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1.
真鲷精子诱导牙鲆减数分裂雌核发育 总被引：12，自引：0，他引：12
采用真鲷精子激活牙鲆卵子,经(0±0.5)℃冷休克处理,诱导了牙鲆减数分裂雌核发育。灭活真鲷精子,紫外线照射剂量3.4mJ/cm2时孵化率最低;随着照射剂量的增加,孵化率恢复,照射剂量73mJ/cm2时,孵化率最高,呈现典型的Hertwig效应。用流式细胞仪检测倍性,未经冷休克处理的胚胎全部为单倍体,经冷休克处理的均为二倍体,表明精子灭活有效。冷休克实验结果表明,冷休克起始时间2～5min均有效,以3min为最好;冷休克持续时间30～90min均有效,以45min为最好。综合两项因素,授精3min后,休克时间持续45min组的授精率和孵化率均为最高,与其他处理组差异显著(P<0.05)。RAPD分析结果显示,异源精子的遗传信息未在雌核发育二倍体的电泳图中出现,表明其遗传信息没有传递给子代。 相似文献
2.
黄姑鱼雌核发育诱导及鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
为建立黄姑鱼雌核发育诱导方法,实验利用紫外线照射使黄姑鱼精子遗传失活,与卵子授精后再通过冷休克抑制极体排放进行倍性恢复,成功诱导出黄姑鱼雌核发育二倍体。精子经强度为3 800μW/(cm2·s)的紫外线照射10～100 s,受精卵孵化率呈现明显的Hertwig效应;当照射时长达到60 s以上,各实验组全部孵出仔鱼均呈现单倍体综合症。精子的紫外线照射时间、受精卵冷休克起始和持续时间等三因素三水平正交实验结果表明,精子经紫外线照射60 s,受精2 min后卵子在3～4 ℃海水中持续冷休克10 min为最佳诱导条件组合,可以获得最高的孵化率(16%)。最佳组合仔鱼形态和细胞相对DNA含量与正常二倍体一致,经微卫星标记检验证明全部不含有父本基因,为雌核发育二倍体。实验报道了成功诱导黄姑鱼雌核发育二倍体的条件,为进一步开展黄姑鱼良种选育和性别控制工作奠定了基础。 相似文献
3.
采用紫外线(UV)灭活的冷冻真鲷(Pagrosomus major)精子激发漠斑牙鲆(Paralichthys lethostigma)卵子发育.冷冻真鲷精子适宜的UV灭活剂量为72 mJ/cm2,随着处理时间延长,胚胎的孵化率呈现哈特维希效应,其中40 s灭活组胚胎孵化率达到最高[(29士1.9)％],单倍体率100％.利用冷休克法抑制卵子第二极体排出,成功获得雌核发育二倍体仔鱼.冷休克处理温度为0～2℃,处理起始时间3 min、持续时间45 min时,雌核发育二倍体胚胎的孵化率最高,达(9.4士0.71)％,获得批量雌核发育仔鱼.雌核发育仔鱼经流式细胞仪和染色体倍性鉴定,均为二倍体(2n=48),未发现单倍体和非整倍体现象.雌核发育二倍体组和单倍体组与正常二倍体组组孵化时间差异显著,分别历时64 h 59 min和55 h 49 min.雌核发育二倍体仔鱼与正常二倍体仔鱼形态特征差异不显著(P＞0.05),单倍体仔鱼明显畸形.研究表明,采用适宜的紫外线剂量灭活的冷冻真鲷精子可成功诱导漠斑牙鲆雌核发育,获得雌核发育二倍体后代,研究结果可为漠斑牙鲆全雌化苗种生产提供技术和理论依据. 相似文献
4.
