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猪带绦虫10 ku蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其初步应用 总被引：1，自引：0，他引：1
将猪带绦虫六钩蚴10ku蛋白（TS010）和囊尾蚴10ku蛋白（CE10）的基因克隆到表达载体中,构建重组表达载体pGEX-4T—TS010和pGEX-4T—CE10,经测序证明基因序列完全正确。重组表达载体转化大肠杆菌后诱导表达,用SDS-PAGE、Western—blot和薄层扫描检测表达产物。表达的目的蛋白纯化后用于血清样品ELISA检测。SDS-PAGE、Western—blot和薄层扫描检测结果表明,六钩蚴和囊尾蚴10ku蛋白基因均能在大肠杆菌中成功表达,表达的融合蛋白的相对分子质量约为35ku,并能被囊虫病人阳性血清所识别,具有反应原性,表达量分别占菌体蛋白总量的25％和30％。ELISA检测结果显示,10ku蛋白可用于囊虫病的诊断。 相似文献
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兔IFN-γ基因的克隆、遗传进化分析及其表达 总被引：5，自引：1，他引：4
运用RT-PCR技术对用ConA刺激后的中国白兔外周血淋巴细胞(PBMCr)进行扩增,将纯化后的PCR产物克隆入pMD18-T中进行序列测定,并进行遗传进化分析.结果发现:该基因全长501 bp,编码167个氨基酸,其中前20个氨基酸残基构成信号肽序列.与不同物种IFN-γ基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列有一定的差异.在推导的中国白兔IFN-γ氨基酸序列中,在41~43、108~110和117~119位存在3个潜在的N-联糖基化位点,同时存在3个Cys残基.转化重组质粒pETIFN-γ的大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导后,重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为22.6 kDa的重组蛋白.经凝胶薄层扫描,重组蛋白表达量可占菌体蛋白的19.2%. 相似文献
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山羊嵴病毒（caprine kobuvirus，CKoV）是国内山羊新发病毒，本试验目的是建立检测CKoV的实时荧光定量PCR方法，并对西南三省腹泻山羊粪样进行该病毒的检测。选择CKoV最保守的3D基因序列，设计3D基因引物，初步设计实时荧光定量PCR，经优化反应条件和反应体系，成功建立了检测CKoV的TB Green染料法实时荧光定量PCR方法。该方法在病毒浓度2.23×102～2.23×108copies·μL-1范围内线性关系良好，相关系数为0.999 2，扩增效率为110%；此方法具有良好的特异性和稳定性，最低检测限为2.23×101copies·μL-1。采用所建立的方法对2020年1—4月采集自四川、云南和重庆的共15个场79份山羊腹泻粪样本进行检测，结果CKoV的平均检出率为25.3%，场阳性率为53.3%。并且本试验获得了13个完整的CKoV 3D基因，遗传进化分析表明这13个3D基因具有独特的进化趋势。本研究为CKoV的分子检测提供了一种新的技术手段和基础流行病学数据。 相似文献
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根据GenBank中登录的美洲型PRRSV JXA1株基因组序列设计合成了4对引物,应用RT-PCR技术对PRRSV JX0708株结构蛋白基因进行扩增、克隆和测序,将测序结果应用Blast和DNAStar软件进行分析,并与国内外分离株进行核苷酸序列以及推导的氨基酸序列同源性比较.结果表明:PRRSV JX0708株结构蛋白基因长约3 186bp,分为ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7共6个基因区;与国内分离的高致病性PRRSV美洲型毒株HuN、GD、JXA1、LN和普通毒株CH-1a以及经典毒株VR-2332和疫苗毒株pMLV的核苷酸及其推导的氨基酸同源性分别为88.0%～100.0%和83.5%～100.0%;而与欧洲型经典毒株LV和Euro-1的同源性差异显著,其核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为64.0%～69.7%和53.3%～79.9%.遗传进化分析表明,PRRSV JX0708株在基因型上属于美洲型,同时美洲型PRRSV的变异存在某种地域和时间跨度上的相关性,但每个结构蛋白基因的变异并不严格遵从这种规律,而有所差异. 相似文献
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家畜的Toll样受体(TLRs)是家畜天然免疫相关分子家族中的重要组成部分。不同家畜表达的TLRs分子也各不相同,而同一种家畜的不同组织中表达的TLRs分子也不一定相同。这些TLRs分子在家畜疫病的发生、发展及治疗中也具有重要作用。目前虽然对于人和小鼠TLRs分子的研究已经较为全面,但是对于家畜TLRs的研究并不十分深入。论文主要就不同家畜TLRs分子研究的概况、不同家畜的TLRs在组织中的分布,以及TLRs在相关家畜疫病中的重要作用进行简要概述,以期对家畜TLRs分子信号转导通路的研究及家畜疫病的防控、新型疫苗和佐剂的开发提供参考。 相似文献
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提取经植物血凝素（PHA）诱导培养的牦牛外周血淋巴细胞总RNA，采用RT-PCR技术扩增并克隆了牦牛IFN-β基因，经PCR和酶切鉴定及测序分析，再克隆到pGEX-4T-1质粒载体中，构建了原核表达重组载体，经IPTG诱导表达重组蛋白，可表达约41 ku的牦牛IFN-β融合蛋白，主要以包涵体形式存在。序列分析结果表明，牦牛IFN-β基因ORF为498bp，与乳牛IFN-β参考序列的同源性高达98．6％，与猪、马、猫、人IFN-β基因的同源性分别为72．5％、68．9％、66．1％和63．5％，而与狗、鼠、鸡等动物的同源性均不超过25％；分子遗传进化树分析也表明，牦牛与乳牛IFN-β基因的亲缘关系最近，而与鼠、狗、鸡等的亲缘关系较远，说明IFN-β基因有种属差异性。 相似文献
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用质粒表达栽体pSPORT-1构建了猪囊尾蚴cDNA文库。将已构建好的cDNA表达文库用SOC按一定比例稀释后，均匀涂布于LB板(Amp^ )上，37℃培养箱中倒置培养过夜。将生长良好的菌落转印于NC膜，并将此膜置于加有IPTG的LB板上，37℃诱导培养4h。取下NC膜，在氯仿蒸气中熏蒸15min后，在裂解液中过夜裂解。经洗膜、封闭，加人囊尾蚴阳性血清；再洗膜、封闭，加羊抗人IgG—HRP，与底物作用后，初步筛选得到了阳性克隆。对可疑阳性克隆，用同样方法反复筛选，直到完全确定为止。 相似文献
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猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因的克隆、序列分析及蛋白结构预测 总被引：4，自引：0，他引：4
GM-CSF在机体免疫系统中发挥重要的免疫调节作用.用PHA与LPS体外联合刺激猪外周血单个核细胞,采用RT-PCR技术成功克隆了猪GM-CSF基因.序列分析表明,该序列与NCBI/GenBank上登载的序列有两个碱基不同;将猪与人、牛、羊、狗、猫、鼠等动物的GM-CSF基因序列相比较,其一致性分别为82.1%、85%、88.1%、82.8%、83.7%、70.5%,在氨基酸水平上一致性为70.3%、70.9%、78.1%、70.3%、71.9%、54.4%.然后利用生物信息学和分子生物学软件,对猪GM-CSF的结构进行预测,结果表明,猪GM-CSF为一结构松散的球状蛋白分子.猪GM-CSF基因的成功克隆及其编码蛋白结构的预测为开发高效、低毒且性质稳定的猪GM-CSF产品奠定了基础. 相似文献
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