猪圆环病毒3型微滴式数字PCR检测方法的建立与应用     

李原野  陈世界  林华  张婧  安薇  陈瑛琪  张继宗  朱玲 《江苏农业学报》2021,37(2):389-396

为建立能灵敏、高效、准确诊断猪圆环病毒3型(PCV3)的检测方法,并运用该方法研究PCV3传播特性及组织嗜性,根据GenBank中PCV3 ORF2基因(MF631813.1)的核苷酸序列,设计合成PCV3的引物和探针,通过退火温度以及引物、探针用量和特异性等优化,建立了PCV3微滴式数字PCR检测方法.试验结果表明建立的猪圆环病毒3型微滴式数字PCR检测方法具有较好高的灵敏性、重复性和特异性,最低能检测到1μl 16.35拷贝的质粒标准品,可用于猪圆环病毒3型的早期诊断.  相似文献   

猪轮状病毒四川株的分离鉴定及增殖规律     

杨文宇  朱玲  周远成  郭万柱  徐志文 《兽医大学学报》2014,(2):192-198

为了解猪轮状病毒（PoRV）在MARC-145细胞系上的培养特性及增殖规律,本试验利用MARC-145细胞,从四川仔猪腹泻样品中分离到1株PoRV,并通过PCR检测、病毒理化实验与微量中和实验证实,命名为SC-R株。用含不同浓度胰酶营养液培养SC-R株48h后,分别收集病毒液进行定量分析;同时,以SC-R分离株感染MARC-145细胞,在感染后不同时间分别收集感染病毒液,利用PoRV荧光定量检测方法对不同样品中病毒RNA进行定量分析,绘制PoRV生长曲线。结果表明,用含3％胰酶营养液培养的细胞液中PoRV的RNA含量明显高于其他组;-步生长曲线显示细胞外病毒RNA含量呈“s型”曲线增长,感染后0～8h为潜伏期,病毒RNA含量维持在较低水平;8～36h为突破期,病毒RNA含量呈对数增长;感染48h增长速度减缓,维持在较高水平,逐步进入稳定期。胰酶可增加PoRV对细胞的感染性,3％是本试验最为适用的胰酶浓度;PoRV感染MARC-145后在细胞内增殖并逐步释到细胞外。  相似文献   

云斑(鮰)对9种常用药物的急性毒性试验     

张晋芳  朱玲  武秀丽 《水生态学杂志》2001,21(3)

云斑(鮰)对9种药物的敏感性依次为:孔雀石绿＞高锰酸钾＞强氯精＞甲醛＞硫酸铜＞硝酸亚汞＞生石灰＞敌百虫＞呋喃唑酮,各种浓度对云斑(鮰)鱼苗的安全浓度为:0.01、0.325、0.38、27.21、0.77、0.34、66.11、9.03、58.68 mg/L.敌百虫的安全浓度高于其它鱼的常用安全浓度.  相似文献   

猪伪狂犬病病毒的检测方法研究进展     

顾凡  黄山  刘鹏娟  黄剑波  卓秀萍  朱玲 《猪业科学》2014,(2):91-94

猪伪狂犬病(pseudorabies,PR)是长期影响养猪业发展的主要疫病之一,对我国养猪业的发展造成了极大威胁。因此研究人员对这一疾病做了大量实验研究,建立并完善了一系列的检测方法。对病原学检测方法,血清学检测方法,分子免疫学检测方法做一综述,以期能对伪狂犬病病毒的检测起到参考作用。  相似文献   

杨树新品系苗期遗传性状测试评价     

朱玲  王庆斌  邹威  魏彪  陶双勇  杜人杰 《林业科技》2014,(1):1-3

在4个地点,对14个杨树新品系二根一干苗进行了6项性状指标综合测试评价,综合性状表现优良的品系有中M、50、53、B、J、5号杨,苗高、胸径生长量较对照小黑杨提高47.21%~25.65%、88.89%~38.27%,锈病指数较小黑杨降低9.63~13.04。  相似文献   

猪细小病毒VLPs供外源蛋白插入的候选位点发现及其重组PCV2-ORF2的病毒样颗粒构建   总被引：2，自引：0，他引：2  

朱玲  郭万柱  蒋清蓉  徐志文  熊丁杰  张博  王印  赵玲 《农业生物技术学报》2010,18(3):431-436

先将猪细小病毒(PPV)SC-1株VP2基因扩增产物克隆到pMD18-T载体构建质粒pMD-VP2;设计两对引物(分别引入Hind Ⅲ和Sac Ⅰ两个酶切位点)扩增猪圆环病毒二型(PCV2)SC株ORF2基因,构建了pMD-ORF2.A和pMD-ORF2.B两质粒;经相应内切酶酶切后回收目的片段,插入PPV SC-1株VP2基因的Hind Ⅲ和Sac Ⅰ两个特异限制酶切位点处(分别对应于PPV VP2蛋白N端和C端1/3处),得到重组质粒pPVP2-ORF2.A和pPVP2-ORF2.B.经鉴定后的质粒pPVP2-ORF2.A和pPVP2-ORF2.B用Kpn Ⅰ、BamH Ⅰ和ApaL Ⅰ三酶切,回收含VP2和ORF2基因的目的片段克隆至真核表达载体(pEGFP-C1),得到重组质粒pEGFP.VO.A和pEGFP.VO.B.脂质体法转染重组质粒于Cos7细胞后,采用荧光显微镜和电镜观察基因表达情况,结果仅在转染pEGFP.VO.A的样品中观察到了病毒样颗粒(VLPs).纯化VLPs免疫小鼠,结果显不能产生较好的细胞免疫和针对PPV和PCV2的特异性体液免疫,该结果表明研究中获得了PCV VP1-PCV2ORF2重组VLPs,同时也揭示PPV VPLs的N端1/3适于外源蛋白插入构建重组VLPs  相似文献   

