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6个猪种胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因座位遗传多态性检测 总被引：16，自引：0，他引：16
本文采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析方法对我国地方猪种民猪、香猪、桃源猪、内江猪、姜曲海猪以及用作对照的国外猪种杜洛克猪的ＩＧＦ－１基因座位进行研究。结果发现：ＩＧＦ－１基因ＰＣＲ扩增片段存在２个限制性内切酶ＨｈａＩ酶切位点，其中１个酶切位点产生遗传多态。此片段上共产生２个等位基因。在ＩＧＦ－１基因位点上，香猪除与桃源猪基因频率差异不显著之外，与其它猪种之间基因频率差异极显著（Ｐ＜０．０１），而其它各猪种之间差异均不显著 相似文献
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6个猪种胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因座位遗传多态性检测 总被引：3，自引：0，他引：3
本文采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析方法对我国地方猪种民猪、香猪、桃源猪、内江猪、姜曲海猪以及用作对照的国外猪种杜洛克猪的ＩＧＦ－１基因座位进行研究。结果发现：ＩＧＦ－１基因ＰＣＲ扩增片段存在２个限制性内切酶ＨｈａＩ酶切位点,其中１个酶切位点产生遗传多态。此片段上共产生２个等位基因。在ＩＧＦ－１基因位点上,香猪除与桃源猪基因频率差异不显著之外,与其它猪种之间基因频率差异极显著（Ｐ＜０．０１）,而其它各猪种之间差异均不显著 相似文献
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猪恶性高温综合征（MHS）基因群体检测及部分片段DNA序列研究 总被引：4，自引：0，他引：4
本研究主要包括：（１）建立了猪ＭＨＳ基因检测的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法。该方法具有准确、快速和无侵害的特点；（２）利用猪ＭＨＳ基因的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对中国现有猪种２０个群体的ＭＨＳ基因座位的基因和基因型频率进行了检测。结果表明，属于中国的本地品种五指山猪、香猪，引进品种约克夏猪，均不含有ＭＨＳ基因；在中国本地品种二花脸猪和民猪中，发现存在ＭＨＳ基因，且民猪的频率较高（０．１５６２）；培育品种北京花猪，引进品种丹系长白猪和杜洛克猪，均有ＭＨＳ基因；引进品种皮特兰猪、比系长白猪，ＭＨＳ基因频率最高，分别为０．９５２０和０．９４３２；（３）猪ＲＹＲ１／ＣＲＣ基因部分ＤＮＡ序列品种间比较，ＭＨＳＮＮ香猪和二花脸猪的１８４３位为“Ｃ”，而ＭＨＳｎｎ为“Ｔ”；同时还发现一些单碱基的差异 相似文献
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猪RYR_1基因的PCR-RFLP分析和氟烷基因利用的研究 总被引：15，自引：0，他引：15
采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析技术，以血液或猪毛提取ＤＮＡ为模板，建立了快速和简便的从分子水平上鉴别ＲＹＲ１基因型的方法，其准确率为１００％。不同品种（系）初步配套杂交结果显示：皮特兰×抗应激猪的胴体品质优于杜洛克×抗应激猪（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），而肉质优于皮特兰×应激群猪（Ｐ＜０．０１），并提出了氟烷基因的利用策略 相似文献
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通过猪毛检测丹麦长白猪氟烷基因的变异 总被引：11，自引：2，他引：9
