新疆小拟南芥NPR1基因对植物系统获得性抗性的影响     

裴娟  欧秀玲  李凤  孔德真  王琨  易小龙  祝建波  王爱英 《中国农学通报》2016,32(14):44-49

旨在研究小拟南芥NPR1基因的第三内含子对基因表达的影响。克隆出带有第三内含子的小拟南芥NPR1基因,构建诱导型植物表达载体并对拟南芥进行农杆菌遗传转化,经5 mmol/L外源水杨酸12 h诱导,利用Real-time PCR技术检测拟南芥病程相关蛋白的表达量。结果显示野生型拟南芥的NPR1、PR-1、PR-2、PR-5表达量高于转基因拟南芥;相对于野生型拟南芥,转基因拟南芥中SOD、POD酶活显著降低,而CAT酶活增加未达到显著水平。结果表明转入含有第三内含子的Ap.NPR1基因,转基因植株系统获得性抗性途径受到抑制,植株抗病性降低,说明第三内含子使得系统获得性抗性途径的基因表达受到抑制。  相似文献   

能源橡胶草GGPPS基因启动子的克隆及瞬时表达研究     

李永梅  冯玉杰  曹新文  赵李靖  祝建波  闫洁 《草业学报》2016,25(12):180-187

以多年生宿根型草本植物橡胶草为材料,根据已获得的橡胶草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,GGPPS)基因序列设计引物,采用TAIL-PCR扩增到GGPPS基因5'上游大小为1131 bp的序列。采用PlantCare和PLACE软件分析,表明该序列不仅具有启动子的基本元件,同时还有与多个器官特异表达元件以及与胁迫相关的顺式作用元件,命名为pTkGGPPS(GenBank:KT901796)。将该序列代替pCAMBIA1304质粒上的CaMV 35S启动子序列,以GFP基因作为报告基因,构建pCAMBIA1304-pTkGGPPS-GFP植物表达载体,利用农杆菌介导法转化洋葱表皮细胞,结果表明,该启动子能够驱动GFP基因表达,具有一定的活性。TkGGPPS基因启动子克隆及瞬时表达为橡胶草中橡胶合成及组织特异性研究奠定了基础。  相似文献   

大叶补血草Na~+/H~+逆向转运蛋白基因NHX1的克隆及番茄的遗传转化     

宋晓丽  祝建波  周玲玲 《西北农业学报》2009,18(6):192-196

根据NCBI公布的大叶补血草NHX1基因序列设计特异性引物,经RT-PCR方法克隆得到大叶补血草液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因NHX1,构建植物融合表达载体pCAMBIA1301-NHX1,重组质粒通过农杆菌介导转化番茄,经PCR和RT-PCR鉴定,获得转基因番茄植株.本研究为大叶补血草耐盐基因NHX1的进一步功能分析和应用奠定了一定的理论基础.  相似文献   

大叶补血草Na+/H+逆向转运蛋白基因NHX1核心片段的克隆及序列分析     

宋晓丽  祝建波  周玲玲 《江苏农业科学》2009,(5)

根据GenBank中已登陆植物的Na+/H+逆向转运蛋白基因的保守序列设计简并引物,以盐生植物大叶补血草总RNA为模板,通过RT-PCR方法得到长为983 bp的片段,将其克隆到pGM-T载体上,经PCR和酶切鉴定筛选得到阳性克隆,并进行测序.通过DNAMAN软件对该序列进行同源性比对,结果表明,本研究所克隆的基因片段编码的氨基酸序列与拟南芥、小麦、滨藜、番杏、冰叶日中花的Na+/H+逆向转运蛋白同源性很高,其同源性分别为80.06%、72.00%、82.07%、82.37%和82.37%,表明该序列确属Na+/H+逆转运蛋白基因的部分片段,同时也说明Na+/H+逆向转运蛋白基因在植物中高度保守.  相似文献   

F3′5′H基因的克隆、表达载体构建与矮牵牛遗传转化   总被引：3，自引：1，他引：2  

司爱君  祝建波  李吉莲  邓福军 《西北农业学报》2008,17(5):306-309,329

类黄酮3′5′羟基化酶(Flavonoid-3’,5-’hydroxylase;F3′5′H)是花色素苷代谢途径中的一个关键性酶,能使花色素的合成趋向于形成蓝色的飞燕草色素。从蓝紫色矮牵牛的花瓣中提取总RNA,利用RT-PCR技术克隆得到了约1.7kb的F3′5′H片段。F3′5′H的cDNA序列分析结果表明,克隆得到的序列与原序列同源性达到99.34%,开放读码框为1 521 bp,编码507个氨基酸。将推算的氨基酸序列与NCBI登录的氨基酸序列进行分析比较,发现与文献报道的存在2个氨基酸差异,氨基酸同源率为99.6%。将此基因构建到含有35S启动子的植物表达载体PBI-F3′5′H上,并通过农杆菌介导法对粉红色矮牵牛进行了遗传转化,初步鉴定获得了转基因植株。  相似文献   

