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[目的]分离得到猪圆环病毒2型(PCV-2)陕西杨凌株,测定病毒滴度(TCID50),并进行全基因组序列比对,为研制针对性更强的PCV-2疫苗提供理论依据.[方法]从经PCR检测为猪圆环病毒2型阳性的病料中、分离病毒并接种PK-15细胞,通过PCR检测、间接免疫荧光试验及电镜观察,对分离病毒进行鉴定;用免疫过氧化物酶细... 相似文献
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[目的]通过对某猪场采集的组织样本进行猪圆环病毒2型分离鉴定及培养,探讨桂枝复方水煎液和大黄复方水煎液体外对猪圆环病毒2型抗病毒效果.[方法]将从某猪场采集的疑似猪圆环病毒2型阳性病料经无菌处理后接种于猪肾细胞进行病毒的分离培养,PCR方法鉴定,细胞体外培养分离株病毒并分析其生长特性,然后通过桂枝复方水煎液和大黄复方水煎液处理病毒侵染的细胞,荧光定量PCR方法测定细胞内病毒载量.[结果]分离培养出猪圆环病毒2型分离株BY-F6代与GenBank中已收录的猪圆环病毒2型ORF2序列同源性可达到99.47％～99.60％;该病毒可在猪肾细胞中进行体外培养,48 h为病毒的复制高峰期,TCID50为10-4,3/0.1mL.6.25 mg/mL的桂枝复方水煎液体外对猪圆环病毒2型具有显著的预防作用(P＜0.05)及极显著的治疗作用(P＜0.01),3.13 mg/mL的桂枝复方水煎液可显著降低细胞内猪圆环病毒2型的复制(P＜0.05),桂枝复方水煎液不具有体外直接杀灭猪圆环病毒2型的能力.5.00 mg/mL的大黄复方水煎液体外对猪圆环病毒2型具有显著的预防作用(P＜0.05)及极显著的杀灭作用(P＜0.01),2.50 mg/mL的大黄复方水煎液可直接参与杀灭猪圆环病毒2型,显著降低细胞内该病毒的载量(P＜0.05),大黄复方水煎液体外对猪圆环病毒2型感染后的治疗作用不佳.[结论]桂枝复方水煎液和大黄复方水煎液体外对从某猪场分离及鉴定的猪圆环病毒2型具有一定的抑制作用. 相似文献
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【目的】分析黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和羊边界病毒(BDV)3种病毒多聚蛋白酶基因密码子的使用特点,初步探讨3种病毒多聚蛋白酶基因的进化及对不同宿主的适应策略。【方法】运用EMBOSS软件的CHIPS和CUSP程序及CodonW在线分子生物学软件,分析CSFV、BVDV和BDV的有效密码子数(ENc),碱基GC含量(Gcall),密码子第1、2、3位GC含量(GC1、GC2、GC3),相对同义密码子使用度(RSCU)及同义密码子第3位的GC含量(GC3s),并对3种病毒多聚蛋白酶基因的ENc进行绘图分析。【结果】CSFV、BVDV、BDV 3种病毒多聚蛋白酶基因的ENc值分别为51.205,51.323和52.580,表明3种病毒多聚蛋白酶基因的密码子偏好程度均较低;上述3种病毒多聚蛋白酶基因的GC含量分别为46.84%,45.99%和45.71%,均不超过50%;除BDV多聚蛋白酶基因同义密码子含量表现为GC1>GC3>GC2外,CSFV和BVDV均表现为GC3>GC1>GC2,且除CSFV的GC3为52.02%外,所有病毒的GC1、GC2、GC3均小于50%,可见3种病毒间的碱基组成(GC含量)及ENc值差异较小。RSCU分析表明,与CSFV偏爱使用G/C结尾的密码子不同,BVDV和BDV更偏爱使用以A结尾的密码子,这可能与病毒对宿主的适应策略有关。ENc绘图分析(Nc-plot)说明,碱基组成对密码子使用模式影响较小。【结论】CSFV、BVDV、BDV 3种病毒多聚蛋白酶基因密码子的偏好性较低,这可能是病毒进化过程中对宿主的一种适应策略。 相似文献
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检测猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
针对猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2的序列设计两对特异性引物及TaqMan探针,以感PCV2的PK-15细胞培养上清的DNA提取物为模板,分别扩增499 bp和131 bp的片段,建立了检测PCV2的TaqMan荧光PCR方法。结果表明:TaqMan荧光PCR检测PCV2的最佳探针浓度为0.5 pmol·μL-1;TaqMan荧光PCR两步法操作快捷,扩增131 bp的引物PCF1101/PCR1232检测敏感性高(3.17×102拷贝·μL-1),重复性好。在诸多检测样品中,除检测到PCV2检测指标出现阳性外,猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV),日本乙型脑炎病毒(JEV),猪伪狂犬病毒(PRV),猪瘟病毒(CSFV)及PK-15细胞等检测指标均为阴性,表明特异性强;与普通PCR的检测结果(2/10)比较,本法的敏感性和对临床样品的阳性检出率(3/10)更高。上述研究表明,本方法快速、敏感、特异,具有很高的重复性,且可实时监测,能有效检测PCV2。 相似文献
