Ⅰ群禽腺病毒Hexon蛋白的截短表达与鉴定     

罗思思  谢芝勋  刘加波  庞耀珊  邓显文  谢志勤  谢丽基 《广西农业生物科学》2011,30(5):550-555

本研究利用PCR方法扩增出Ⅰ群禽腺病毒FAVⅠhexon基因主要抗原区,连接于表达载体pGEX-4T-1中,构建成重组质粒pGEX-hexon,并转化大肠杆菌DH5α,用IPTG诱导表达,对表达的Hexon蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western-blot分析。结果显示,试验成功扩增获得hexon基因主要抗原区序列,大小为1020bp。重组蛋白主要以包涵体形式存在,融合蛋白大小为63.1ku,与预测值相符。经Western-blot分析,表明重组蛋白与FAVⅠ的阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性,为FAVⅠ诊断试剂盒的研制奠定基础。  相似文献   

新城疫病毒广西强毒株的分离与鉴定   总被引：4，自引：0，他引：4  

刘加波  谢芝勋  谢志勤  唐小飞  廖敏  庞耀珊  邓显文 《西南农业学报》2004,17(3):390-392

从广西某规模化鸡场两个鸡群病死雏鸡中分离到2株有血凝性的病毒，这2株病毒的血凝性均能被新城疫标准阳性血清抑制和中和，经过血凝(HA)试验、血凝抑制(HI)试验、血清中和试验和RT-PCR检测结果，确定为新城疫病毒。2株病毒的鸡胚平均死亡时间(MDT)分别为52和54h，脑内致病指数(ICPI)分别为1．975、1．875；鸡胚半数致死量(ELD50)分别为：10^-9.38／0.1mL、10^-9.68／0．1mL，实验结果证明该2株病毒为新城疫病毒强毒株。  相似文献   

二温式PCR检测对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

庞耀珊  谢芝勋  邓显文  唐小飞  刘加波 《水利渔业》2007,27(1):94-95

根据对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)基因序列,设计了1对可以扩增356 bp IHH-NV某段基因序列的特异性引物,优化建立了能快速检测IHHNV的二温式PCR。特异性试验和敏感性试验结果表明,该技术只对IHHNV DNA模板进行扩增,得到356 bp的DNA扩增片段,而对SPF南美白对虾组织DNA和其它对虾病原DNA/RNA的扩增结果为阴性;该技术最低能检测到10 pg的IHHNV感染对虾组织样品总DNA。应用该技术对400份对虾临床样品进行检测,结果有96份样品呈现阳性,表明该病在我国南方的养殖对虾中广泛存在,二温式PCR技术可以直接用于该病的临床快速检测和流行病学调查。  相似文献   

对虾白斑综合征病毒可视化环介导等温扩增(LAMP)检测技术的建立与应用     

庞耀珊  谢芝勋  谢丽基  谢志勤  邓显文  刘加波  范晴  罗思思 《农业生物技术学报》2013,21(8):1002-1008

针对当前对虾(Penacus orientalis)养殖业亟需研究开发一种简便快速、敏感特异的检测技术来实现对对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)进行检测监控的现状,本研究根据WSSV基因组ORF120保守区序列,设计合成6条环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification,LAMP)特异性引物,分别为外引物F3/B3、内引物FIP/BIP和环引物LF/LB。利用钙黄绿素/氯化锰作为检测指示剂,通过对反应条件优化,建立了可视化WSSV-LAMP检测方法。在检测中未发生扩增反应时,钙黄绿素被氯化锰螯合,呈淬灭状态。当样品中有WSSV靶基因存在时,大量DNA被合成,并产生同样大量的焦磷酸根离子,此时焦磷酸根离子竞争性与Mn2+结合,形成稳定的不溶性焦磷酸盐沉淀,钙黄绿素被释放而发出肉眼可见的黄绿色荧光。该扩增一次性反应约60min即可完成对待检样品的检测。经测定,本方法能特异性地检测出阳性样品中的WSSV目的基因,并能通过扩增产物所产生的黄绿色变化与阴性样品区别;本技术对目的基因的最低检测量为1fg。在临床检测试验中,WSSV-LAMP与世界动物卫生组织(OIE)推荐的WSSV-PCR检测方法均能从250份对虾样品中,同时检测到15份编号相同的阳性样品,符合率达100%。除此之外,WSSV-LAMP还能从另外3份PCR检测为阴性的样品中检测到目的基因。比较这两种方法的阳性检出率,WSSV-LAMP为7.2%(18/250),WSSV-PCR为6.0%(15/250),WSSV-LAMP对自然感染的临床样品阳性检出率要比WSSV-PCR高。说明WSSV-LAMP在病毒含量较低的临床样品检测中比OIE推荐的PCR方法具有更高的技术优势,能在对虾养殖生产上的临床诊断、育种及口岸检疫,甚至海洋生态监测中对WSSV进行现场检疫。  相似文献   