KLU基因转化亚麻荠的初步研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

高立虎  蔡永智  王爱英  沈海涛  祝建波 《河南农业科学》2013,(10)

为进一步提高油料作物亚麻荠的含油量,克隆拟南芥胚珠组织特异型基因的启动子p I NO和拟南芥细胞色素P450 KLUH基因（KLU）,以植物表达载体pCAMBIA2301为基础载体,构建组织特异性启动子pINO调控 KLU基因的植物表达载体pCAMBIA2301 pINO KLU ,用根癌农杆菌介导的floral dip法转化亚麻荠。结果表明,农杆菌培养至OD600值为0．8时,用等体积渗入培养基（1/2 MS、5％蔗糖、200μL/L Silwet L 77）重悬菌体转化亚麻荠,50 mg/L卡那霉素检测转基因种子的阳性率为15％,PCR检测初步证明,KLU基因已整合到部分抗性植株的基因组中,转化率为1．8％。  相似文献   

橡胶草高频再生体系的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

罗成华  闫洁  祝建波 《北方园艺》2012,(7):115-119

以橡胶草叶片为外植体,研究了消毒时间、外源激素等因素对外植体成活率、不定芽的诱导、伸长和生根的影响。结果表明:用0.1%的升汞处理7min为最佳消毒方法,最佳的再生培养基为MS+1.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA,平均诱导率为97.3%,芽伸长培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.02mg/L NAA+0.4mg/L GA3,生根培养基为1/2MS+0.2mg/L NAA,生根率为100%,所获得的组培苗生长健壮且移栽成活率高,最终摸索出了橡胶草最佳的再生体系。  相似文献   

转菜豆几丁质酶基因和烟草葡聚糖酶基因抗病棉花的种植对棉花根际土壤酶活性的影响     

吴名付  祝建波  王爱英 《农业环境科学学报》2012,31(6):1160-1164

本研究探讨了转菜豆几丁质酶基因和烟草葡聚糖酶基因的抗病棉花株系7p、28p(双价载体)以及受体高代材料97185、79701的种植对根际土壤过氧化氢酶活性、蛋白酶活性、纤维素酶活性、脲酶活性、蔗糖酶活性的影响。结果表明:整个生育时期抗病转基因棉花根际土壤的过氧化氢酶活性与其受体之间差异不显著(P>0.05)。另外,根际土壤的蛋白酶活性、纤维素酶活性、脲酶活性、蔗糖酶活性在同一生育期内差异不显著(P>0.05),而在不同的生育时期差异显著(P<0.05)。说明抗病转基因棉花的种植对根际土壤过氧化氢酶和蛋白酶几乎无影响,而根际土壤纤维素酶、脲酶、蔗糖酶活性的变化转基因抗病棉花与受体种植之间几乎没有影响,而在不同棉花株系和生育期之间产生一定的影响,这可能与不同基因类型以及生育期植株根部分泌物有关。研究初步表明转基因抗病棉花的种植对土壤微生态的影响不大。  相似文献   

烟草、苜蓿及甜瓜对甘露糖耐受性比较研究   总被引：5，自引：0，他引：5  

王延蛟  陈创夫  祝建波 《内蒙古农业科技》2006,(3):18-19

为了研究烟草、苜蓿及甜瓜对甘露糖耐受性,分别对这3种植物外植体进行了不同梯度的甘露糖的敏感性实验。实验结果表明,烟草和苜蓿对甘露糖不敏感,甜瓜在甘露糖与蔗糖比例达到46∶时显示出甘露糖对其的毒性,当比例达到64∶甜瓜彻底死亡。这一结果也说明并非所有的植物都适于以甘露糖为筛选剂的植物遗传转化。  相似文献   

抗病基因转化新疆伽师瓜研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

孔庆军  任雪艳  祝建波  李卓夫  朱新霞 《东北农业大学学报》2008,39(1):67-70

成熟子叶切块作为外殖体,经过组织培养获得再生植株。以MS作为基本培养基,取3日龄子叶块外殖体,选用MS+6-BA1.5mg·L-1+IAA0.3mg·L-1诱导从生芽,最高诱导率可达78%。分化再生过程中,6-BA浓度逐渐降低。在生根培养时,用MS+0.3mg·L-1NAA诱导生根率较高,根系粗壮。在建立甜瓜高效再生体系的基础上,用根癌农杆菌介导法将几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因导入新疆甜瓜中,经卡钠霉素的抗性筛选,获得转化的再生植株。通过PCR反应及Southern Blot检测,进一步研究了再生植株的基因整合与表达情况,获得与阳性对照一致的特异带,可初步证明外源基因已整合到甜瓜基因组中。  相似文献