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从某一疑似发生无名“高热病”猪场的病料中分离到一株病毒,经病毒RT-PCR鉴定、生物学特性分析、病毒结构蛋白和非结构蛋白NSP2基因序列分析及对不同日龄猪感染试验的结果表明:分离毒株为变异型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),该病毒具有高致病性,病毒能在Marc-145细胞上增殖并产生病变,其结构蛋白ORF2-ORF... 相似文献
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试验证明,春小麦病毒病毒原的传毒介体为灰飞虱(Laodelphax striatella Fallen),不能经卵传毒。土壤、种子、蚜虫、叶蝉及汁液磨擦接种均不传毒。生物学测定及田间调查表明,该病毒的症状为矮化、丛生、叶片有条纹花叶、条点及植株早枯。症状表现与感病时期及温度有关,日温高于30℃则隐症。在鉴别寄主上的反应与日本 Toriyama 的报道一致。黍(Panicummiliaceum),无芒雀麦(Bromus inermis Leyss),野稗(Echinochloa crusgalli(L.)Beauv)为新确定的寄主。该病毒在谷子及黍上造成大面积危害,并在谷子上表现特殊症状。ELISA 测定结果表明,该病毒与小麦丛矮病的抗血清呈阳性反应。以上结果及电镜观察(已报道)确定该病毒为北方禾谷花叶病毒(NCMV),又名小麦丛矮病毒(WRSV)。 相似文献
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2种水稻矮缩病毒一步检测方法的建立 总被引：3，自引：0，他引：3
水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)是引起水稻矮缩病的2种主要病毒,这2种病毒病在田间危害症状较相似,难以准确鉴定。为建立这2种病毒的一步快速检测方法,从混合引物配比、退火温度2个方面优化了反应体系与反应程序,并用这2类病毒的总RNA进行了RT-PCR验证,最终建立了准确、灵敏、快速的一步检测方法。利用建立的方法对从江西省大余县和南昌县采集的水稻矮缩病毒叶片样品进行检测。结果表明:大余县10份样品均为南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV),检出率为100%;南昌县10份样品中有7份样品检出南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV),检出率为70%,另外3份样品检出水稻黑条矮缩病毒(RBSDV),检出率为30%。 相似文献
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陕西省PRRSV与CSFV、PCV2、PRV混合感染的检测 总被引：5，自引：0，他引：5
运用RT-PCR和PCR技术对高热病期间陕西西安、宝鸡、渭南、榆林、汉中、商洛等地区猪场送检的146 份样品进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV) 、猪圆环病毒2 型( PCV2) 和猪伪狂犬病毒(PRV)检测.结果显示:被检样品中PRRSV的阳性率达46.6%(68/146);PRRSV与CSFV、PCV2 和PRV 3种病毒均有混合感染现象, PRRSV + CSFV混合感染率为25%(17/68),PRRSV +PCV2为19.1%(13/68),PRRSV + PRV为4.4% (3/68),PRRSV + PCV2+ CSFV为14.7%(10/68), PRRSV + PCV2+ CSFV+PRV为2.9%(2/68).结果表明以PRRSV为主要病原的混合感染在所检测的高热病发病猪群的存在是非常普遍的. 相似文献
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猪繁殖障碍性疫病多重PCR诊断方法的建立及其应用 总被引：3，自引：2，他引：1
