新疆塔城地区马梨形虫感染的分子生物学诊断及分析          下载免费PDF全文

于伟伟  孟庆玲  乔军  潘多荣  才学鹏  陈创夫 《家畜生态学报》2017,38(8):66-69

采用常规血涂片镜检和PCR技术对新疆塔城地区疑似梨形虫感染的病马进行检测。通过18S rRNA基因通用引物扩增出目的基因,克隆测序后,与GenBank公布的梨形虫18S rDNA参考序列对比分析同源性,并构建系统进化树,确定梨形虫的种属。血涂片鉴定结果显示,红细胞中发现圆环形虫体,具有马梨形虫的主要特征。分子生物学鉴定发现,18S rDNA序列与马泰勒虫美国分离株核苷酸序列同源性为98.3%;遗传进化分析发现,该虫株与已知的泰勒属在同一大枝上,与马泰勒虫美国分离株、马泰勒虫西班牙分离株有较近的亲缘关系。  相似文献   

细粒棘球蚴TP_x蛋白的分子特征与反应原性     

陈英  乔军  孟庆玲  刘田莉  钟文强  贡莎莎  王熙凤  黄运福  才学鹏 《贵州农业科学》2018,(1)

为明确绵羊细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)硫氧还蛋白过氧化物酶(Thioredoxin peroxidase,TP_x)蛋白的反应原性,并进一步利用Eg TP_x重组蛋白作为Eg感染诊断中的候选标识分子奠定基础,根据GenBank中Eg TP_x基因的cDNA序列设计特异性引物,以Eg头节为总RNA模板,进行RTPCR扩增,将PCR产物克隆到pMD19-T载体,经测序验证后亚克隆至表达载体pET-32a中,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达,并对表达的重组蛋白进行纯化及反应原性分析。结果表明:Eg TP_x cDNA全长为582个核苷酸,编码193个氨基酸。该多肽含有1个N端糖基化位点,1个N端酰基化位点,5个酪蛋白激酶Ⅱ(CKⅡ)磷酸化位点,4个蛋白激酶C(PKC)磷酸化位点;抗原表位区集中在58~94位和160~188位。重组菌可表达分子量为37ku的重组蛋白,重组蛋白Eg TP_x抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。  相似文献   

细粒棘球蚴Eg HSP20蛋白基因的分子特征、表达及其反应原性研究     

陈英  乔军  孟庆玲  钟文强  刘田莉  贡莎莎  王熙凤  黄运福  才学鹏 《西南农业学报》2018,(7)

【目的】本文构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)HSP20基因的重组表达载体并表达、纯化重组蛋白,研究其反应原性。【方法】根据Gen Bank中Eg HSP20蛋白基因c DNA序列设计特异性引物,以细粒棘球蚴Eg头节总RNA为模板,进行RTPCR扩增,将PCR产物克隆至p MD19-T载体,测序验证后,将Eg HSP20抗原基因亚克隆至表达载体p ET-32a中,再将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞内,用IPTG进行诱导表达,并对表达的蛋白进行纯化及反应原性分析。【结果】Eg HSP20 c DNA全长945个核苷酸,编码314个氨基酸。该多肽含有1个N端糖基化位点,1个CAMP磷酸化位点,5个PKC磷酸化位点,10个CKⅡ磷酸化位点;抗原表位区集中在39~53位和120~168位。SDS-PAGE检测显示,重组菌可表达分子量为51 k Da的重组蛋白;Western blot结果显示,表达的重组蛋白Eg HSP20抗原能与Eg阳性血清发生特异性反应。【结论】证实Eg HSP20蛋白具有较强的反应原性,为进一步利用Eg HSP20重组蛋白作为Eg感染诊断中候选标识分子奠定了前期基础。  相似文献   

非洲猪瘟病毒p30-54融合蛋白基因的构建、表达及其多克隆抗体制备     

李杰  张星星  郭晶  孟庆玲  乔军  张国武  王晓婷  李妍  才学鹏 《河南农业科学》2018,(9)

