应用定量RT-PCR对猪瘟兔化弱毒疫苗的质量评价研究     

韩文  王楠  张兴娟  葛叶  韩秋颖  孙元  李素  仇华吉 《中国预防兽医学报》2012,34(6):464-467

为进一步验证猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)与兔体定型热试验之间存在正相关性,本研究利用qRT-PCR方法对278批次HCLV疫苗进行检测,分别检测其疫苗含量及牛病毒性腹泻病毒(BVDV)污染情况。结果表明,278批次猪瘟疫苗中有66批(24%)疫苗含量达不到规程标准,有42批(15%)疫苗存在BVDV污染;从所检疫苗中抽取6份qRT-PCR检测HCLV含量较低的疫苗,采用兔体定型热试验进行验证,两种方法结果吻合,表明qRT-PCR方法可以作为评价猪瘟疫苗质量的一种备选方法。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究进展   总被引：14，自引：0，他引：14  

杨金雨  仇华吉  童光志 《动物医学进展》2005,26(5):28-31

猪繁殖与呼吸综合征是一种引起母猪繁殖障碍和新生仔猪呼吸道症状及高死亡率的传染病。已几乎遍极世界所有养猪国家,在中国的流行和分布也日益广泛,危害日益严重。此病的传播给世界养猪业造成严重经济损失,受到国内外学者的高度重视,对此病的研究也正在逐渐深入,特别是免疫学及其疫苗的研究正日益受到关注。文章就猪繁殖与呼吸综合征病毒的灭活疫苗、弱毒疫苗和基因工程疫苗的研究进展和使用现状做了系统地阐述,特别是通过合理地选择和使用免疫佐剂,如γ干扰素、霍乱毒素及可溶性β葡聚糖等来改进疫苗作用方面进行了阐述。  相似文献   

猪细小病毒研究进展   总被引：11，自引：1，他引：10  

李昌文  仇华吉  童光志 《动物医学进展》2004,25(1):36-38

猪细小病毒 (PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一。 PPV最早是从培养细胞中发现并分离得到的一种小 DNA病毒。PPV按照其致病性与组织嗜性大致可以分为 4个类型。研究表明 ,PPV不仅是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一 ,而且能够引起多种猪病。PPV基因组为单股负链 DNA,大小约为 50 0 0 bp,基因组有两个主要的开放阅读框架 ,基因组共编码 3种结构蛋白和两种非结构蛋白 ,即 VP1、VP2、VP3和 NS1、NS2。VP2蛋白是主要的免疫原性蛋白 ,可以诱导机体产生强烈的免疫反应 ,NS1蛋白是 PPV基因组本身编码的反式激活蛋白 ,对PPV早期和晚期的转录发挥着重要作用 ,另外有研究表明 ,NS1蛋白是具有多种功能的锚定蛋白 ,在 PPV体外感染过程中具有重要功能。随着对猪细小病毒研究的不断深入 ,目前已经在猪细小病毒病原学、诊断与防制以及分子生物学方面取得了进展。  相似文献   

基于重组Erns蛋白的猪瘟Erns-ELISA的建立和优化     

贾洪林  仇华吉  朱庆虎  李国新  李娜  罗玉子  刘永刚  李艳  童光志 《畜牧兽医学报》2005,36(10):1028-1032

将大肠杆菌表达的猪瘟病毒重组E^rns蛋白经纯化后作为包被抗原，建立了检测猪瘟抗体的E^rns-ELISA方法。经优化试验，确定了最适抗原包被量为0．15 μg；血清最适稀释度为1：100。经阻断试验、交叉反应试验和重复性试验证明，建立的E^rns-ELISA简便、特异、稳定，与基于重组E2蛋白的E2-ELISA的符合率高达96.7％，与基于全病毒抗原的Dot-ELISA符合率为77．5％。可以用于猪瘟抗体的血清学监测以及用作基于E2蛋白的标记疫苗配套的鉴别诊断。  相似文献   

猪瘟Erns基因在大肠杆菌中的高效表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

贾洪林  仇华吉  李娜  朱庆虎  罗玉子  童光志 《中国预防兽医学报》2005,27(3):161-163

提取猪瘟病毒石门系强毒株的基因组RNA,用RT_PCR扩增其Erns基因的cDNA,将其克隆到原核表达载体pPROEXTMHTc中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,Erns基因获得高效表达。SDS_PAGE分析显示,表达的重组融合蛋白表现分子量约为31ku。Westernblot分析表明,重组蛋白具有良好的免疫原性。重组蛋白可用于制备诊断抗原,用于标记疫苗接种和野毒感染的鉴别诊断。  相似文献   

伪狂犬病病毒Bartha-K61株UL49基因的克隆和序列分析     

刘建华  李娜  仇华吉  田志军  童光志 《中国预防兽医学报》2005,27(4):269-272

根据已经发表的伪狂犬病病毒(PRV)国内Ea株UL49基因序列,设计并合成了1对引物,通过PCR方法扩增到了PRV Bartha-K61株UL49基因的编码区,并克隆到pMD18-T载体中.重组质粒pMD-UL49经XhoI酶切和PCR鉴定后,进行了序列测定和分析.结果表明,重组质粒pMD-UL49含有PRV Bartha-K61株UL49基因的编码区.同源性分析显示,PRV Bartha-K61株UL49基因序列与国外Kaplan株、国内Ea株相应基因的核苷酸同源性分别为98.9 %和94.1 %,推导的氨基酸序列同源性分别为96.7 %和87.2 %.  相似文献   

疫苗使用为何争议不断?     

