禽流感病毒NP cDNA反义逆转录病毒载体的构建及重组病毒的鉴定   总被引：1，自引：0，他引：1  

孟庆文  邓国华  曹素芳  乔传玲  于康震  田国斌  唐秀英 《中国预防兽医学报》2000,(Z1)

根据反义ＲＮＡ作用原理,以禽流感病毒（ＡＩＶ）Ｈ１４Ｎ５　ｃＤＮＡ全长及５’端２３５个ｂｐ为目的基因,反向插入反转录病毒载体 ｐＬＸＳＮ中,命名为 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ及 ｐＬＸＳＮ－ＮＰ,用脂质体包裹重组质粒转染包装细胞 ＰＡ３１７,Ｇ４１８筛选抗性克性,扩增单个克隆后提取包装细胞上清的病毒ＲＮＡ（ｖＲＮＡ）,以巢式ＰＣＲ方法检测,以及用包装细胞上清（重组病毒）感染滴定细胞系ＮＩＨ３Ｔ３,表明已筛选出产毒的的克隆细胞质,得到重组逆转录病毒,为反义ＲＮＡ抑制禽流感病毒复制的实验研究奠定了物质基础。  相似文献   

鸭RIG-Ⅰ蛋白C端helicase结构域和RD结构域的原核表达及其单克隆抗体的制备     

臧凤霞  张雅春  王伟  赵颖慧  李越  周长良  陈洪岩  孟庆文 《中国家禽》2014,36(20)

利用PCR技术将鸭维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;克隆到pET30a原核表达载体,构建了重组原核表达质粒pET30a-c和pET30a-d,通过转化BL21 (DE3)感受态菌、IPTG诱导、镍柱纯化表达蛋白,将纯化的c、d蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体(mAb),采用ELISA、Western blot和间接免疫荧光试验对单克隆抗体进行鉴定分析.获得鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体有14株与原核分段表达的c、d蛋白有良好的反应性,其中3株与真核表达的RIG-Ⅰ蛋白有良好的反应性.制备的鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体为RIG-Ⅰ在抗病毒天然免疫信号转导途径的研究奠定了基础.  相似文献   

聚焦高致病性禽流感     

孟庆文 《农村科技》2004,(3):15-15

引起禽流感(M)的病原为禽流感病毒(AIV)，该病毒属正粘病毒科流感病毒属。要根据流感病毒核蛋白(NP)和基质蛋白(M)抗原性的不同，将其分为A、B、C三个血清型；其中A型可见于人、禽和其它一些哺乳动物中。根据其血凝素HA和神经氨酸酶NA抗原性差异，又可将其分为不同的亚型和9种特  相似文献   

鸡MHC I α-生物素化序列融合基因的构建、表达及纯化     

刘光亮  童铁钢  王群  肖一红  孟庆文  吴东来 《农业生物技术学报》2006,14(5):662-668

实验克隆了莱航鸡(Gallus gallus )MHC I α (BF2)(GenBank登陆号：AY989897)全基因，分析了其信号肽序列，构建了缺失信号肽且拼接了BirA底物肽序列(BSP)的融合蛋白重组表达载体pET-BF2-BSP，在大肠杆菌(Escherichia coli )中得到表达，并优化了诱导剂浓度、起始诱导菌体浓度及诱导时间等表达条件。SDS-PAGE分析结果表明所得融合目的蛋白约为40 kD，Western-blot结果显示该重组蛋白成功融合了6×His标签；pET-BF2-BSP最优化表达条件分别为：菌体起始诱导浓度OD600nm 0.8~1.2，IPTG诱导浓度1.1 mmol/L，诱导时间2~4 h；建立了该重组蛋白变性状态下通过镍柱亲和层析纯化包涵体的方法。实验获得了高纯度的在体外构建鸡MHC-肽四聚体所需的重组蛋白BF2-BSP。  相似文献   

日粮中添加“增食保健散”对肉鸡保健防病的效果观察     

孟庆文  于振洋  王莲芹  张荣花 《畜禽业》2002,(9):Y029-Y029

选用自制的“增食保健散”对20日龄的400只AA商品代肉鸡分组进行疫病防治试验,结果表明:添加0.33%的“增食保健散”组鸡白痢、大肠杆菌等肠道传染病得到明显控制,无一发病,鸡群成活率高;而对照组发生鸡白痢,大肠杆菌病共13只,占试验鸡的6.5%,经t检验两组差异显著(P<0.05)。  相似文献   