为了制备反应原性良好的非洲猪瘟病毒(ASFV)血清学诊断抗原,根据ASFV p30和p54基因序列,通过大肠杆菌密码子优化后分别体外合成全长的p30和p54基因,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将2个基因片段串联,构建p30-54融合基因。将构建的融合基因片段克隆入p ET-28a(+)表达载体中,构建原核表达载体p ET-p30-54,转化至E. coli BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达,检测融合蛋白的反应原性,并制备抗该融合蛋白的多克隆抗体。SDS-PAGE检测结果显示,表达的p30-54融合蛋白分子质量为47. 1 ku; Western blot分析显示,该融合蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其具有良好的反应原性。将p30-54融合蛋白用Ni-NTA亲和层析柱纯化后免疫小鼠,成功制备了抗ASFV p30-54融合蛋白多克隆抗体。  相似文献   

牛病毒性腹泻病毒实时定量RT-PCR检测技术的建立及初步应用     

任艳  陈创夫  乔军  王鹏雁  盛金良  王远志  张沾  李臻 《畜牧兽医杂志》2010,29(5):4-7

以牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的保守基因5'-非编码区为参考,设计、优化一对特异的荧光定量PCR引物,应用Smart CycleⅡ分析系统,结合Eva Green荧光染料结合原理,建立一种快速、定量检测牛病毒性腹泻病毒的荧光定量PCR技术。该方法线形范围为101~106copies/μL,相关系数为R2=0.997,扩增效率为E=0.78。灵敏性比常规PCR高102倍。该方法具有良好的特异性,检测变异系数低于1%。应用本实验建立的方法检测25份不同地区采集的临床症状疑似BVDV感染的牛粪样品,阳性检出率为72%(18/25),与病毒分离培养和电检观察相比,该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能定量检测等优点,为实验室快速、准确检测BVDV奠定了基础。  相似文献   

金黄色葡萄球菌ClfA基因表达产物在小鼠的免疫原性分析     

杨明锋  陈创夫  曹旭东  刘君  王正荣  李贞  乔军 《畜牧兽医学报》2010,41(12)

为分析原核表达的金黄色葡萄球菌ClfA部分基因表达产物的免疫原性,作者采用PCR方法从奶牛乳房炎病例中分离的金黄色葡萄球菌中克隆出ClfA基因的部分片段,测序后用DNAman软件进行抗原位点分析。构建原核表达质粒ClfA-pET-28a+,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达。用His-bind柱纯化表达蛋白,加弗氏佐剂混匀后免疫小鼠。小鼠分娩后乳腺内攻菌,检查乳腺组织病理变化,乳腺组织中金葡菌数量和TNF-α水平来评价原核表达蛋白的免疫保护效果。结果显示转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导可以表达ClfA蛋白。原核表达蛋白抗原免疫小鼠可以显著降低乳腺组织内金葡菌数量,TNF-α水平也显著低于对照组和全菌蛋白抗原组,提示原核表达的ClfA蛋白免疫小鼠可以减少乳腺内金葡菌定植的数量,减轻乳腺内感染造成炎症的严重程度。本研究表明原核表达金黄色葡萄球菌ClfA蛋白有一定的免疫保护效果,为奶牛乳房炎疫苗的研究提供科学依据。  相似文献   

新疆北部地区奶牛子宫内膜炎主要病原菌的分离鉴定及其血细胞成分分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