采集５６头丹麦长白猪（其中１头为１周龄的仔猪，２６头种公猪，２９头种母猪）猪毛样品，粗提ＤＮＡ，进行ＰＣＲ扩增，得到６５９ｈｐ在氟烷基因中（即兰尼定受体基因）中第１８４３个碱基的异片段，经过ＨｈａＩ酶切和电泳来检测氟烷基的变异，即其基因型，结果表明，（１）５６头长白猪中，阳性猪（ｎ／ｎ）１头占１．７９％，杂合子猪（Ｎ／ｎ）为１８头，占３２．１４％，阴性猪（Ｎ／Ｎ）为３７头，占６６．０７％杂合子数实 相似文献
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以ＰＣＲ方法克隆得到猪源大肠杆菌ＳＴ１基因缺失ＣｏｏＨ端了后两个编码密友和终止密码的ＤＮＡ片段，并以该片段为探针，筛选了以载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ构建的猪大肠力Ｐ５５质粒ＤＮＡ文库，得到插入片段约５．５ｋｂ阳性克隆，亚克隆了约０．５ｋｂ含ＳＴ基因的ＴａｑＩ酶切片段，并对该基因核苷酸序列进行了分析。应用竞争性ＥＬＩＳＡ测定了ＳＴ基因在不同启动子调控下的表达情况，在Ｔ７启动子调控下，ＳＴ基因在大肠 相似文献
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我国鸡传染性支气管炎病毒地方性流行毒株S1基因的RT—PCR扩增及其 … 总被引：1，自引：0，他引：1
采用ＲＴ－ＰＣＲ方法,以ＩＢＶ Ｓ１全基因特异性引物分别从我国华东,华北,华中,华南,西北及东北等地的ＩＢＶ流行株基因组中扩增出预期的１．７ｋｂ左右的ＤＮＡ片段。ＰＣＲ产物的ＨａｅⅢ酶切分析及其与英国ＩＢＶ Ｓ１全基因核酸探针的分子杂交证实所获６个ＩＢＶ流行株的ＰＣＲ产物为ＩＢＶ Ｓ１基因。将此６个毒株的Ｓ１基因ＰＣＲ产物分别进行５‘和３’端的ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切识别位点的分子修饰之后插入到 相似文献
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鸡传染性喉气管炎病毒中国王岗株gX基因的克隆及鉴定 总被引：4，自引：1，他引：3
以ｐＵＣ１９质粒为载体克隆鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）中国王岗株的ＤＮＡ，构建了鸡传染性喉气管炎病毒ＤＮＡ的ＫｐｎⅠＤＮＡ文库。参考ＩＬＴＶ－ＳＡ２株ｇＸ基因的核酸序列，设计并合成了分别为１２ｂｐ和１３ｂｐ的１对引物。以ＩＬＴＶ中国王岗株ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ方法特异性地扩增出０．８４ｋｂ的ＩＬＴＶ－ｇＸ基因片段。以地高辛标记该０．８４ｋｂ的片段为探针，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交从ＩＬＴＶ中国王岗株ＫｐｎⅠＤＮＡ文库中筛选出３个含５．２ｋｂ外源ＩＬＴＶＤＮＡ片段的ｇＸ基因阳性重组子。经酶切分析、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、ＰＣＲ检测和该片段部分酶谱分析表明，ＩＬＴＶ中国王岗株ＤＮＡ５．２ｋｂ的ＫｐｎⅠ片段无论是片段大小还是酶切图谱均与ＩＬＴＶ－ＳＡ２株完全相同，而且Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ检测均为ｇＸ阳性，证明其中含有完整的ｇＸ基因 相似文献
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马立克氏病病毒Rispens株和RL株B抗原基因的分离,克隆及初步酶？… 总被引：2，自引：0，他引：2