紫外线照射对光棘球海胆精子遗传失活和授精能力的影响 总被引：1，自引：0，他引：1
用不同照射剂量的紫外线照射光棘球海胆的精子,然后与正常的成熟卵子授精。在照射强度为0 75mW/(h·cm2),温度22℃的条件下,照射时间为0～180s,授精率随照射时间的增加而下降,但是在110～130s内又略有回升。用遗传失活精子授精可激活卵子,其早期胚胎的成活率随照射剂量的增加依次为57%、49%、41%、20%、12 5%、48 6%、61%、30 5%、16%。从早期胚胎成活率上可以看出"Hertwig效应"的存在。观察精子遗传失活和授精激活卵子的情况,其结果是在紫外线照射强度为0 75mW/(h·cm2),照射时间为130s,精液厚度为0 1mm的条件下,精子可以完全遗传失活,用这种失活精子授精可激活卵子进行胚胎发育。 相似文献
5.
同时采用冷休克法和静水压法进行大黄鱼（Pseudosciaena crocea Richardson）倍体诱导条件研究，同时比较适合条件下两种方法诱导效果差异以及大批量诱导组不同生长阶段三倍体榆出率的差别。结果表明：（1）冷休克法和静水压法都可成功诱导出大黄鱼二倍体。冷休克法适宜诱导条件为20℃培育水温下授精后3min，在3～4℃海水中处理8～10min；静水压法适宜诱导条件为同样培育水温下授精后3min，在静水压450kg／cm^2下处理3min。三倍体诱导率受处理时刻、处理时间和处理温度（或压力）3因素的影响。（2）综合三倍体诱导率、处理后受精卵原肠期存活率和仔鱼孵化率，静水压法诱导效果要明显优于冷休克法。（3）采用冷休克法进行大黄鱼三倍体大批量诱导，早期胚胎、初孵仔鱼和4月龄幼鱼三倍体检出率分别为34．03％、29．54％和14.81％。表明随生长发育诱导组三倍体检出率有下降趋势。 相似文献
6.
黑鲷精子诱导漠斑牙鲆雌核发育研究 总被引：2，自引：0，他引：2
采用紫外线遗传失活的黑鲷精子与漠斑牙鲆卵子授精,获得了漠斑牙鲆雌核发育单倍体受精卵,经冷休克处理后诱导出漠斑牙鲆雌核发育二倍体.试验结果表明,黑鲷精子经紫外线照射后(0～180 J/cm2)与漠斑牙鲆卵子受精,胚胎孵化率呈现明显的Hertwig效应.黑鲷精子遗传失活的最适紫外线照射剂量为120 J/cm2.18℃的水温条件下,冷休克处理的最适时刻为受精后4 min.处理持续时间和处理温度组合试验表明,在相同处理持续时间条件下,3℃休克水温处理效果均优于对应1℃休克水温各组,且45 min处理持续时间诱导效果最佳.综合试验结果,黑鲷精子诱导漠斑牙鲆雌核发育的适合条件为:水温18℃,将黑鲷精子经120 J/cm2紫外线照射后与漠斑牙鲆卵子受精,受精后4min,用3℃冷海水处理45min,可获得46.59％的雌核发育漠斑牙鲆二倍体初孵仔鱼. 相似文献
7.
