分裂相。[结论]结果为进一步研究染色体的结构、遗传变异、基因定位、荧光原位杂交等奠定了基础。 相似文献
4.
为提高延边黄牛体细胞克隆的效率,采用化学辅助去核法--化学诱导剂脱羰秋水仙碱(Demeeoleine,简称Deme)处理体外成熟的MⅡ期延边黄牛卵母细胞,经显微操作构建重构胚后观察发育情况.试验研究了,Deme的处理浓度、作用时间对延边黄牛卵母细胞去核效果及其重构胚发育的影响.结果显示:体外成熟的卵母细胞在0.2μg/mL、0.3 μg/mL、0.4 μg/mL的Deme溶液中处理45 min,显核率与去核率无显著差异,去核率达100%,但是0.2 μg/mL处理组的囊胚发育率显著高于其他处理组;45 min处理组的显核率显著高于30 min、60 min处理组,45 min处理组的囊胚率高于其他处理组;化学辅助去核法的囊胚率显著高于盲吸法.化学辅助去核能够准确定位去除细胞核,并提高了延边黄牛体细胞克隆的去核率及重构胚的体外发育率. 相似文献
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为了解延边黄牛体细胞克隆早期胚胎发育过程中端粒酶活性的变化规律,采用实时荧光定量PCR法检测体细胞克隆早期胚胎及卵母细胞端粒酶活性.研究结果表明,端粒酶活性在未成熟卵母细胞相对水平较高,2-细胞至16-细胞胚胎的端粒酶活性总体水平相对较低(P<0.05),桑椹胚的端粒酶活性总体水平显著升高(P<0.05),在囊胚阶段达到最高. 相似文献
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在延边黄牛体细胞克隆胚胎体外培养液中分别添加H2O2和GSH,观察重组胚体外发育情况,探究二者对延边黄牛体细胞克隆胚胎氧化损伤的影响.结果表明:不同时间添加H2O2时0～24 h组卵裂率显著高于其它组(P＜0.05),48 ～72 h组16细胞以上发育率显著低于其它处理组(P＜0.05).不同时间不添加H2O2时48～72 h组16细胞期以上发育率显著高于0～24 h组和24～ 48 h组(P＜0.05),24～48 h组显著高于0 ～24 h组(P＜0.05).不同时间添加GSH时0～24 h组和24 ～ 48 h组卵裂率显著高于对照组、48 ～72 h组和72～96 h组(P＜0.05),对照组16细胞以上发育率显著低于48 ～72 h组和72 ～96 h组(P＜0.05).结论:H2O2对延边黄牛体细胞克隆胚胎发育前期的氧化损伤较大,特别是在48 ～72 h.培养前期添加1 mmol/L的GSH能够有效提高延边黄牛体细胞克隆胚胎体外发育效率,缓解有害应激带来的氧化损伤. 相似文献
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8.
以天然二倍体、杂交三倍体(4n♀×2n♂)和天然四倍体泥鳅Misgurnus anguillicaudatus的鳍组织为材料,对短期培养的消毒方法、秋水仙素的浓度(1.0、1.5、2.0μg/mL)与处理时间(2、3、4 h)和低渗处理时间(30、40、50 min)等细胞培养技术,及染色体标本制备方法进行了研究。结果表明:选择100 g/L的碘伏溶液杀菌效果良好,对于细胞生长影响较小,尤以处理15 min时的效果最明显,细胞迁出迅速;在终止培养前3 h加入秋水仙素至终浓度为1.5μg/mL,天然二倍体、杂交三倍体和天然四倍体泥鳅鳍细胞中期分裂相染色体众数最高,分别为93.33%、90.00%、70.00%;25℃下低渗处理40 min时,可以获得大量图像清晰、长度适中、分散良好、染色体数目完整的染色体中期分裂相。本研究中初步建立了以鳍组织培养法作为材料来源快速制备不同倍性泥鳅染色体标本的方法。 相似文献
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为了研究长春花碱对鼠单卵裂球染色体标本制备的影响。以长春花碱为纺锤体中期阻断剂,以CZB为基础培养液,研究不同的阻断培养浓度和时间对小鼠4、8-细胞期胚胎单卵裂球中期分裂相数的影响。0.5μg/ml浓度、阻断培养10 h组的4-细胞卵裂球中期分裂相检出率最高,而只有0.5μg/ml浓度6、h组,0.1μg/ml浓度8、h组,0.3μg/ml浓度、8 h组,0.7μg/ml浓度、8 h组,0.1μg/ml浓度、10 h组和0.3μg/ml浓度1、0 h组与最高值组差异不显著;0.5μg/ml浓度、阻断培养10 h组的8-细胞卵裂球中期分裂相检出率最高,而只有0.1μg/ml浓度1、0 h组和0.7μg/ml浓度1、0 h组与最高值组差异不显著;0.1μg/ml浓度8、h阻断培养的4-细胞单卵裂球的中期分裂相的检出率与0.1μg/ml浓度1、0 h阻断培养的8-细胞单卵裂球的差异不显著,其染色体标本的制备质量评分分别为2.7和1.90为确定适宜小鼠早期胚胎单卵裂球的长春花碱处理浓度和阻断培养时间提供了科学依据。 相似文献