杨汉春  梅克义  蔡宝祥  仇华吉  陈西钊  李庆怀  涂长春  袁振国  刘志国  潘春刚 《猪业科学》2005,22(2):11-15

1　　我国当前的猪病流行情况非常复杂,是否与疫苗没有得到正确使用有关系?　疫苗到底要不要用?陈西钊:疫苗肯定要用,对我国绝大多数猪场目前的情况,疫苗都是不得不打的,而且疫苗是一种非常有效的防疫手段,但疫苗的来源必须是正规厂家生产的合格疫苗。潘春刚:这本身就是一个比较复杂的问题,我国猪病情况之所以复杂,除养殖场没有根据实际情况合理正确的使用合格疫苗产品以外,还与品种引进时疫病监测技术及综合防治措施等有关。正确使用疫苗的前提是养殖场的管理和综合防治水平要过关,要讲科学。刘志南:猪场疫病情况复杂与病原种…  相似文献   

猪Ⅱ型圆环病毒全基因组序列分析及其ORFl和ORF2基因的克隆与表达   总被引：5，自引：4，他引：5  

韩凌霞 陈艳崔尚金  王云峰仇华吉 童光志 《中国预防兽医学报》2004,26(1):10-13

猪II型圆环病毒(PCV＿2)的2个主要开放阅读框ORF1和ORF2分别编码病毒的复制酶Rep和结构蛋白Cap。本试验将分离株L株病毒感染PK15细胞系,提取总DNA并以其为模板,通过PCR分别扩增了全病毒基因组、完整的Rep和Cap基因,并克隆到pMD18T载体中,进行了序列测定。将Rep和Cap基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pPROEXTMHT中,以融合蛋白的形式表达了这两种蛋白。根据文献报道,致病性的PCV＿2与无致病性的PCV1的型特异性抗原决定簇主要位于Cap基因的羧基端部分,本实验利用原核表达载体pGEX＿6p＿1融合表达了Cap基因羧基端423bp的片段。通过薄层扫描各重组菌诱导表达产物的SDS＿PAGE结果,重组质粒pPRO＿Cap和pPRO＿Rep以及pGEX＿ΔCap的外源基因表达量分别占总菌体总蛋白的15.1%、30.4%和19.6%。将表达的三种蛋白作为抗原,通过酶联免疫吸附试验分别与PCV＿2阳性猪血清和SPF猪血清进行了反应,pGEX＿ΔCap表达的蛋白(Cap蛋白的羧基端部分)抗原反应性最强,这表明截短的Cap蛋白羧基端部分将是一个良好的诊断PCV＿2感染用候选抗原。  相似文献   

猪流感病毒核蛋白基因的原核表达及其在诊断中的初步应用   总被引：11，自引：3，他引：11  

倪建强  张春玲  李海燕  崔尚金  仇华吉  王云峰  田志军  童光志 《中国预防兽医学报》2004,26(1):18-21

根据GenBank中A/Swine/Hong Kong/126/82(H3N2)株猪流感病毒(SIV)NP基因核苷酸序列设计合成一对引物,经RT-PCR扩增了我国SIV分离株A/Swine/Heilongjiang/3/2000(H3N2)的核蛋白(NP)基因.将扩增所得NP基因克隆于pMD18-T载体,酶切鉴定后对其序列分析表明NP基因与香港分离株同源性高达93.8%,然后定向亚克隆NP基因于原核表达载体pET30(a)的多克隆位点中,经酶切鉴定后,将含有NP基因的重组质粒命名为pET-NP.用pET-NP转化受体菌BL21,用诱导剂IPTG以不同浓度进行诱导,并在不同诱导时间收集样品.经SDS-PAGE电泳分析证实NP基因获得了表达,并在终浓度为1mM的IPTG诱导下,6 h其表达量达到高峰,经Western blot分析证实表达的重组核蛋白具有反应活性,大小约为60kD.用表达产物作琼脂扩散试验,结果表明表达产物与SIV抗血清可形成清晰的反应沉淀线,而与其它9种猪病原阳性血清不发生反应.正常菌体蛋白与SIV阳性血清也不发生反应.通过对40份送检血清样品的检测结果显示其与HI试验的相符率高达95%以上.试验证明利用原核表达系统制备的重组核蛋白作为诊断用抗原,不仅制备过程简单而且所建立的琼扩诊断方法特异、快速、简便,其灵敏度也能满足现地的使用要求.目前正在进行现地的中试试验.  相似文献   

表达多个外源基因的重组伪狂犬病病毒的构建及其细胞培养特性研究     

刘燕  田志军  周艳君  仇华吉  童光志 《中国预防兽医学报》2007,29(2):81-85

将SV40启动子控制下的LacZ报告基因表达盒与分别在CMV启动子控制下的含有猪瘟病毒（CS-FV）E2基因及猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5基因的表达盒插入到伪狂犬病病毒（PRV）Bartha-K61株TK基因中，通过蓝斑筛选获得了一株插入CSFVE2、PRRSVGP5与LacZ基因的重组伪狂犬病病毒，命名为rPRV-E2-GP5。经Western blot、间接免疫荧光试验证实E2、GP5基因在重组病毒感染细胞中获得了表达。重组病毒感染Vero、PK-15、IBRS2和CEF细胞后的增殖滴度和致细胞病变特征与亲本病毒比较，无显著差异。本试验结果表明在PRV基因组中可以插入多个外源基因，为进一步研究多价基因工程载体疫苗奠定了基础。  相似文献