采用冷冻保存的鲈(Lateolabrax japonicus)精液不经紫外线照射直接与大菱鲆(Scophthalmus maximus)卵进行杂交,可以刺激大菱鲆卵进行胚胎发育,胚胎发育率(发育至原肠期后胚胎成形的卵占总卵数的百分比)可达79.1%.通过与精子照射组单倍体发育过程等对比观察发现,杂交后代为大菱鲆的单倍体.如果在"受精"后2～10min内将大菱鲆卵在0～6℃冷休克处理110～50min,均能诱导卵子染色体加倍.对冷休克处理条件的筛选结果表明,在0℃条件下,卵子在受到鲈鱼精子刺激后6min开始进行冷休克处理25min,二倍体孵化率(雌核二倍体苗占受精卵的百分比)最高,可达34.8%.通过对各实验组卵发育情况的跟踪观察,发现单倍体与雌核发育二倍体在发育过程中有明显的差异,这种差异最早出现在8细胞期.单倍体胚胎头部发育不正常,眼泡较小,身体短且扭曲较严重,从肌节期开始沉积大量的黑色素颗粒.仔鱼孵化1周内单倍体即全部死亡.与正常二倍体对照组相比较,证明所得正常形态仔鱼即为雌核发育二倍体. 相似文献
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冷、热休克法诱导黄颡鱼三倍体的比较研究 总被引：5，自引：0，他引：5
分别采用冷、热休克抑制第二极体释放的方法诱导黄颡鱼三倍体。结果表明,在卵受精后2min,5℃处理20min,胚胎时期的三倍体率达70%左右,孵化率50%左右,幼鱼时期三倍体(含嵌合体)的检出率为25%,此条件为冷休克处理的优化参数;在卵受精后2min,40℃处理2min,胚胎时期的三倍体诱导率达58%,孵化率为39%,幼鱼时期三倍体(含嵌合体)的检出率为40%,此条件为热休克处理的优化参数。正交分析得出,冷休克条件下起始休克时间是原肠期三倍化率和孵化率的重要影响因子,温度对畸形个体的产生有重要影响;热休克条件下,参考三倍体率、畸形率、孵化期相对存活率三者而言,休克温度均是重要因素。比较观察到冷休克处理组的胚胎受损情况严重,后期的成活率较热休克处理组要低,总体诱导效果逊于热休克处理组。 相似文献
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2008年10月,在福建宁德水产技术推广站进行了大黄鱼（Pseudosciaena crocea,♀）×黄姑鱼（Nibea alb-iflora,♂）杂交,观察了杂交子代胚胎发育。大黄鱼和黄姑鱼亲鱼平均体质量和体长分别为405 g、27.9 cm和390g、24.8cm,采用干法人工授精。受精卵浮性,为单油球端黄卵,卵径1060～1500μm,油球379.8μm左右。在水温25.8～26.2℃,盐度26的条件下,经18h55min半数受精卵破膜,胚胎发育分为卵裂期、囊胚期、原肠期、肌节出现期、心跳期、肌肉效应期、出膜前期和出膜期,初孵仔鱼全长2.75～2.98mm,受精率约为14.4%,孵化率约为31.9%,畸形率约为30%。共培育杂交初孵仔鱼5万尾。3日龄仔鱼开口摄食轮虫,7日龄开始摄食小型挠足类。 相似文献
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11.
Large yellow croaker, Pseudosciaena crocea, exhibit sexually dimorphic growth, with females growing faster and reaching larger adult sizes than males. Thus, development
of techniques for preferentially producing females is necessary to optimize production of these species. We have established
a protocol to produce all-female croaker P. crocea through induction of meiotic gynogenesis with homologous sperm. The first set of experiments investigated the ultra-violet
(UV) irradiation on sperm motility and duration of sperm activity to determine the optimal UV dosage for genetic inactivation
of sperm, yet retaining adequate motility for activation of eggs. Milt from several males was diluted 1:100 with Ringer’s
solution and UV irradiated with doses ranging from 0–150 J cm−2. The results indicated that motility and duration of activity generally decreased with increased UV doses. At UV doses greater
than 105 J cm−2, after fertilization, motility was <10% and fertilization rates were significantly lower. Highest hatching rate was obtained
at 75 J cm−2. A second set of experiments was carried out to determine appropriate conditions of cold shock for retention of the 2nd polar
body in P. crocea eggs after fertilization with UV-inactivated sperm by altering the timing, temperature and duration of shock. At 20°C, shock
applied at 3 min after fertilization resulted in higher survival rate of larvae at 6 h after hatching. Results of different
combinations of three shock temperatures (2°C, 3°C or 4°C) and five shock durations (4 min, 8 min, 12 min, 16 min or 20 min)
at 3 min after fertilization demonstrated that shocks of 12 min gave highest production of diploid gynogens. Statistical analysis
revealed that maximum production of diploid gynogens (44.55 ± 2.99%) were obtained at 3°C. The results of this study indicate
that the use of UV-irradiated homologous sperm for activation of P. crocea eggs and cold shock for polar body retention is an effective method for producing gynogenetic offspring. 相似文献
12.