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[目的]摸索无透明带猪体外成熟卵母细胞(ZFOs)电激活的条件和无透明带孤雌激活胚胎(ZFEs)的体外培养方式,为手工克隆法生产广西巴马小型猪体细胞核移植奠定基础。[方法]用不同场强、脉冲时程和脉冲次数激活ZIOs、ZFOs,用不同培养方式(微滴法和微穴法)培养ZIEs和ZFEs,检查第7天的囊胚率及囊胚的总细胞数。[结果]有带猪体外成熟的卵母细胞电激活最佳场强和脉冲时程为125 V/(mm.80μs),微滴法培养的囊胚发育率为(30.54±11.06)%;无带猪体外成熟的卵母细胞电激活最佳场强和脉冲时程为85V/(mm.80μs),微穴法培养,其囊胚发育率为(12.77±6.98)%;单次脉冲的激活效果好于多次脉冲。[结论]对有无透明带胚胎的培养方式,微穴法培养无透明带胚胎,微滴法培养有带胚胎较合适,一次脉冲可以有效激活卵母细胞。 相似文献
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[目的]探寻适宜延边黄牛体细胞核移植的最佳融合液。[方法]用延边黄牛颗粒细胞为供体细胞。试验1,比较3种浓度(0.25、0.280、.30 mol/L)3种融合液(蔗糖、D-山梨醇、甘露醇)对核移植胚胎融合率及重组胚体外发育的影响。试验2,比较3种0.28 mol/L融合液对核移植效率的影响。[结果]3种浓度的蔗糖、D-山梨醇、甘露醇融合液的融合率和卵裂率差异均不显著,但0.28 mol/L融合液处理的重组胚后期发育相对较好。3组融合液融合率(88.44%、86.83%、86.85%)差异不显著,蔗糖、甘露醇融合液卵裂率(87.98%、86.06%)差异不显著,在0.05水平上显著高于D-山梨醇融合液(78.64%);蔗糖、甘露醇融合液囊胚发育率(22.16%、19.91%)差异不显著,在0.05水平上显著高于D-山梨醇融合液(10.14%)。[结论]适宜延边黄牛体细胞核移植的最佳融合液为0.28 mol/L蔗糖融合液。 相似文献
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延边黄牛体细胞克隆融合条件的研究 总被引：1，自引：1，他引：0
以体外成熟培养22-24h的延边黄牛卵母细胞作为受体,颗粒细胞为供核细胞,挤压法去核,注入供体颗粒细胞到卵黄周隙中,甘露醇融合液中施加20μs时长的电脉冲刺激使之融合,复合化学方法激活,从融合前恢复培养时间、融合电场强度、甘露醇浓度等3个方面研究延边黄牛体细胞克隆的适宜融合条件．结果表明,2．5h处理组的融合率（70．9％）显著高于4．0h处理组（58．2％,P〈0．05）,2．5h处理组重组胚的卵裂率（77．9％）显著高于其它4组（P〈O．05）,其它各组间差异不显著（P〉0．05）;融合电场强度1100V／cm处理组的融合率（86．4％）显著高于900V／cm处理组（67．1％）和1200V／cm处理组（75．2％,P〈O．05）,重组胚的卵裂率（84．6％）显著高于900V／cm处理组（69．6％,P〈O．05）,囊胚发育率（26．1％）显著高于900V／cm处理组（10．0％）,1200V／cm处理组（8．0％,P〈O．05）;不同浓度的甘露醇对融合率和重组胚的卵裂率没有明显的影响,但是0．28mol／L组囊胚发育率（25．3％）显著高于0．25mol／L组（15．3％,P〈0．05）．因此,适合延边黄牛体细胞克隆的融合条件为融合前恢复培养2．5h,0．28mol／L甘露醇作为融合液,电场强度1100V／cm． 相似文献
