禽腺病毒血清4型纳米PCR检测方法的建立与初步应用     

王利丽  郑丽  李富强  李秀丽  任卫科  路超  张莉  董志民  鄢明华 《中国预防兽医学报》2019,(7):701-704

为建立一种快速有效检测禽腺病毒血清4型(FAdV-4)的方法,本研究根据FAdV-4五邻体(Penton)基因序列,设计合成1对特异性引物,经过条件优化,建立了检测FAdV-4的纳米PCR方法(Nano PCR)。特异性试验结果显示,该方法对鸡新城疫病毒等12种家禽常见病原及国内报导的FAdV-1、FAdV-2、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-11等5个主要血清型病毒的扩增结果均为阴性,仅FAdV-4检测结果为阳性,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法对FAdV-4的最低核酸检出量为54.0拷贝/μL,较常规PCR方法高10倍,敏感性较高。应用该方法和病毒分离培养法同时对87份临床样品进行检测,二者均检出14份阳性样品,总体符合率为100%。以上结果表明本研究建立的Nano PCR方法特异性好、敏感性高,可以用于FAdV-4的临床检测和分子流行病学调查。  相似文献   

血清4型禽腺病毒研究进展     

孙自若  林维鹏  杨晓龙  韩海玉  杨增岐  党如意  王兴龙 《中国家禽》2018,(16)

血清4型禽腺病毒(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)是引起心包积液-肝炎综合征(Hydropericardium syndrome-inclusion body hepatitis,HPS-IBH)的主要病原。HPS-IBH在多个国家均有报道;2015年6月在我国暴发,主要危害鸡,尤其是3~7周龄肉鸡,已成为危害我国养禽业的主要疫病之一。随着HPS-IBH疫病严重程度的增加,国内外对该病的重视程度也不断增加。近年来,在该病的诊断技术、疫苗和防控技术等领域的研究都取得了一定的进展,为更加全面地了解该病最新研究成果,文章对FAdV-4近年来取得的研究结果进行综述,以期为该病防控提供技术资料。  相似文献   

一例肉鸡心包积水-包涵体肝炎综合征的诊断     

《中国家禽》2017,(13)

采集疑似心包积水-包涵体肝炎综合征(HPS-IBH)病鸡肝脏、肺脏、脾脏、法氏囊等病料,采用针对禽腺病毒(FAdV)的Fiber基因及传染性法氏囊病病毒(IBDV)的vVP2、VP1-b基因设计特异引物进行病毒的PCR检测以及基因序列测定与分析,并对病变肝脏组织进行组织病理学观察。结果:分别在肝脏、脾脏、肺脏组织中扩增出FAdV-Fiber基因的目的条带,在法氏囊和脾脏组织中扩增出IBDV-vVP2、-VP1-b基因的目的条带;经测序分析,该病例中FAdV属于Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4),IBDV属于基因重排病毒;病变肝脏组织H-E染色观察显示,肝细胞核内有典型的嗜碱性包涵体。综合分析,确诊该HPS-IBH病例是由于鸡群感染IBDV后继发感染FAdV-4所致。  相似文献   

我国禽腺病毒流行现状及防控要点     

张蕊  张迪  李叔伟 《北方牧业》2021,(14)

禽腺病毒在2015年开始在我国暴发流行,起初是以FAdV-4流行,从2018年后FAdV-4和FAdV-8都开始流行,目前主要感染肉鸡、蛋鸡和种鸡,近两年在水禽上发生率较低,目前禽腺病毒疫病对我国家禽养殖业带来严重的危害,给家禽养殖业造成严重的损失.本文通过对禽腺病毒Ⅰ群目前血清型流行情况,预防与治疗等相关情况进行综合阐述,为今后在临床上更好预防和治疗禽腺病毒疫病提供理论基础.  相似文献   

EDSV-HB株六邻体蛋白免疫原性试验     

杜冬华  周静  王爱华 《中国兽医杂志》2013,49(1):22-24

本试验主要对减蛋综合征病毒河北分离株(EDSV-HB)的六邻体(Hexon)基因进行了扩增、克隆、测序、表达及免疫原性的试验.将EDSV-HB株六邻体基因克隆至pET-32a-c(+)原核表达载体进行表达.重组蛋白免疫6周龄鸡,间接ELISA方法检测产生的抗体水平.结果显示,表达的重组蛋白能刺激机体产生较高抗体水平.由此表明,体外表达的六邻体蛋白能够保留天然蛋白具有的抗原性.  相似文献   

4型禽腺病毒抗体间接hexon-ELISA检测方法的建立     

朱庆贺  张鹏宇  崔红玉  王观悦  王爽  陈曦  史同瑞 《中国兽药杂志》2018,52(8):7-11

以4型禽腺病毒(FAdV-4)的DNA为模板,扩增其六邻体(hexon)部分基因并进行重组表达,以重组hexon蛋白为包被抗原,优化ELISA检测条件,建立了FAdV-4的ELISA抗体检测方法。该方法对FAdV-4阳性血清检测为阳性,对于其他鸡常见病毒,如禽流感病毒5、7、9型,新城疫病毒以及鸡传染性支气管炎病毒阳性血清检测均为阴性;与PCR方法的阳性符合率为83.3%。试验表明,建立的以重组hexon蛋白为包被抗原检测FAdV-4血清抗体的ELISA方法可以用于检测FAdV-4的感染及相关流行病学调查。  相似文献   