将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ｉ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株和ＲＬ株分别接种于原代鸡胚成纤维细胞，待出现８０％以上细胞病变后收获，经蛋白酶Ｋ消化，酚，氯仿抽提，乙醇沉淀细胞和病毒的总ＤＮＡ（ｔｏｔａｌＤＮＡ）。以此为模板，根据发表的Ｂ抗原基因核苷酸序列设计１对引物，通过聚合物酶链反应（ＰＣＲ）扩增出１条约２．８５ｋｂ的特异性条带，斑点杂交证实其对Ｂ抗原基因，双酶切消化后，克隆到质粒ｐＵＣ１９中，酶切分析表明 相似文献
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我国鸡传染性支气管炎病毒地方性流行毒株S1基因的RT-PCR扩增及其克隆与鉴定 总被引：2，自引：0，他引：2
采用ＲＴ－ＰＣＲ方法,以ＩＢＶＳ１全基因特异性引物分别从我国华东（ＨＤ）、华北（ＨＢ）、华中（ＨＺ）、华南（ＨＮ）、西北（ＸＢ）及东北（ＤＢ）等地的ＩＢＶ流行株基因组中扩增出预期的１．７ｋｂ左右的ＤＮＡ片段。ＰＣＲ产物的ＨａｅＩＩ酶切分析及其与英国ＩＢＶＳ１全基因核酸探针的分子杂交证实所获６个ＩＢＶ流行株的ＰＣＲ产物为ＩＢＶＳ１基因。将此６个毒株的Ｓ１基因ＰＣＲ产物分别进行５’和３’端的ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄＩＩ酶切识别位点的分子修饰之后插入到克隆质粒ｐＵＣ１８的ＢａｍＨＩ／ＨｉｎｄＩＩ位点,在大肠杆菌中实现了目的基因的分子克隆。Ｓ１基因的ＲＦＬＰ分析表明我国ＩＢＶ已有分子水平的变异。 相似文献
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绵羊SRY基因的分子克隆及序列分析 总被引：4，自引：1，他引：3
本研究利用常规方法提取绵羊基因组ＤＮＡ，根据人的ＳＲＹ基因核心序列设计合成了一对引物Ｐ１、Ｐ２。用ＰＣＲ技术对公、母绵羊基因组ＤＮＡ进行体外扩增，将所扩增出的公绵羊特异性ＳＲＹ基因片段重组到质粒ＤＮＡｐＵＣ１９的ＳｍａＩ部位并转化到Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ１０Ｂ中。挑选阳性克隆进行微溶分析，并用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＨｉｎｄⅢ酶解。鉴定结果表明，插入片段长度与ＰＣＲ扩增带相符，约２０３ｂｐ。用Ｓａｎｇｅｒ的双脱氧末端终止法测定绵羊ＳＲＹ基因核心序列的部分序列，结果表明，用ＰＣＲ分离并重组到质粒载体中的绵羊ＳＲＹ基因核心序列部分序列长度为２０３ｂｐ，这与设计完全相符。其中该序列的１５５个ｂｐ与人的ＳＲＹ基因相应序列的同源性为８２．５８％（１２８／１５５）。可见哺乳动物ＳＲＹ基因的核心序列具有高度保守性，种间差异很小。 相似文献
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噬菌体肽库的构建及抗狂犬病病毒肽的筛选 总被引：1，自引：0，他引：1
体外合成编码６肽的随机ＤＮＡ片段以及用于随机。ＤＮＡ片段扩增的１对ＰＣＲ引物，经ＰＣＲ扩增ＢｇｌⅠ酶切扩增产物，得到编码６肽的随机ＤＮＡ克隆片段，将随机ＤＮＡ克隆片段与噬菌体表达载体（ＦＵＳＥ５）相连接，连接产物电转化ＭＣ１０６１宿主菌，经抗性和插入复活筛选，获得１．６×１０＾８个独立克隆。文库经ＰＣＲ扩增、斑点杂交、序列测定等综合鉴定，结果表明已成功构建了噬菌体６肽表面表达文库。用生物素化的抗狂 相似文献
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猪生殖与呼吸综合征病毒ORF6片段的cDNA克隆及鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
根据已发表的ＰＲＲＳＶ基因组序列，设计并合成了１对特异扩增ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２株的ＯＲＦ６的基因的引物，以ＡＴＣＣ ＶＲ－２３３２基因组为模板，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增出５８６ｂｐ的ｃＤＮＡ产物。将该ｃＤＮＡ片段经Ｔ－Ａ连接插入ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ载体中，用重组质粒转化大肠埃希氏菌ＪＭ１０９，获得重组质粒转化菌。对重南粒ＤＮＡ进行ＰＣＲ及酶切鉴定，证明插入的ＤＮＡ片段与ＰＣＲ扩增的ＤＮＡ片段大小相 相似文献