石油类是海洋环境的主要污染物之一,为了研究0#柴油对海洋鱼类早期生活阶段的毒性效应,以大黄鱼(Larimichthys crocea)为研究对象,开展了0#柴油水溶性成分对其早期生活阶段(鱼卵、初孵仔鱼、10 d仔鱼以及幼鱼)的毒性效应实验。结果表明:0#柴油水溶性成分与大黄鱼鱼卵孵化率具有显著负相关关系,高浓度0#柴油水溶性成分致畸率较高,低浓度0#柴油水溶性成分致畸率较低。0#柴油水溶性成分对大黄鱼初孵仔鱼(3 d)、仔鱼(10 d)、幼鱼的96 h的半致死浓度(96 h LC50)分别为1.00、1.07、2.02 mg·L-1,表明随着大黄鱼的生长发育,其能够提升对柴油水溶性成分毒性的耐受程度。 相似文献
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2008年10月,在福建宁德水产技术推广站进行了大黄鱼（Pseudosciaena crocea,♀）×黄姑鱼（Nibea alb-iflora,♂）杂交,观察了杂交子代胚胎发育。大黄鱼和黄姑鱼亲鱼平均体质量和体长分别为405 g、27.9 cm和390g、24.8cm,采用干法人工授精。受精卵浮性,为单油球端黄卵,卵径1060～1500μm,油球379.8μm左右。在水温25.8～26.2℃,盐度26的条件下,经18h55min半数受精卵破膜,胚胎发育分为卵裂期、囊胚期、原肠期、肌节出现期、心跳期、肌肉效应期、出膜前期和出膜期,初孵仔鱼全长2.75～2.98mm,受精率约为14.4%,孵化率约为31.9%,畸形率约为30%。共培育杂交初孵仔鱼5万尾。3日龄仔鱼开口摄食轮虫,7日龄开始摄食小型挠足类。 相似文献
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J. Godwin Christopher A. G. Murugesan N. Sukumaran 《Journal Of Applied Aquaculture》2013,25(2):128-137
To improve the efficiency of gynogenetic induction, the effect of UV light on sperm of Heteropneustes fossilis was optimized. The sperm suspension was diluted to 1 × 107 sperm/ml?1 in Hank's Balanced Salt Solution. Sperm suspension was irradiated under UV light for different exposure times ranging from 15 to 360 seconds (7500 ergs/mm?2 for 60 seconds). Sperm motility and egg activation efficiency were assessed for the different exposure durations. Complete inactivation of sperm genetic material was recorded from 120 seconds onwards, and a good motility score was recorded until 240 seconds. A typical “Hertwig effect” in the yield of hatched larvae was observed with doses of UV exposure greater than 75 seconds. Larvae resulting from sperm UV irradiated above 120 seconds were 100% haploid. The genetic inactivation of paternal chromosomes was confirmed by chromosome counting (n = 29) from the resulting embryo, which also had a characteristic haploid syndrome. The resulting embryo (with 29 chromosomes) exhibited haploid syndrome and died after yolk sac absorption. 相似文献