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分别采用挤压去核法、盲吸去核法和点击去核法对延边黄牛卵母细胞进行去核操作,在操作时间、成功率、去核率及重组胚后期发育等方面进行比较.结果表明,去核率上,盲吸法低于其他2种方法;去核成功率上,挤压法和点压法高于盲吸法;操作耗时上,挤压法和盲吸法耗时较短;3种方法所构建的重组胚卵裂率以及囊胚发育率均差异不显著.因此,挤压去核法是一种较适合延边黄牛卵母细胞去核的有效方法. 相似文献
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通过对延边黄牛和韩延F1牛体重和体尺的对比,分析其生长发育规律,结果表明,韩延F1牛各月龄体重均高于延边黄牛;延边黄牛公、母牛体长的生长发育速度在8月龄左右快于体高,而韩延F1公、母牛的体长的生长发育在4月龄左右就已经快于体高;韩延F1公牛坐骨宽的发育也早于延边黄牛公牛,按性别来说,6月龄前母牛的后躯宽度(腰角宽、坐骨宽)生长强度较公牛大,6~18月龄公牛逐渐超过母牛. 相似文献
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[目的]建立一种利用荧光测定淀粉含量的新方法。[方法]利用荧光分析法的特点,对荧光试剂、反应温度和时间等影响淀粉含量测定的各因素进行优化,建立测定淀粉含量的新方法。[结果]选用丁基罗丹明B作为荧光试剂,当其反应浓度为2.0μmol/L时,其荧光强度和浓度呈很好的线性关系;碘的最佳反应浓度为0.8μg/m l,此时丁基罗丹明B的荧光猝灭程度和碘的浓度呈良好线性关系;反应的最佳温度为25℃;反应时间为0.5~2.0 h;在最佳实验条件下,淀粉在一定浓度范围内与荧光增强程度呈线性关系,线性方程为△F=7.097w+44.897,相关系数r=0.998 3,检测限为2.5×10-5g/m l,最低可检测到1.0×10-5g/m l的淀粉。[结论]该方法准确、可靠,可用于微量淀粉含量的测定。 相似文献
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通过研究温度和不同分级对延边黄牛卵母细胞Na/K ATP酶活性的影响,以及对其特异性抑制剂乌苯苷的敏感浓度,对延边黄牛卵母细胞Na/K ATP酶做初步探究,为进一步研究Na/K ATP酶活性与卵母细胞体外成熟的相关性打下良好基础.结果表明,延边黄牛卵母细胞的Na/K ATP酶活性在50℃达到最大值,在反应温度低于或高于50℃时酶的活性均降低,且在高于50℃时酶活急剧降低.乌苯苷浓度在2 mmol/L时孤雌卵母细胞完全停止卵裂.A级卵母细胞,裸卵和过成熟卵母细胞三者的Na/K ATP酶活性在统计学上差异不显著,但裸卵的Na/K ATP酶活性在数值上略高于其它两组.因此,延边黄牛卵母细胞的Na/K ATP酶的最适反应温度为50℃,其活力能够被2 mmol/L乌苯苷完全抑制,不同质量卵母细胞的Na/K ATP酶活性中,裸卵的Na/K ATP酶活性最高. 相似文献
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不同受体胞质对延边黄牛体细胞核移植效率的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
为确定延边黄牛体细胞核移植过程中卵母细胞的最佳去核时期,本试验选取体外成熟22 h的中期(MⅡ期)卵母细胞与体外成熟28 h的末期(TⅡ期)卵母细胞进行化学辅助去核操作,并将去核的卵母细胞作为受体构建重构胚,后期观察发育情况.结果显示,M期卵母细胞的显核率与TⅡ期卵母细胞的显核率无显著差异;但是TⅡ期卵母细胞所得重构胚的卵裂率及囊胚率均显著高于MⅡ期卵母细胞所得重构胚的卵裂率及囊胚率.综上所述,卵母细胞体外成熟28 h后的TⅡ期可作为延边黄牛核移植去核操作的理想时期,在TⅡ期卵母细胞中选择化学辅助去核法去核能够提高延边黄牛体细胞克隆的效率. 相似文献
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[目的]建立体细胞克隆小型猪的技术平台并了解克隆效率。[方法]运用体细胞核移植技术,以小型猪胎儿成纤维细胞作为核移植供体细胞,以体外成熟卵母细胞作为核移植受体细胞进行体细胞克隆猪生产,并利用STR序列对所出生的克隆猪进行个体识别。[结果]将重构胚胎移植到5头代孕母猪体内,其中一头代孕母猪成功产下2头克隆小型猪。经过个体识别试验证实克隆小型猪来自供核细胞,与代孕母猪无直接亲缘关系。[结论]克隆小型猪的成功出生表明所建立的技术平台适于小型猪的克隆。 相似文献