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鸡卡氏杆菌的分离与16S rRNA基因的分析鉴定 总被引：2，自引：1，他引：1
四川雅安某种鸡场种鸡出现消瘦,腹部膨大,肝脏肿大破裂出血,腹膜和输卵管炎为主要特征的疾病.为诊断和预防此病的发生,通过对细菌分离纯化、形态学观察、生化试验、药物敏感性试验鉴定出1株致病菌,应用通用引物对细菌的16S rRNA基因进行克隆和测序,测序结果于NCBI上进行BLAST比对,选择同源性较高的巴氏杆菌科15个属的29株细菌16S rRNA序列进行比对分析,构建遗传进化树.结果表明,分离纯化的细菌能在血平板上生长,革兰氏染色阴性短杆状,能发酵大多数糖和醇类,对头孢类抗生素敏感,16S rRNA序列与卡氏杆菌属细菌的同源性最高,在92.2%～99.5%之间,特别是与鸭卡氏杆菌同源在97.5%～99.5%之间.遗传进化树分析结果表明,该菌株与卡氏杆菌属细菌属于同一大分类群,与鸭卡氏杆菌位于同一个小分支,最终诊断该鸡场为卡氏杆菌感染. 相似文献
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鸡卡氏杆菌的分离与16S rRNA基因的分析鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
四川雅安某种鸡场种鸡出现消瘦,腹部膨大,肝脏肿大破裂出血,腹膜和输卵管炎为主要特征的疾病。为诊断和预防此病的发生,通过对细菌分离纯化、形态学观察、生化试验、药物敏感性试验鉴定出1株致病菌,应用通用引物对细菌的16S rRNA基因进行克隆和测序,测序结果于NCBI上进行BLAST比对,选择同源性较高的巴氏杆菌科15个属的29株细菌16S rRNA序列进行比对分析,构建遗传进化树。结果表明,分离纯化的细菌能在血平板上生长,革兰氏染色阴性短杆状,能发酵大多数糖和醇类,对头孢类抗生素敏感,16S rRNA序列与卡氏杆菌属细菌的同源性最高,在92.2%～99.5%之间,特别是与鸭卡氏杆菌同源在97.5%～99.5%之间。遗传进化树分析结果表明,该菌株与卡氏杆菌属细菌属于同一大分类群,与鸭卡氏杆菌位于同一个小分支,最终诊断该鸡场为卡氏杆菌感染。 相似文献
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为准确诊断贵州某蜂场发生的细菌性中蜂疾病,并提供防制方案,本试验进行了细菌分离纯化、形态学观察、生化试验,应用细菌16S rRNA基因通用引物进行基因扩增测序,测序结果在NCBI上进行比对分析,选取同源性较高的5个属的30株细菌的16S rRNA序列进行同源性分析并构建系统进化树,并对该分离菌进行动物回归试验和药敏试验。结果显示,分离菌为革兰氏阴性短杆菌,生化试验初步鉴定为蜂房哈夫尼菌;16S rRNA序列与哈夫尼杆菌属同源性最高,在97.0%~99.6%之间;遗传进化树表明,分离菌在哈夫尼菌菌属这一分支;动物回归试验显示,分离菌对中蜂有一定致病性,表明该蜂场受到蜂房哈夫尼菌感染,造成了蜜蜂的副伤寒;药敏试验结果表明,分离菌对青霉素、红霉素、克林霉素等耐药,对阿米卡星、复方新诺明、氧氟沙星等敏感。本试验结果为中蜂感染蜂房哈夫尼菌病的研究提供了一定参考,并能对蜂场提供合理用药意见。 相似文献
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副猪嗜血杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析 总被引：1，自引：1，他引：0
从云南某规模化养猪场病猪肺脏分离到1株革兰氏阴性小杆菌,经细菌生化鉴定、PCR鉴定和16S rRNA序列比对鉴定为副猪嗜血杆菌。抗生素药物敏感试验结果表明,分离菌株对四环素、红霉素、氯霉素、头孢噻吩高敏;对庆大霉素、氧氟沙星、诺氟沙星中敏;对磺胺甲唑耐药。16S rRNA分析结果表明,该分离株与GenBank中的Hps参考株AB078973(基因登录号)同源性为100%,将分离菌株鉴定为副猪嗜血杆菌。16S rRNA遗传进化关系表明,分离株与副猪嗜血杆菌3株血清5型参考株AB078972、AB078973、AB078974的16S rRNA序列位于一个分支上,遗传进化关系最近,它们之间的核苷酸同源性在99.0%~99.4%之间,初步鉴定为血清5型副猪嗜血杆菌,致病性试验结果表明,分离菌株对小白鼠有强致病性,命名为YN-1株。 相似文献
