sikFBA4基因启动子的克隆及低温表达模式分析     

张尧  李忠晴  王爱英  祝建波 《草业学报》2018,27(12):199-207

天山雪莲生长于常年积雪覆盖高海拔处的高山区域,具有很强的极端低温生境适应能力,属于研究植物低温适应的良好模式植物。前期的研究表明,sikFBA4基因可以显著提高番茄的抗寒能力。为进一步研究sikFBA4基因的耐寒响应模式,以天山雪莲为材料,采用实时荧光定量PCR分析sikFBA4在低温胁迫下的表达模式;利用高效热不对称PCR法(Hi-Tail PCR)克隆sikFBA4启动子序列并进行生物信息学分析。为分析PsikFBA4序列克隆的完整性及转录表达特性,将PsikFBA4与GUS基因融合在烟草中进行瞬时表达。结果表明,sikFBA4在低温胁迫条件下的表达发生瞬时显著上调,并在1 h达到峰值,而后表达下调。通过启动子克隆分析,在PsikFBA4序列-1648 bp位置处具有冷响应元件LTRE;进一步的GUS染色和酶活力测定结果表明,低温能够显著提高GUS基因的表达活性,说明sikFBA4属于低温诱导型基因。SikFBA4基因启动子的克隆、序列分析以及表达分析,为进一步探究雪莲果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(sikFBAs)基因的表达与调控机制奠定了基础。  相似文献   

MLL启动子驱动SST基因转化甜菜的抗旱性分析     

梁文洁  张丽  郭新勇  王爱英  向本春  祝建波 《江苏农业科学》2018,(5)

  相似文献   

蛋白桑叶片再生体系的建立及对草丁膦敏感性测定     

熊意  王红红  张芳松  穆建强  祝建波 《北方园艺》2016,(17)

以蛋白桑的幼嫩叶片为外植体,以MS为基本培养基,采用正交实验设计,研究不同浓度的植物生长调节剂对蛋白桑植株再生的影响。结果表明:叶片诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+TDZ 1.0mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1);最佳分化培养基为MS+TDZ 0.2mg·L~(-1)+NAA 0.09mg·L~(-1),分化率为21.65%;培养基1/2MS+PVP 0.2g·L~(-1)+NAA 0.5mg·L~(-1)生根率最高,达到66.70%;对草丁膦的敏感性试验中,草丁膦浓度0.04mg·L~(-1)为蛋白桑叶片半致死浓度,草丁膦浓度0.05mg·L~(-1)对蛋白桑叶片的致死率为75.00%,草丁膦浓度0.07mg·L~(-1)的致死率为100.00%。  相似文献   

新疆野苹果小吉丁虫防治试验     

刘逸泠  祝建波 《福建林业科技》2015,(2)

采用林间试验,在苹果小吉丁虫幼虫期对受害野苹果树进行不同施药方式和施药浓度的组合处理,探究16%虫线清乳油对野苹果小吉丁虫化学防治效果。试验结果表明,采用打孔注药和输液法施药方式在30 d后校正防效均达到90%以上;采用输液法及施药浓度为1倍稀释时,在整个防治期内校正防效均高于其它处理。对返青率进行比较分析时发现,对于野苹果树生长,最适合的施药浓度为2倍稀释。因此,在虫害防治前期采用1倍稀释浓度、防治后期采用2倍稀释浓度进行施药防治的效果较好。  相似文献   

马齿苋高频再生体系的建立及对草丁膦敏感性测定     

刘步仓  张爱霞  黎玉顺  祝建波 《北方园艺》2015,(7):98-103

以马齿苋子叶和下胚轴为外植体,研究了外源激素对其不定芽的诱导及不同浓度6-BA、NAA、GA3对不定芽伸长的影响,并测定了马齿苋子叶和下胚轴对草丁膦的敏感性。结果表明:MS+2.0mg/L 6-BA+100mg/L水解酪蛋白为下胚轴不定芽再生最适培养基,不定芽再生率达96.65%;MS+3.0mg/L 6-BA+100mg/L水解酪蛋白为子叶不定芽再生最适培养基,不定芽再生率达100%;最佳的不定芽继代培养的培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+0.2mg/L GA3;生根培养基为MS+2.0mg/L IBA,生根率达100%;以子叶和下胚轴为材料研究其对草丁膦的敏感性,发现子叶对草丁膦更敏感,0.050mg/L草丁膦对子叶的致死率达到89.0%;对下胚轴的致死率为71.5%。该研究建立了马齿苋植株高频再生体系,并确定了其对草丁膦的敏感性,可为该品种的基因工程研究提供必要的理论和实践基础。  相似文献   