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为提高黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)人工授精的稳定性,分别用卵子和精子同步激活法以及预激活精子法,在6个梯度浓度(0%～0.5%)范围的低渗溶液中进行人工授精试验,比较精子活力、受精率和孵化率。结果显示:低渗溶液浓度与精子活力、精子激活率和受精率密切相关,在相同浓度的低渗溶液组中采用预激活精子法的受精率显著高于卵子和精子同步激活法(P<0.05),受精率相对应提高了7.7%～14.5%;低渗溶液的浓度和人工授精方式对孵化率无显著影响。结果表明在浓度0.3%的低渗溶液中采用预激活精子法的效果最好。 相似文献
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星斑川鲽雌核发育二倍体、单倍体与普通二倍体及杂交胚胎发育的比较 总被引：1，自引：0，他引：1
通过紫外线(UV)对冷冻的鲈(Lateolabrax japonicus)精子进行灭活,利用冷休克和压力休克方法诱导星斑川鲽(Platichthys stellatus)雌核发育二倍体,同时利用灭活鲈精子制备单倍体胚胎,未灭活鲈精子受精制备杂交胚胎,星斑川鲽精子受精制备正常发育胚胎。对以上几种胚胎发育时序、发育生物学特征进行了观察比较。结果表明,卵裂期单倍体、杂交二倍体和雌核发育二倍体胚胎发育速度与普通二倍体胚胎没有明显差异,从低囊胚期开始各实验组胚胎发育速度均慢于普通二倍体胚胎;杂交胚胎在胚体形成期基本死亡,单倍体胚胎在尾芽期停止发育死亡,均不能正常孵出。雌核发育二倍体与普通二倍体具有相似的发育时序,普通二倍体100 h 10 min孵化出膜,而雌核发育二倍体104 h 50 min孵化出膜。雌核发育胚体畸形率(53.59±0.36)%,孵化率(0.11±0.01)%;普通二倍体胚体畸形率(35.11±6.19)%,孵化率(58.01±5.30)%;与普通二倍体相比,雌核发育二倍体胚体畸形率高,孵化率低,但孵化鱼苗能够正常发育,获得了雌核发育群体。本研究为星斑川鲽雌核发育提供了技术方法,同时为单倍体、杂交和雌核发育胚胎的发育生物学研究提供了细胞生物学证据。 相似文献
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以云纹石斑鱼精液为实验材料,对精子稀释液、抗冻剂种类和适宜浓度、冷冻保存液进行了筛选。结果表明,利用9g/L NaCl、10g/L KHCO3和10%小牛血清配制而成的稀释液EM1-2适宜于云纹石斑鱼精子冷冻保存,以2ml冷冻管为精子容器,在60L液氮生物保存罐中冷冻保存精子,冷冻解冻精子活力可达56.67%±5.77%,要优于TS-2、ES1-3和其他EM系列稀释液冷冻保存精子活力。利用EM1-2为基础液对抗冻保护剂进行筛选,结果显示,10%~20%的二甲基亚砜(DMSO)和1-2-丙二醇(PG)冷冻保存后精子活力无显著差异(P0.05),其中15%的DMSO和10%PG冷冻保存精子效果最优,解冻后精子活力分别可达54.52%±7.81%和57.24%±3.69%。利用冷冻保存1年的精液与云纹石斑鱼卵进行受精,受精率和孵化率均达到80%以上,与新鲜精子无显著性差异(P0.05)。本研究表明,利用EM1-2配制15%的DMSO或10%的PG可用于冷冻保存云纹石斑鱼精液。在此基础上,建立了精子冷冻库,保存精子130ml,为人工繁育和杂交育种提供了丰富的精子源。 相似文献
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半滑舌鳎精子冷冻保存对于人工繁殖育苗、杂交育种、雌核发育及其性别控制研究具有重要的意义,为此,本文对半滑舌鳎精子冷冻保存方法进行了研究。分别利用2．8mol／L的二甲基亚砜（DMSO）、甘油（Gly）和1,2-丙二醇（PG）冷冻保存该鱼精子。结果显示,DMSO冷冻保存精子的活力较高。利用MPRS＋2．8mol／L DMSO以1：0．5、1：1、1：1．5和1：2的比例稀释并冷冻精子,1：1比例在冻前能够抑制精子的运动,冻后活力可达82．50±3．54％,显著高于其他稀释比例（P〈0．05）。分别利用冷冻保存液A（MPRS＋2．8mol／L DMSO）和B（TS-2＋2．8mol／LDMSO）稀释平衡精子,精子在A中的冻前快速运动时间、寿命分别为37．75±6．45S和145．00±78．98S,与鲜精无显著差异（P〉0．05）。利用以上两种冷冻稀释液冷冻保存精子,精子在A液中的冻后活力和寿命分别可达53．50±6．69％和98．00±13．51s,冷冻效果优于B液（P〈0．05）。冷冻后精子的受精率和孵化率分别为55．00±5．00％和35．00±13．23％,受精率与鲜精无显著性差异（P〉0．05）,因此认为MPRS＋2．8mol／L DMSO可用于半滑舌鳎精子的冷冻保存。 相似文献