猪IL-10的表达及其免疫原性鉴定     

李倬  郑其升  陈瑾  侯红岩  薛刚  侯继波 《江苏农业学报》2012,(1):92-98

为探明原核表达的重组猪IL-10对仔猪的免疫原性,根据GenBank公布的猪IL-10基因序列(登录号:L20001)设计并合成了扩增猪IL-10基因的引物。利用ConA刺激猪外周血淋巴细胞,通过RT-PCR扩增出pmIL-10完整基因及其成熟蛋白基因片段(pmIL-10),分别插入质粒pVAX1和pET32α(+),对猪IL-10基因进行原核与真核表达。利用纯化的重组蛋白免疫仔猪,制备抗血清,利用间接ELISA检测血清效价。将pVAX-pIL-10转染COS-7细胞,利用RT-PCR检测pmIL-10的转录,以间接免疫荧光(IFA)鉴定其与原核表达产物制备抗体之间的反应。结果显示:该试验成功获得了猪IL-10基因,重组菌pET-pmIL-10/Rosetta经IPTG诱导后,猪IL-10获得表达,目的蛋白表达量以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的39.7%;以白油佐剂重组蛋白免疫仔猪可产生高水平的抗猪IL-10的抗体,经ELISA检测,P/N值可达到8,OD630吸光值可达1.875,该抗体与转染pVAX-pmIL-10的COS-7细胞发生明显的荧光反应,说明原核表达的重组猪IL-10免疫产生的抗体具有生物学活性,为日后利用猪IL-10抗体消除病毒感染中产生的内源性IL-10研究奠定了基础。  相似文献   

稳定表达CD163蛋白的猪肺泡巨噬细胞系的建立     

赵凯  冯磊  郑其升  侯继波  陈溥言 《江苏农业学报》2012,28(3):565-570

以RT-PCR方法从原代猪肺泡巨噬细胞中获得CD163 cDNA序列,然后测序鉴定,对突变碱基进行修正,将修正后碱基序列克隆入真核表达载体pcDNA4.0中,构建重组真核表达质粒pcDNA4.0-CD163,通过BamHⅠ/NotⅠ双酶切及测序鉴定其正确性。使用脂质体2000将pcDNA4.0-CD163转染猪肺泡巨噬细胞系3D4/21(CRL-2843),通过Zeocin抗性筛选,建立稳定表达CD163的猪肺泡巨噬细胞系。RT-PCR、间接免疫荧光(IFA)检测结果表明CD163在mRNA和蛋白质水平均已表达。通过Zeocin抗性筛选,共获得8株表达CD163的重组细胞株,IFA检测结果表明表达的CD163定位于重组细胞的细胞膜表面。去除筛选抗性后连续传代10代,间接免疫荧光检测结果确定重组细胞株在10代内性状稳定,说明稳定表达CD163的猪肺泡巨噬细胞系构建成功。  相似文献   

Marc-145细胞微载体悬浮培养及PRRSV增殖工艺的建立     

冯磊  褚轩  吴培培  王伟峰  侯继波 《江苏农业学报》2012,28(3):598-603

采用分批式培养方法研究了Marc-145细胞微载体悬浮培养及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖工艺。结果表明,在3 g/L的微载体用量下,采用1 ml 3×105个细胞的初始接种密度及培养至第3 d进行换液操作工艺可以获得最佳的Marc-145细胞生长效能。采用感染复数为0.05的接毒比例及接毒后48 h收获毒液可获得最高的PRRSV增殖效价。在5 L反应器中重复验证上述工艺,获得较为稳定的试验结果,最大细胞密度均可高于1 ml 2×106个细胞,PRRSV的增殖效价均高于108.0TCID50/ml。为猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗的生物反应器规模化生产奠定了基础。  相似文献   

近年来鸡传染性支气管炎流行病学特征     

唐应华  何家惠  侯继波 《兽医导刊》2009,(11):26-28

鸡传染性支气管炎（IB）是由传染性支气管炎病毒（IBV）引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病,主要侵害鸡的呼吸系统、消化系统以及泌尿生殖系统,引起鸡咳嗽、喷嚏、气管哕音、呼吸困难、肠炎、产蛋数量和质量下降等症状。  相似文献   

不同源传染性法氏囊病病毒的分离及其生物学特性分析     

王永山  周宗安  刘玉  侯继波  何孔旺  丁铲  邓小昭  高健  刁振宇 《动物医学进展》2003,24(4):84-86

用传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)单克隆抗体夹心抑制 EL ISA对麻雀、鸭、鹅进行了血清学调查 ,阳性率分别为 7.4% ( 4/ 54 )、95.5%( 3 6 3 / 3 80 )、9.4% ( 1 1 / 1 1 7)。从 IBD阳性麻雀、IBD病鸡以及同群饲养的鸭、鹅体内分离到了 4株不同源病毒 ,IBDV单克隆抗体夹心 EL ISA、Dig-标记 IBDV c DNA探针斑点杂交和交叉中和试验证明该病毒均为 IBDV血清 型。病毒可适应并致死鸡胚 ,适应于鸡胚成纤维细胞并产生细胞病变效应 ( CPE)。病毒代谢抑制试验证明其基因组为 RNA,病毒对乙醚不敏感 ,p H2 .0不能灭活病毒 ,p H 1 2可使病毒失去感染性 ,56℃作用 3 h病毒仍有活性 ,70℃ 1 h可灭活病毒。以上结果表明 ,从鸡、麻雀、鸭、鹅体内分离到的 IBDV生物学性质比较稳定且非常相似。本研究结果提示 IBDV已在我国广泛流行 ,麻雀、鸭、鹅可成为 IBDV携带者或传染源 ,在 IB-DV传播和生态变异中起重要作用  相似文献   