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一株羊源链球菌的分离鉴定及溶血素(SLS)基因序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
《中国预防兽医学报》2017,(12)
为分析一株羊源链球菌分离株的部分生物学特性及溶血素(SLS)基因的变异特点,本研究自四川省某绵羊养殖场一只病死绵羊肺脏中分离到一株链球菌并命名为SZ-1,经纯化培养后观察该菌的生长、染色特性,并对其进行16S rRNA基因PCR鉴定、生化鉴定、药物敏感性试验以及SLS基因序列分析。结果显示纯化培养后的细菌于哥伦比亚血琼脂培养基上呈现β溶血;分离菌株16S rRNA基因序列与马链球菌兽疫亚种的同源性在99%以上;药物敏感性试验显示分离株对螺旋霉素、红霉素、萘啶酸、庆大霉素、氯霉素、青霉素、克林霉素敏感,对四环素和卡那霉素耐药;SLS基因与马链球菌兽疫亚种属参考菌株的核苷酸序列相比在第87、291、450位出现了单个碱基的置换,核苷酸同源性为98.77%,SLS基因遗传进化树显示SZ-1与马链球菌兽疫亚种(BHS5、CY、ATCC36524)菌株的亲缘关系最近。综上所述本实验分离株为马链球菌兽疫亚种菌,该研究结果为该菌的临床诊断、选药治疗及其SLS基因的遗传动态变异研究等奠定了基础。 相似文献
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貂奇异变形杆菌的分离及其生物学鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
为分离貂奇异变形杆菌(P.mirabilis)并鉴定其生物学特性,本研究从临床病死貂的肝脏样品中分离出一株细菌,通过生物学特性检验及16S rRNA基因比对对该分离株进行鉴定.其中,应用PCR方法扩增出1504 bp的16S rRNA基因片段.经BLAST比对分析表明,与其同源性最高的均为P.mirabilis各株系的16S rRNA序列,同源性均高达98％以上.通过系统进化树分析表明,该分离菌株与10株参考菌的同源性为98.9 ％～99.9％,其中与HQ259932同源性最高(99.9％),检验结果表明,该分离菌为貂P.mirabilis.以0.2 mL/只(3.2×109 cfu/mL)菌液的剂量接种小白鼠,其发病率为100％,死亡率为60％,表明分离菌具有较强致病性.免疫保护性实验表明分离菌具有良好的免疫原性.此外,该分离菌株对头孢哌酮钠、卡那霉素、链霉素和阿米卡星敏感,对氧氟沙星、红霉素、恩诺沙星和阿莫西林等药物具有一定的耐药性. 相似文献
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为准确诊断贵州某蜂场发生的细菌性中蜂疾病,并提供防制方案,本试验进行了细菌分离纯化、形态学观察、生化试验,应用细菌16SrRNA基因通用引物进行基因扩增测序,测序结果在NCBI上进行比对分析,选取同源性较高的5个属的30株细菌的16SrRNA序列进行同源性分析并构建系统进化树,并对该分离菌进行动物回归试验和药敏试验。结果显示,分离菌为革兰氏阴性短杆菌,生化试验初步鉴定为蜂房哈夫尼菌;16SrRNA序列与哈夫尼杆菌属同源性最高,在97.0%~99.6%之间;遗传进化树表明,分离菌在哈夫尼菌菌属这一分支;动物回归试验显示,分离菌对中蜂有一定致病性,表明该蜂场受到蜂房哈夫尼菌感染,造成了蜜蜂的副伤寒;药敏试验结果表明,分离菌对青霉素、红霉素、克林霉素等耐药,对阿米卡星、复方新诺明、氧氟沙星等敏感。本试验结果为中蜂感染蜂房哈夫尼菌病的研究提供了一定参考,并能对蜂场提供合理用药意见。 相似文献
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水貂奇异变形杆菌的分离鉴定及16S rRNA基因序列分析 总被引：1，自引：1，他引：0