杂花苜蓿高效再生体系的建立   总被引：5，自引：0，他引：5  

祝建波  朱先灿  崔燕  周鹏 《作物杂志》2006,(5):14-18

通过对新疆塔城杂花苜蓿品种下胚轴再生植株的系统研究，经筛选获得种子萌发培养基为：1／2MS无糖培养基；胚性愈伤组织诱导培养基：MS＋2，4-D2mg／L＋6-BA0．5mg／L＋蔗糖3％。胚性愈伤组织诱导率为100％；胚状体诱导培养基：SH＋2，4-DZing／L＋6-BA0．5mg／L＋CH250mg/L＋蔗糖1％，胚状体诱导率为86．96％；胚状体萌发培养基：SH＋GA30．5mg／L＋CH250mg／L＋蔗糖1％，胚状体萌发率为90％-95％；生根培养基：1／2MS＋IBA0．5rag／L＋蔗糖1％。生根率为100％。完成再生时间120d左右。  相似文献   

重组轮状病毒多抗原表位的克隆、表达及植物表达载体的构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

王琦  祝建波  陈创夫 《西北农业学报》2006,15(5):145-149

为了研制基于表位的轮状病毒亚单位疫苗,用PCR的方法得到RV(Rotavirus RV)VP4的抗原表位编码序列,并人工合成了RV VP7的3个抗原表位编码序列,通用辅助性T淋巴细胞表位(PADRE)氨基酸序列和破伤风毒素(Tetanus toxin,TT)上的一个T细胞激活位点[1,2],各位点间以非极性的甘氨酸和脯氨酸分隔以保持各表位的相对独立性,使用搭桥法PCR(Over lapextension PCR)、酶切、连接等基因工程的方法将各个表位片段串联拼接在一起,组合成一条轮状病毒(RV)多表位抗原基因,将其转入原核载体质粒pTHioHis B,在大肠杆菌DH5a克隆,并在BL21中表达,表达蛋白经SDS-PAGE分析,相对分子量与预期结果相符;重组蛋白经轮状病毒快速检测试剂盒检测有抗原性。将此多表位抗原基因插入高效植物表达载体pE1802,为研制重组轮状病毒抗原表位亚单位疫苗、转基因植物口服疫苗做了前期准备。  相似文献   

植物乙酰辅酶A羧化酶β亚基acc D在因研究进展     

崔燕  祝建波  张煜星 《安徽农业科学》2008,36(13):5255-5257

综述了乙酰辅酶A羧化酶及其催化域羧基转移酶(Carboxyltransferase,CT)的β亚基(β-CT)的分布和生理功能、β-CT编码基因accD的分子生物学特征及乙酰辅酶A羧化酶在脂肪酸代谢工程中的应用研究进展。  相似文献   

大肠杆菌肠毒素STI、STII、LTB融合基因植物表达载体的构建     

武冬梅  祝建波  陈创夫  王琦  张金波 《西北农业学报》2006,15(5):150-154

产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)LT和ST是导致人和动物腹泻的主要病原菌。利用PCR方法分别从pGEM-5Zf( )-STI、K88ab(LT ,ST )质粒中扩增到了STI、STII基因,然后通过三引物PCR实现了STI、STII基因的融合,再与LTB基因融合,并置同一阅读框。LTB基因的5′位于STII基因的3′端,并在ST基因和LTB基因之间插入7个氨基酸的连接肽。将融合基因STI-STII-LTB构建到带有核基质结合区序列(MARs)的植物表达载体pBI121-MARs中,并通过冻融法导入根癌农杆菌EHA105。  相似文献   

铜绿假单胞菌脂肪酶Lipase基因的原核表达     

张煜星  武寒雪  祝建波  刘焕  周鹏 《安徽农业科学》2008,36(35)

[目的]对铜绿假单胞菌脂肪酶Lipase基因进行原核表达。[方法]利用PCR方法从铜绿假单胞菌基因组DNA中扩增得到脂肪酶基因,测定其核苷酸序列,利用基因重组技术构建脂肪酶基因的原核表达载体,加IPTG至终浓度为1.0 mmol/L诱导蛋白表达4 h,并进行SDS-PAGE电泳。[结果]从铜绿假单胞菌中克隆的脂肪酶基因成熟肽的序列,与NCBI上所递交的铜绿假单胞菌脂肪酶序列同源性很高,达99.36%。成功构建了脂肪酶基因的原核表达载体pET32a-Lip,进一步SDS-PAGE电泳结果显示目的基因得到高效表达。[结论]克隆的铜绿假单胞菌脂肪酶带有自身的信号肽,也可以在大肠杆菌中正常表达,可以用于进一步的研究。  相似文献