张银亮  陈创夫  乔军  刘贤侠  王利晓  余胜利  胡朝辉 《中国草食动物》2010,30(4):52-55

对临床确诊为奶牛子宫内膜炎的75头荷斯坦奶牛进行子宫炎性分泌物采样,用常规方法进行细菌分离培养及鉴定,并对19头患子宫内膜炎奶牛和8头健康奶牛进行血细胞成分分析。结果共分离鉴定出细菌189株,其中金黄色葡萄球菌56株（29．62％）,大肠埃希氏菌52株（27．51％）,铜绿假单胞菌25株（13．23％）,蜡样芽孢杆菌22株（11．64％）,无乳链球菌17株（8．99％）,停乳链球菌10株（5．30％）,沙门氏菌3株（1．59％）,中间葡萄球菌2株（1．06％）,表皮葡萄球菌、普通变形杆菌各1株（0．53％）。血细胞成分分析结果表明,子宫内膜炎奶牛组与健康奶牛组相比,淋巴细胞（LYM）、粒细胞（GRAN）、平均血红蛋白含量（MCH）、血小板分布宽度（PDW）、血小板压积（PCT）等差异极显著（P〈0．01）,其余指标差异不显著（P〉0．05）。  相似文献   

少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-483基因的克隆及生物学活性     

贡莎莎  孟庆玲  乔军  钟文强  黄运福  张国武  陈英  才学鹏 《浙江农业学报》2019,31(2):222

为弄清少孢节丛孢菌几丁质酶的生物学功能,对少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-483基因进行克隆及分子特征分析,并在大肠埃希菌中进行诱导表达;采用DNS还原糖法检测经镍柱纯化的重组几丁质酶活性,将其作用于秀丽隐杆线虫幼虫,分析其生物活性。结果显示,AO-483基因编码309个氨基酸,与少孢节丛孢菌标准株(ATCC 24927)的几丁质酶AO-483基因序列的同源性为96.88%,氨基酸序列同源性为97.73%;AO-483含有1个Glyco-hydro-18结构域,位于20~297位氨基酸,属于糖苷水解酶18家族,还含有特征序列GMLGG和LDGLDLDVE;三级结构为典型的三磷酸异构酶桶形结构。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白AO-483分子质量约为52 ku,与预测大小一致;Western blot分析证实,该重组蛋白能与小鼠抗少孢节丛孢菌多克隆血清抗体发生特异性反应。经DNS还原糖法检测,该重组几丁质酶活性为223.31 U·mL^-1;重组几丁质酶对秀丽隐杆线虫Ⅰ期和Ⅳ期幼虫有较强的降解活性。  相似文献   

辽宁省葡萄产业发展现状及对策     

马丽  乔军  孙凌俊 《特种经济动植物》2023,(6):122-124

辽宁省是我国葡萄的优势产区,栽培面积和产量均居全国前列。从全省葡萄区域布局、品种结构、发展趋势等方面详细阐述了我省葡萄产业发展现状和存在问题,并提出了合理化建议。充分了解产业问题、根据建议进行品种结构改良、提升果实品质,加快机械化进程,建立果品一体化产业服务体系,从而推进我省葡萄产业的可持续健康发展。  相似文献   

无乳链球菌SIP基因的克隆和原核表达     

褚明亮  陈创夫  刘君  乔军  曹旭东 《塔里木大学学报》2008,20(3)

目的重组表达无乳链球菌表面免疫相关蛋白(Surface immunogenic protein,SIP)基因,为进一步免疫学研究提供目标蛋白.方法用PCR的方法从石河子分离株的基因组DNA中扩增出SIP基因,用T/A克隆法将其插入PBST载体,并构建原核表达载体pET-32a( )-SIP.用BL21(DE3)/pET系统表达Trix-SIP融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物.结果PCR扩增产物经测序,证实与GenBank中无乳链球菌(DQ650634)的SIP的基因序列同源性为98.62%.SDS-PAGE显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET-32a( )-SIP总蛋白中出现一条相对分子质量为71KDa的新蛋白带.West-ern blot分析显示,SIP蛋白可与无乳链球菌多克隆抗血清发生特异性反应.结论已成功表达SIP,为SIP在细菌致病中的作用研究以及相关疫苗的制备奠定了基础.  相似文献