二温式PCR检测对虾白斑综合征病毒   总被引：18，自引：0，他引：18  

庞耀珊  谢芝勋  谢志勤  廖敏  邓显文  刘加波  唐小飞  何竞铭  梁海明 《中国兽医杂志》2003,39(4):43-45

本研究设计了一对能扩增大小为306bp对虾白斑综合征病毒(WSSV)某段基因的特异性引物，优化建立了能快速检测WSSV的二温式PCR，在对包括105份临床样品、10份SPF南美白对虾组织样品和其他对虾病害病原在内的样品检测结果中，有65份临床样品呈现WSSV阳性，而10份SPF南美白对虾组织样品和其他对虾病害病原的PCR结果为阴性。该二温式PCR最低能检测到1pg的WSSV感染对虾组织样品总DNA。这些结果表明，该PCR具有高度的特异性和敏染性。  相似文献   

手工乳化制备新城疫油乳剂苗的试验     

谢芝勋  刘加波等 《中国兽医科技》2001,31(8):24-25

用手工和机械乳化制备10组不同HLB值的新城疫油乳剂苗，分别免疫3月龄来航鸡，免疫后每隔1－2周采血检测血清HI抗体，直至第8周。结果 相同HLB值的手工和机械乳化的油乳剂苗的HI抗体效价无明显差异；攻毒保护试验表明两种方法乳化的油乳剂苗免疫鸡均能获得保护，而对照鸡全部死亡。多数手工乳化的油乳剂苗在37℃环境放置30d物理性状稳定。  相似文献   

广西奶牛临床型乳房炎的病原分离及药敏试验报告   总被引：2，自引：0，他引：2  

朱贤龙  谢芝勋  刘加波  邓显文  庞耀珊  唐小飞  李志源 《中国奶牛》2004,(5):43-44

奶牛乳房炎可由多种病原菌共同或单独引起，是一种病因复杂并影响奶牛业健康发展的重要疾病之一。目前全世界的2．2亿头奶牛中，约有1／3患各种类型的乳房炎。奶牛一旦患了乳房炎，采用抗菌素进行治疗在治疗期间和休药期内，所产的牛奶不但不能食用，而且长期治疗的患病奶牛，其乳腺组织产生不可恢  相似文献   

一起鸭疫里氏杆菌病的诊治     

刘加波  谢芝勋 《广西农业科学》1998,(4):203-204

  相似文献   

病料保存条件及抗菌药物治疗对鸡毒支原体PCR试剂盒检测结果的影响     

唐小飞  邓显文  谢芝勋  谢志勤  庞耀珊  廖敏  刘加波  何竟铭 《广西畜牧兽医》2003,19(6):244-247

应用鸡毒支原体(MG)S6毒株人工感染SPF鸡，对采集咽喉棉拭子在不同条件下保存及药物治疗感染鸡后，对MG的分离培养和PCR检测结果的影响进行了探索。结果表明将咽喉棉拭子置于甘油PBS中于-20℃冷藏或将干咽喉棉拭子放入-20℃中保存，是最有效的保存方法。抗菌药物治疗感染鸡不仅影响MG的分离效果，同时也会降低RCR的检出率，从而影响MG临床诊断。  相似文献   

禽巴氏杆菌病B_（26）－T_（1200）弱毒疫苗的田间免疫试验     

谢芝勋  刘加波  莫照兰  庞耀珊 《中国预防兽医学报》1994,(1)

用５批禽巴氏杆菌Ｂ２６－Ｔ１２００弱毒疫苗共接种３００万只鸡．现场观察６２４３７只免疫鸡．结果表明，该菌对不同品种鸡安全．只有３．８％免鸡表现为一过性食欲减少、精神稍差．但２天内都能恢复正常，没有引起免疫鸡直接死亡现象．田间免疫１４０天抽取各批苗免疫鸡攻毒，有８０％（１６／２０）鸡得到保护，免疫鸡群在免疫１４０天内没有发生禽巴氏杯菌病．  相似文献