从辽宁某貂场发病水貂中分离到1株致病菌,命名为PMSD株,通过形态学观察和生化试验等常规鉴定发现符合奇异变形杆菌特性,进一步经VITEK 2Compact 30全自动细菌鉴定及药敏分析系统鉴定该株细菌为奇异变形杆菌。药敏试验结果显示PMSD株对氨基糖苷类药物、喹诺酮类药物等敏感,而对β-内酰胺类药物和磺胺类药物等不敏感。以细菌16SrRNA基因为模板应用通用引物进行PCR扩增,得到PMSD株的16SrRNA基因序列,长约1 504bp,提交到GenBank中,登录号:KM229530。将该序列与GenBank中序列进行BLAST比对,结果发现与其匹配度最高的均是奇异变形杆菌各株系的16SrRNA序列,均高达99%以上。选取其中前20株作为参考序列,运用生物学软件构建系统发育树并进行同源性比对,结果表明,分离菌PMSD株与20个代表菌株的同源性为98.9%~99.7%,其中与BB2000株、HI4320株、B1株和FCC141株同源性最高,为99.7%。本研究为预防和控制奇异变形杆菌引起的水貂疾病奠定了一定的基础。 相似文献
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本研究从疑似感染肺炎克雷伯菌(Kpn)的病死水貂病料中分离得到5株革兰氏阴性杆菌,通过对其进行细菌形态学、培养特征、生化特性和分子生物学鉴定,确认分离得到的菌株为Kpn。16S rRNA基因序列分析结果显示:该分离菌株与已知的Kpn相应序列的同源性为100%;药敏试验显示分离株对头孢曲松和舒巴坦高度敏感。动物致病性试验显示该分离株对小鼠具有较强的致病性。 相似文献
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2010年8月一批进口入境的裸鼠在隔离期间发生了疑似国外文献报道的过度角化性皮炎,为了确诊该病及鉴定该病的病原,本研究从患病裸鼠皮肤组织分离到一株革兰氏阳性杆菌。细菌纯化后经Biolog自动生物鉴定仪系统初步鉴定为牛棒状杆菌(C.bovis);提取细菌基因组,PCR扩增16S rRNA基因,测序结果经比对与GenBank中的C.bovis同源性在99%以上;培养物感染裸鼠没有出现临床症状,但组织学检查显示,感染裸鼠表皮棘皮层增厚,表现出轻微的C.bovis感染特有的棘皮症。由此可以确认这次入境裸鼠暴发的疫病为过度角化症,病原为C.bovis。本研究首次报道了在我国实验动物设施暴发的裸鼠过度角化症,提示裸鼠感染C.bovis导致的过度角化症是实验动物质量监测中不可忽视的传染病。 相似文献
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为调查新疆规模化奶牛场病牛死亡原因并确定病原,本研究无菌采集7份肺炎病死牛病变肺组织样,通过牛支原体液体培养基和固体培养基分离到1株支原体,采用形态学观察和生化试验鉴定该分离株,采用支原体特异性引物和牛支原体16S rRNA通用引物扩增基因序列并测序,使用DNAStar软件将分离菌株测序结果与GenBank中的标准株序列进行同源性比对,采用Mega 6.0软件中的邻接法(Neighbor-Joining,NJ)依据16S rRNA序列构建分离株系统进化树。结果显示,分离株菌落呈典型的"煎蛋样",菌落中心凹陷深入培养基,周边菲薄而透明,经Dienes染液染色后,菌落中心呈深蓝色。该分离株不分解葡萄糖、尿素、不水解精氨酸,血细胞吸附试验和溶血试验均呈阴性,氯化三苯基四氮唑还原反应呈阳性,产生膜和斑。PCR反应扩增出大小为1 911 bp的牛支原体特异性目的片段;分离株16S rRNA基因序列与牛支原体标准株PG45的序列同源性为99.8%,与牛支原体地方株(Mb NM2012、Mb HB0801、Mb Hubei-1、Mb Ningxia-1、Mb CQ-W70和Mb 08M)的同源性为99.3%～99.7%。系统进化树显示,分离株16S rRNA基因与Mb Ningxia-1株和Mb 08M株亲缘关系较近,处于同一分支。本研究结果证实了引起病牛死亡的病原为牛支原体,为新疆牛支原体病的防治提供了科学依据。 相似文献
