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根据GenBank的羊Fas细胞凋亡因子序列设计1对特异性引物，将EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点引入到引物两端，同时加上保护性碱基。利用RT-PCR技术，从新疆卡拉库尔羊外周血淋巴细胞总RNA中扩增出特异性基因片段。将分离纯化后的PCR产物与pMD-18T载体进行连接，利用双酶切反应与菌液PCR对阳性重组克隆进行鉴定筛选，然后进行序列测定。使用原核表达载体pET28a来完成Fas的定向克隆，成功构建重组融合表达质粒pET-28a-Fas，然后将质粒转化至E.coli BL21感受态，设置不同IPTG浓度和诱导温度，选择最佳的表达条件，然后初步纯化重组融合蛋白。结果表明，在pET28a表达载体中，Fas基因的插入方向和读码框均正确；同时Fas基因也完成在E.coli BL21融合表达的目的，融合蛋白分子质量为39.7 ku。 相似文献
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为确定新疆阿克苏地区某鸡场鸡精神不振、采食量减少和死亡的原因，试验对采集自该鸡场病死鸡内脏器官进行病原的分离鉴定，并进行动物致病性试验和药物敏感性试验，分析其致病力和耐药性。结果显示，从发病鸡内脏器官中分离到一株革兰氏阳性球菌，分离菌对复方新诺明、麦迪霉素、红霉素、诺氟沙星、环丙沙星、阿莫西林、青霉素、克林霉素、氨苄西林等药物表现为耐药，对部分头孢类、四环素类、氨基糖苷类、氯霉素类和多肽类药物表现为不同程度敏感；通过对分离菌进行形态学观察、生化试验、16S rRNA基因测序和同源性分析，确定该分离菌为人葡萄球菌。该分离菌可引起小鼠和雏鸡死亡，死亡雏鸡以肝脏肿大出血、胃黏膜出血等内脏器官出血为主要病理变化，与自然发病一致。研究首次在鸡上分离出人葡萄球菌，为鸡的人葡萄球菌病防治和合理用药提供依据。 相似文献