接种蚯蚓对潮土氮素矿化特征的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

刘宾  李辉信  朱玲  焦加国  陈小云  胡锋 《土壤学报》2007,44(1):98-105

在室内恒温（20℃）培养，间歇破坏性采样（于培养后第2、6、13、20、27、41、55天采样）的条件下，研究蚯蚓活动对土壤中氮素矿化特征的影响。共设置4个处理：（1）对照处理-不接种蚯蚓不添加秸秆（S）；（2）仅接种蚯蚓不添加秸秆处理（E）；（3）不接种蚯蚓仅添加秸秆处理（O）；（4）接种蚯蚓并添加秸秆处理（0E）。结果表明：在整个培养时期中，仅接种蚯蚓处理（E）的土壤铵态氮和硝态氮含量均较对照处理（S）有显著提高（P〈0．05），分别较同期对照处理（S）高出0．54-5．71倍和0．04-2．01倍；接种蚯蚓添加秸秆处理（OE）的土壤中的铵态氮含量较同期仅添加秸秆处理（0）增高了0．42-7．26倍，并达到显著性差异（P〈0．05），但两处理的硝态氮含量无显著性差异（P〉0．05）。从整体水平来看，无论是否添加秸秆，接种蚯蚓处理（E，OE）的土壤矿质氮水平均较相应的对照处理（S，O）有显著提高（P〈0．05），到培养55d时，分别增加了1．93倍和2．36倍。仅接种蚯蚓处理（E）的土壤氮素矿化速率和累积矿化速率较对照处理（S）有显著提高（P〈0．05）；添加秸秆后，无论是否接种蚯蚓，土壤累积矿化速率均为负值，表现为对土壤矿质氮的净固定，而从土壤氮素矿化速率的变化来看，前期的各个时间段中主要表现为矿质氮的净固定，后期逐渐表现为一定程度的矿化。此外，仅接种蚯蚓处理（E）的全氮含量除了培养2d外，其他培养时期均与对照处理（S）有显著差异（P〈0．05），到培养55d时，其全氮含量较同期对照处理（S）增高了6．55％。相关性分析结果表明，在仅接种蚯蚓处理（E）中，培养前后蚯蚓鲜重的减少量与土壤全氮含量之间存在极显著正相关（P〈0.01），根据一元线性方程将蚯蚓损失的鲜重换算为蚯蚓体损失的氮量后发现，在整个培养期中蚯蚓体本身排泄的氮大约占土壤全氮含量增加量的百分比为42％-100％。  相似文献   

杨树新无性系苗期叶面形态指标测试     

朱玲  阮立强  魏彪  邹威  陶双勇  王庆斌 《林业勘查设计》2011,(1):66-67

通过在黑龙江省牡丹江市4个地点,对杨树14个品种的苗期叶面8项性状指标进行测试,综合评价试验结果[1]表明:单株叶面积以中M为最大,中H、LC、LB、01号杨次之;单株叶重以中M为最重,LC、中H、01、LB号杨次之;不同品种间单株叶面积、单株叶重、单叶面积等8项指标均存在显著差异,而且地点×品种交互作用差异也极显著。  相似文献   

微波高压快速消解-紫外分光光度法测定南阳彩色小麦中的微量元素硒   总被引：1，自引：2，他引：1  

朱玲  高向阳  王金鹏 《安徽农业科学》2006,34(23):6093-6095,6097

以南阳灰麦、紫麦、蓝麦为材料,采用微波高压快速消解-紫外分光光度法测定了样品中微量元素硒的含量。结果表明:南阳彩色小麦中硒含量为13.37~21.95 mg/kg(干基),3ε32为1.4×104,标准曲线的相关系数r为0.999 7,加标回收率为100.6%~105.7%,RSD为4.4%,因此该法具有灵敏度高、稳定性好、工作曲线线性关系好的显著优点,结果令人满意。  相似文献   

联合肌注猪IL2真核质粒对PPV VP2-PCV2 ORF2核酸疫苗免疫效果的影响     

朱玲  郭万柱  徐凯  王印  陈燕凌  唐玉香 《中国兽医学报》2011,31(2)

将猪IL2基因和PPV VP2基因、PCV2 ORF2截短基因克隆至真核表达载体pCI-neo,构建了重组质粒pCI-ORF2-VP2和pCI-IL2,用脂质体介导法将pCI-ORF2-VP2质粒转染PK15细胞,采用间接免疫荧光法检测在体外的表达情况。并以小鼠为动物模型,将pCI-IL2和pCI-ORF2-VP2质粒联合肌注免疫小鼠,相同剂量免疫2次,间隔2周,同时设立pCI-ORF2-VP2、pCI空载体、猪细小灭活苗、圆环亚单位苗对照,检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞的转化功能,外周血T淋巴细胞亚群的动态变化及血清抗体的滴度。结果显示,pCI-ORF2-VP2在PK15细胞中能正常表达,联合免疫组在第28天能够检测到PPV和PCV2抗体,第21~42天诱导淋巴细胞转化和CD4+、CD8+细胞的数量高于或显著高于pCI-ORF2-VP2质粒组。结果表明,猪IL2质粒联合肌注可以提高VP2/ORF2核酸疫苗的免疫效果。  相似文献