血清4型禽腺病毒hexon-penton串联蛋白在293T细胞中的表达     

《中国兽医学报》2020,(6)

为了获得293T细胞表达的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)六邻体(hexon)和五邻体(penton)的串联蛋白,采用PCR方法从因FAdV-4致死的鸡肝脏中扩增出hexon基因和penton基因,其大小分别为1 014,900 bp。使用重叠PCR将hexon基因和penton基因串联,得到hexon-penton(HP)串联基因。将HP基因导入表达质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1-HP,转染293T细胞,获得HP真核蛋白。经间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定结果表明,HP真核蛋白可与多抗血清发生特异性反应,蛋白质相对分子质量约为90 000,HP串联蛋白在293T细胞中获得了良好表达。研究结果表明成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-HP,并在真核细胞中获得表达,为进一步研制FAdV-4核酸疫苗奠定基础。  相似文献   

禽腺病毒4型云南株分离鉴定及Hexon基因序列分析     

薛晓岩  张振兴  曾毅  季佳  代红炀  李素华  宋建领 《中国畜牧兽医》2022,49(10):3932-3942

【目的】分析云南省家禽及野鸟禽腺病毒4型(Fowl adenovirus-4,FAdV-4)流行情况、Hexon基因差异性及致病性,为研究FAdV-4流行及Hexon基因对病毒毒力的影响提供参考。【方法】2020年1月―2021年6月在云南省昆明市、曲靖市、楚雄州、大理州、红河州、玉溪市等家禽养殖密集区采集疑似感染FAdV-4家禽肝脏组织样品158份,候鸟迁徙地采集野鸟新鲜粪便310份,采用PCR技术检测FAdV-4核酸,对获得的代表性阳性样品进行病原分离鉴定,并对分离毒株进行致病性及Hexon基因序列分析。【结果】家禽肝脏组织样品中检出FAdV-4核酸阳性样品19份,阳性率为12.03%(19/158);黑颈鹤粪便样品中检出核酸阳性样品1份,阳性率为0.3%(1/310)。从FAdV-4核酸阳性样品中分离到7株FAdV-4,致病性研究结果显示,FAdV-4云南分离株均能致鸡胚发育不良,引起4周龄肉鸡发生心包积液-肝炎综合征,鸡胚半数致死量(ELD₅₀)为10^―6.17~10^―4.32/mL。7株分离株均聚类于FAdV-C亚群,Hexon蛋白与国内FAdV-4高致病性毒株具有相同的¹⁸⁸R、¹⁹³R、¹⁹⁵Q特征。分离株感染SPF鸡后,临床症状明显,具有高致病性且高致死率,肝细胞病变明显。【结论】研究初步掌握了云南FAdV-4的流行情况,首次在黑颈鹤粪便中检测到FAdV-4病原核酸,分离获得7株FAdV-4,部分毒株Hexon蛋白存在氨基酸突变。  相似文献   

表达FAdV-8b Fiber蛋白重组FAdV-4的构建与鉴定     

王白玉  黄庆  乔麒龙  杨盼盼  李永涛  王增  杨霞  苗玉和  赵军 《中国兽医学报》2022,(2):230-236

为了构建能够同时防控鸡肝炎-心包积液综合征(HHS)和包涵体肝炎(IBH)的新型疫苗,本研究利用禽腺病毒4型(FAdV-4)中国流行株CH/HNJZ/2015的反向遗传操作技术,将禽腺病毒8b型(FAdV-8b)中国流行株的全长Fiber基因插入至FAdV-4基因组中1966 bp自然缺失区,构建感染性克隆并拯救出重组...  相似文献   

新城疫弱毒疫苗La Sota株对血清4型禽腺病毒致病作用的影响研究     

《中国动物传染病学报》2020,(4)

Ⅰ群血清4型禽腺病毒(FAdV-4)是常见的家禽垂直传播性病毒,感染鸡后可导致心包积液综合征。在生产中,先天感染FAdV-4的雏鸡免疫La Sota疫苗时会明显加重病情,因此我们推测新城疫弱毒疫苗的免疫具有加重或诱发和垂直传播感染的FAdV-4的致病作用。本研究随机选择50枚SPF鸡胚通过卵黄囊接种来模拟FAdV-4先天性感染,同时以接种生理盐水SPF鸡胚作为对照。待孵化出雏后,接毒组和对照组各取20只7日龄SPF鸡免疫新城疫Ⅳ系弱毒疫苗(La Sota株),同时各组其余鸡以相同方式接种等量PBS作为对照。结果显示:FAdV-4感染的雏鸡在免疫La Sota株后更容易发生严重的生长抑制和免疫器官损伤,说明免疫La Sota株能显著增强FAdV-4致病性。本研究结果显示,免疫弱毒疫苗La Sota增强了垂直传播感染的FAdV-4致病性,提示家禽养殖业种源净化的重要性。  相似文献