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目的未知病菌对江苏地区斑点叉尾鮰的养殖业造成了巨大的危害,本文对该地区某养殖场病鱼中分离的细菌进行了鉴定及微生物学特性研究。方法采用VIA培养基分离优势菌株;采用回归感染实验确认病原菌;采用形态学观察、生理生化特征测定、细菌特异性引物PCR扩增检测及细菌基因测序分析鉴定细菌;采用药敏实验测定它对部分抗生素的敏感性。结果从病鱼症状及菌株的培养特性、形态特征与嗜麦芽寡养单胞菌感染斑点叉尾鮰症状十分相似,病鱼有典型的肠套叠和肝脏变性现象。分离菌株为革兰氏阴性杆菌,氧化酶阴性、硝酸还原阴性,不发酵糖类,无动力。最初判为嗜麦芽寡养单胞菌,而经过VITEK2生化及16S rRNA基因系统发育进化显示,与不动杆菌16S rRNA核苷酸同源性最高,为98.7%～99.8%,该菌株为约翰逊不动杆菌。结论分离出的约翰逊不动杆菌grp2580083能导致斑点叉尾鮰患病,症状与嗜麦芽寡养单胞菌感染具有类似性,对渔业养殖造成影响。 相似文献
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17 feces samples of yak which were collected in Hongyuan county were measured with Gram staining method and 16S rRNA molecular identification in this study.8 suspected Enterococcus were separate from feces samples by bacteria purification and PCR amplification with 1 500 bp specific band. 6Enterococcus faecalis and 2Enterococcus faecium were identified through 16S rRNA sequencing.The homology analysis of the strains revealed that the homology between Enterococcus faecalis and reference strains sequence were 99.7% to 100%,that of Enterococcus faecium and reference sequence were 98.2% to 99.2%,indicating that the yak Enterococcus was highly conserved in the process of genetic evolution.The drug sensitive test results showed that the isolated strains were highly resistance to aminoglycoside antibiotics.Enterococcus faecium 11-1-2 strain was not only 5 multi-resistant,but also showed resistence to vancomycin.Enterococcus faecalis strains was most 3 multi-resistant.The antibiotics resistance results revealed that the resistance of yak Enterococcus was serious and should be taken seriously. 相似文献
18.
试验结合革兰氏染色及16S rRNA分子鉴定,对分离自红原县的17份牦牛粪便样中的肠球菌进行鉴定。结果显示,通过细菌分离纯化及PCR扩增,从牦牛粪便样品中分离出8株疑似肠球菌,分离菌的扩增产物经凝胶电泳后均产生1 500 bp特异性条带。16S rRNA测序结果显示,8株疑似肠球菌中,6株为粪肠球菌,2株为屎肠球菌。同源性比对分析显示,粪肠球菌与参考序列同源性为99.7%~100.0%,屎肠球菌与参考序列同源性为98.2%~99.2%,说明牦牛源肠球菌在遗传进化过程中高度保守。运用K-B纸片法进行药敏试验,结果显示,分离株对氨基糖苷类抗生素耐受性较高,2株屎肠球菌中,11-1-2菌株表现为5重耐药,且该菌株耐万古霉素,粪肠球菌主要表现为3重耐药,药敏结果提示牦牛源肠球菌耐药较严重,应引起高度重视。 相似文献