根据GenBank已发表的猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的序列,经DNAstar生物学软件和BLAST序列分析,利用Oligo6.0软件分别设计并合成了4对特异性扩增引物.在初步优化单项PCR反应退火温度和反应体系的基础上,建立了同时检测CSFV、PCV2、PRRSV和PRV的多重PCR诊断方法.结果表明:该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性;对30份临床样品进行检测,结果发现,CSFV、PRRSV、PCV2和PRV的阳性率分别为46.7%、43.3%、53.4%、10.0%,其中,PRV与PCV2、CSFV与PCV2和CSFV与PRRSV混合感染的阳性率分别为6.7%、36.7%和10.0%;PRV、PCV2和PRRSV单一感染的阳性率分别为3.3%、10.0%和33.3%.说明所建立的多重PCR诊断方法,可以应用于CSFV、PRRSV、PCV2和PRV混合感染所引起的猪繁殖障碍性疫病的临床鉴别诊断. 相似文献
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结合流行病学、临床症状、病理变化,采用PCR技术,对2005年1~6月间广西36个发生疫病的规模猪场提供的肝、脾、淋巴结、脑等84份组织病料进行猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)、猪瘟(CSFV)、猪伪狂犬病(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)检测。结果,检出PRRS阳性病料37份,阳性率44%,阳性场17个,场阳性率47%;CSFV阳性病料16份,阳性率11.9%,阳性场6个,场阳性率22.2%;PRV阳性病料27份,阳性率32.1%,阳性场12个,场阳性率33.3%;PCV-2阳性病料44份,阳性率52.3%,阳性场21个,场阳性率58.3%。同时还发现组织病料和发病猪场中存在猪繁殖与呼吸综合症、猪瘟、猪伪狂犬病、猪圆环病毒2型不同程度的混合感染现象,其中PRRS、PCV-2混合感染最为严重,样品阳性率33.3%,场阳性率25%。表明广西规模猪场主要疫病十分复杂,混合感染现象比较普遍,对广西养猪业带来巨大威胁,应加强疫病的防控工作。 相似文献
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参照GenBank收录的猪圆环病毒2型(PCV2)基因组全序列选择保守区域设计合成了引物及其探针,并对其进行了筛选;对荧光定量PCR的反应条件进行了优化,建立了TaqM an荧光定量PCR检测方法.用建立的检测方法对临床采集的组织病料进行了检测,并与常规PCR检测方法作比较.结果显示,所建立的方法灵敏度可达3×101拷贝.μL-1,比常规PCR检测方法灵敏度高10倍,而与猪圆环病毒1型(PCV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)没有交叉反应,具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点,适合于PCV2的流行病学调查和临床诊断. 相似文献
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猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒和乙型脑炎病毒多重RT-PCR检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
根据猪瘟病毒(CSFV)的E2基因保守序列、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的ORF7基因及部分ORF6和3-UTR基因序列和猪乙型脑炎病毒(JEV)的E基因保守序列,设计了3对引物,扩增大小分别为288 bp、430 bp和1 015 bp目的片段.以纯培养病毒抽提RNA,制备cDNA模板,利用3对引物,通过条件的优化,建立了同时检测这3种病毒的多重RT-PCR.CSFV、PRRSV和JEV的RNA最小检出量分别为0.270 ng、0.049 ng、0.067 ng,其它的RNA病毒如TGEV以及DNA病毒如PPV、PrV、PCV-2检测结果为阴性.以β-actin为对照,利用本方法检测了174份临床样品(血清、肺脏和胎儿),其结果为:PRRSV、CSFV和JEV的阳性率分别为30.4%、4.6%和1.7%;CSFV和PRRSV混合感染阳性率为1.7%.同时对临床样品中CSFV、JEV和PRRSV阳性PCR产物进行测序分析,发现CSFV、PRRSV和JEV的PCR产物序列和NCBI数据库中目标基因的同源性分别为92%、90%和89%,这证实了多重PCR的阳性结果为上述3种病毒.结果证明,所建立的多重RT-PCR可用于临床检测. 相似文献