江苏省4种引致猪繁殖障碍的病毒病流行病学调查     

何家惠  侯继波  王继春  张敬友  徐筠遐  刘冬霞  诸长贵  王伟峰  刘跃兴  杨瑛 《畜牧与兽医》2000,32(4):10-12

采集江苏省苏南、苏北、苏中 3个不同地区未经猪细小病毒、伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒及猪乙型脑炎 4种病毒疫苗免疫的后备母猪、有流产史的经产母猪及种公猪血清样品 10 0 0份 ,应用血清学方法检测样品的上述 4种病毒抗体。结果表明 :猪繁殖与呼吸障碍综合征阳性率 0 83 % ,而猪细小病毒、猪乙型脑炎病毒、伪狂犬病病毒感染率达 30 %～ 80 %。在经产母猪群中有 85 8%发生不同程度混合感染 ,主要是以猪细小病毒与猪乙型脑炎病毒混合感染为主。疫苗免疫试验验证了血清学调查结果。种公猪群猪伪狂犬病病毒的阳性率较高  相似文献   

马立克氏病的综合防控措施     

邓碧华  何家惠  侯继波 《兽医导刊》2010,(6):25-27

马立克氏病（MD）是最常见的一种鸡淋巴组织增生性传染病，是由马立克氏病病毒（MDV）引起鸡的一种高度接触性传染性肿瘤疾病，以淋巴组织的增生和肿瘤形成为特征。马立克氏病是目前惟一可以用疫苗预防的肿瘤性疾病，也常被用来作为肿瘤性疾病的治疗模型。  相似文献   

猪传染性胸膜肺炎的流行病学和流行特点     

侯红岩  何家惠  侯继波 《兽医导刊》2010,(9):33-35

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的一种接触性传染病,是猪的一种重要呼吸道疾病,在许多养猪国家流行,已成为世界性工业化养猪的五大疫病之一,给养猪业造成重大的经济损失。近年来该病的流行日趋严重,在我国也呈逐年上升趋势,严重阻碍了养猪业的健康发展。9～11月是猪传染性胸膜肺炎的高发季节,气温的骤变也可引起本病的发生或加速疾病的传播,使发病率和死亡率增加。众多的血清型以及血清型之间的交互免疫保护率低,使得本病的防控也较为困难。科学、全面的流行病学,快速、准确的诊断技术,合理、有效的防控方法,正确、安全的疫苗应用对防控猪传染性胸膜肺炎病尤为重要。  相似文献   

囊素对鸡传染性法氏囊病弱毒苗免疫的影响     

邓碧华  王凯民  卢宇  张金秋  吕芳  何家惠  侯继波 《黑龙江畜牧兽医》2014,(6):43-45

为了研究囊素对鸡传染性法氏囊弱毒苗免疫效果的影响,将囊素按不同剂量与法氏囊弱毒苗混合滴鼻接种雏鸡。对接种后7,14,21和51日龄的鸡进行抗体琼扩效价检测、抗体转阳率检测和囊指数测定。结果显示:中等剂量(10μg/羽)囊素添加的鸡传染性法氏囊弱毒疫苗组抗体效价产生和持续时间高于其他剂量组和疫苗对照组(低毒力),囊指数值也高于其他组;鸡传染性法氏囊弱毒疫苗(中等毒力)接种试验鸡,能长时间维持较高抗体,但对鸡的法氏囊损伤较大。试验证明,适当剂量的囊素对鸡传染性法氏囊弱毒疫苗具有免疫增强作用和减少法氏囊损伤作用。  相似文献   

鸭瘟鸡胚化弱毒株细菌人工染色体的构建与鉴定     

张传健  许梦微  王志胜  侯继波  王继春 《江苏农业学报》2014,(5)

为了构建鸭瘟鸡胚化弱毒株DEV(atten)的细菌人工染色体(BAC),将转移载体质粒pDEVgC-pHA2DNA和DEV(atten)DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行重组,通过三轮挑斑纯化,以获得纯化的鸭瘟重组病毒。将纯化的鸭瘟重组病毒的DNA电转化到E.Coli DH10B中,对获得的克隆用酶切、PCR方法进行鉴定并测序。提取阳性克隆的DNA转染CEF,以拯救重组病毒。再通过将带有相同同源臂和UL44(糖蛋白质C,gC)基因的片段和阳性克隆的DNA共转染鸡胚成纤维细胞进行重组,以获得gC恢复病毒。采用0.01感染复数(MOI)感染CEF对亲本病毒、恢复病毒进行多步法生长曲线测定,比较其有无差异。结果显示:成功获得了DEV的mini-F重组病毒,命名为DEV(atten)-mini-F,获得2个阳性克隆S1、S2,将S1命名为pDEV(atten),应用pDEV(atten)拯救重组病毒获得gC恢复病毒DEV(atten)ΔgC-R,生长特性的结果显示亲本病毒与恢复病毒间无显著性差异。表明成功构建的DEV(atten)的细菌人工染色体为全基因组的感染性克隆。  相似文献