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采用蛋白酶Ｋ法从母牛肝中提取染色体ＤＮＡ,将其纯化后作为ＰＣＲ扩增模板。以引物设计软件从牛β－酪蛋白基因上游６００ｂｐ至第１个外显子设计引物,引物长度１９ｎｔ,跨度６３７ｂｐ。扩增产物电泳结果显示,在分子量Ｍａｒｋｅｒ６５７ｂｐ带附近,出现一明显亮带,这一结果与设计产物大小基本一致。用低温冷冻法纯化ＰＣＲ产物,煮沸裂解法提取载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＫｓ＋质粒,ＥｃｏＲＶ酶切质粒ＤＮＡ,Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接ＰＣＲ扩增片段和质粒ＤＮＡ。将重组质粒ＤＮＡ转化到ＪＭ１０１大肠杆菌中,经筛选、酶切、测序鉴定,结果表明所克隆的片段为牛β－酪蛋白基因上游调控序列。 相似文献
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马立克氏病病毒Rispens株和RL株B抗原基因的分离、克隆及初步酶切分析 总被引：3，自引：0，他引：3
将马立克氏病病毒（ＭＤＶ）血清Ⅰ型Ｒｉｓｐｅｎｓ株和ＲＬ株分别接种于原代鸡胚成纤维细胞，待出现８０％以上细胞病变后收获，经蛋白酶Ｋ消化，酚、氯仿抽提，乙醇沉淀细胞和病毒的总ＤＮＡ（ｔｏｔａｌＤＮＡ）。以此为模板，根据已发表的Ｂ抗原基因核苷酸序列设计１对引物，通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增出１条约２．８５ｋｂ的特异性条带，斑点杂交证实其为Ｂ抗原基因。双酶切消化后，克隆到质粒ｐＵＣ１９中。酶切分析表明，在这２株病毒的Ｂ抗原基因上，ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＶ、ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ的酶切位点分布与超强毒ＲＢＩＢ株、标准强毒ＧＡ株的完全相同。 相似文献
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应用反转录聚合酶链反应检测鸡传染性支气管炎病毒核酸的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
根据国外报道的鸡传染性支气管炎病（ＩＢＶ）Ｇｒａｙ株的纤突蛋白（Ｓ１）核苷酸序列，自行设计合成了Ｓ１蛋白主要抗原决定簇基因两侧的１对引物，跨幅为１．０ｋｂ。用该引物对从内蒙古、天津、山东等地分离的３株ＩＢＶ进行ＲＮＡ提取，反转录后ＰＣＲ，经琼脂糖凝胶电泳结果表明，３株毒株均获得了与预期一致的ＰＣＲ产物；此外，ＩＢＶＰＣＲ灵敏度的测定结果表明，ＰＣＲ方法可检测出１０ｐｇ的模板，ＰＣＲ酶切结果为，ＨａｅⅢ、ＴａｇⅠ酶对３株ＰＣＲ产物均有１个酶切位点，而ＭｓＰⅠ酶无酶切位点 相似文献
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依据牛１．７０９卫星ＤＮＡ序列设计了１对引物，建立了ＰＣＲ鉴定生、熟牛肉的方法。应用本方法特异地扩增出预期的牛２１８ｂｐＤＮＡ片段，其检测敏感度对生牛肉达３３．６ｆｇＤＮＡ，对熟牛肉和高压牛肉为０．３２ｐｇ。运用该引物均可扩增出水牛、牦牛、奶牛、黄牛肉单一的相同大小的ＤＮＡ条带，而对马、山羊、绵羊、骆驼、鹿、猪等１５种动物肉的ＤＮＡ扩增则呈阴性。扩增片段经ＨａｅⅢ酶切分析确认，所得１２９、７９、１０ｂｐ片段与微机分析结果一致。利用本法对１０３份生、熟牛肉及其制品进行鉴定，检出率为１００％。对各种样品检测，均可在６ｈ内完成。 相似文献