H9N2禽流感病毒中国分离株血凝素基因序列的初步分析   总被引：6，自引：0，他引：6  

李曦  于康震  田国斌  唐秀英  邓国华  王秀荣  孟庆文 《中国预防兽医学报》2002,24(4):249-251

10株中国H9N2禽流感病毒分离株的血凝素基因分析表明，这些分离株间的亲缘关系较近，推测它们可能来源于同一种系，H9亚型分离株的HA1亚单位系统发育分析表明中国AIV分离株与97香港禽类市场上分离到的毒株不同，中国分离株中在HA切割位点上均未见到典型的高致病力毒株H5、H7所具有的一系列碱性氨基酸，其排列均为－PARSSGLF－，系统发育分析表明该10株属欧亚种系。  相似文献   

气相色谱法测定抗氧化剂中乙氧基喹啉及BHT的含量     

孟庆文  刘再胜  谢宁 《饲料工业》2001,22(3):26-26

采用气相色谱法测定乙氧基喹啉及 BHT的含量，通过外标法计算样品的含量。该方法操作简便，稳定性好，回收率可达到 98％，结果满意。  相似文献   

关于马铃薯二季作高产栽培新技术的调查报告     

衣服平  史之煌  孟庆文  王瑞先  归原 《中国马铃薯》2001,(3):163-164

围绕马铃薯的高产栽培 ,世界各国的生物学家和农学家做了很多研究 ,认为 :一个马铃薯品种连续种植几代以后 ,即会失去种用价值 ,其原因是各种病毒侵染而引起的。由此 ,而兴起了马铃薯脱毒技术和脱毒种薯 ,及其脱毒马铃薯的高产栽培技术。众所周知 ,脱毒种薯的生产成本很高 ,从茎尖剥离培养 ,无毒株系鉴定 ,脱毒试管苗扩繁 ,直至由原原种扩繁 3～ 4代生产栽培种 ,程序多 ,技术要求严格。生产者使用栽培种一级种薯生产 ,也只能用于当年 ,来年又需购买新的脱毒栽培种才能保证不减产。即便这样秋薯夏季栽培时大面积烂种减产 ,或因烂种造成绝产情…  相似文献   

BF2/肽四聚体的构建及其在特异性T细胞检测上的应用     

刘光亮  王群  肖一红  童铁钢  白宇  孟庆文  吴东来 《农业生物技术学报》2009,17(1):12-17

为构建可溶性鸡 组织相容性复合体(MHC)Ⅰ 类分子（BF2）/肽复合物,大量表达并纯化了可生物素化的MHC Ⅰ类分子重链（BF2-BSP）和轻链（Chβ2m）,并合成了鸡传染性支气管炎病毒（IBV）核蛋白N71~78 T细胞表位肽,将其与纯化后的重组蛋白BF2-BSP和Chβ2m在重折叠缓冲液中复性。复性后在快速蛋白液相色谱仪（FPLC）上分离出复性组装成功的BF2/肽单体复合物。将该单体复合物在体外进行生物素化,其产物再次采用FPLC通过分子筛分离出生物素化后的BF2/肽单体复合物;然后将生物素化后的BF2/肽单体复合物与藻红蛋白（PE）标记的链霉亲和素按一定比例反应生成BF2/肽四聚体。为了检测所制备BF2/肽四聚体是否能应用于检测特异性T细胞,从感染IBV H52株10 d后的SPF鸡分离外周血单核细胞（PBMC）,染色后采用流式细胞术检测,结果表明,所制备的BF2/肽四聚体可用于检测IBV N蛋白特异性T淋巴细胞,检测1周龄SPF鸡接种H52后10 d时针对N蛋白的特异性T细胞比率为3.65%。  相似文献   

犬细小病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

姜骞  李慕瑶  刘家森  司昌德  葛艳华  郭东春  韩凌霞  孟庆文  曲连东 《中国预防兽医学报》2009,31(2)

本研究以纯化的犬细小病毒(CPV)重组VP2蛋白为包被抗原,建立了检测CPV抗体的间接ELISA 方法,其抗原包被浓度为0.158μg/mL;待检血清稀释倍数为1:100,作用时间为60 min;羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1:2 000,作用时间为60 min;底物作用时间为10 min;判定标准为S/P≥O.282时为阳性,S/P≤0.226时为阴性.该方法与犬瘟热、犬传染性肝炎、犬副粘病毒病、犬波特氏杆茵痛等4种犬常见传染病阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于15%,显示该方法具有良好的重复性;与商品化CPV ELISA试剂盒进行比较,符合率为96.5%.本研究为现地免疫犬群抗体监测和进行CPV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法.  相似文献