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参考GenBank上的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因序列,根据其开放阅读框ORF1保守序列设计引物,建立基于SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法来检测PCV2.所建立的荧光定量PCR方法最低检测限为82.2拷贝·反应-1,与常规PCR相比,灵敏度高出100倍.扩增产物的融解曲线只出现1个单特异峰,无引物二聚体,... 相似文献
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中国部分地区高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病学研究 总被引：12，自引：1，他引：11
【目的】对来自2006年猪病流行爆发地的组织样品进行多种病毒的检测,确定引起本次流行的致病病原及PRRSV的分子流行病学特征。【方法】利用（RT-）PCR对采集的样品进行PRRSV北美型和欧洲型、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪血凝性脑脊髓炎病毒（PHEV）、日本乙型脑炎病毒（JEV）以及瘟病毒的检测,对PRRSV阳性的进行ORF5的序列测定并分析。【结果】检测到16份PRRSV北美型阳性样品,PCV2阳性样品2份,其它病毒均未检到。PRRSV ORF5序列分析表明笔者分离到的PRRSV株可分为2个群。【结论】（1）PRRSV与2006年肆虐中国养猪业的猪病流行有直接关系;（2）2006年PRRSV流行株主要是以JX0612株为代表,但不同遗传特征的PRRSV也在流行。 相似文献
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猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)主要经粪-口途径传播,可引起猪脑脊髓灰质炎、肠道、呼吸道、生殖器官疾病等多系统综合征。2011年作者在我国爆发猪脑脊髓炎为主的某猪场首次分离到1株PSV,随后的流行病学调查表明:PSV在我国猪群中广泛存在,具有较高的感染率。PSV与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪细小病毒、捷申病毒、B类和G类肠道病毒等混合感染病猪,以致临床症状复杂多样,诊断和综合防控难度增大。迄今,PSV的入侵与感染、变异与迁移、免疫与致病、暴发与流行、跨种间感染与传播等机制尚不清楚。本文主要对PSV病毒的发现与生物学分类、病毒形态结构和基因组结构特征、流行病学、临床症状以及PSV的诊断等方面进行综述。 相似文献
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【目的】实现快速、准确地对猪脑心肌炎进行临床诊断和病原学检测。【方法】根据GenBank中已发表的猪脑心肌炎病毒（EMCV）3D基因序列设计合成1对特异性引物,优化反应条件,建立了EMCV一步法RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证。【结果】一步法RT-PCR可以从EMCVB JC3株中扩增出与试验设计相符的286bp特异性片段,而对猪口蹄疫病毒（FMDV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）、BHK-21正常细胞的扩增结果均为阴性;对EMCVBJC3株细胞毒的敏感度达到2TCID50;对10份EMCVB JC3株细胞毒进行重复性检测,结果均一致;对207份临床疑似发病猪的病料进行检测,其阳性检出率为9.18%。【结论】所建立的EMCV一步法RT-PCR检测方法具有特异、灵敏、高效、快速等特点,可用于EMCV的临床检测及流行病学调查。 相似文献
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猪伪狂犬病、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合症、圆环病毒2型的相关性研究 总被引：2，自引：0，他引：2
2003-2004年对广东省猪伪狂犬病(PR)、猪瘟(CSF)、猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)、圆环病毒2型(PCV2)病原或野毒抗体调查发现,当前猪场这4种病的混合感染严重.对PR、PCV2、PRRS、CSF的动态流行情况进行相关性分析,结果表明:PR与PCV2之间存在较强的正相关性(P=0.012),相关系数为0.648,互谱图显示,PR与PCV2之间存在同时发生的关系.PCV2与CSF存在较弱的相关性,它们的互谱图表现为:PCV2的流行会微弱影响着未来7个月(负相关)、4个月(正相关)时CSF的流行情况,但这种影响是不显著的(P>0.05). 相似文献