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根据已知猪圆环病毒2型(PCV2)序列设计引物,PCR扩增出579 bp去除信号肽的ORF2基因片段,将其克隆入表达载体pGEX-4T-1的BamHI和XhoI位点构建重组质粒,转化Rossetta(DM3)进行诱导表达,经检测表达蛋白以包涵体形式存在。用GST蛋白纯化试剂盒纯化目的蛋白,SDS-PAGE检测只存在一条约45.3 ku的目的条带,纯度达到90%以上。Western blot分析表明纯化的目的蛋白具有良好的免疫反应性。以纯化的蛋白为抗原,建立了间接ELISA诊断方法及组装了试剂盒,确定了最适的抗原包被浓度为0.625μg/mL,抗体稀释浓度为1∶100,确定临界值为0.371。该试剂盒与猪圆环病毒1型(PCV1)、猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)血清无交叉反应性;与北京世纪元亨公司ELISA试剂盒相比其特异性、敏感性、符合率分别为90%、93.3%、91%;对同份血清样品批内、批间重复性试验变异系数均小于10%;稳定性试验变异系数小于5%,在4℃条件下保存期可达12个月;对240份临床血清检出率为80%。结果表明,研制的ELISA诊断试剂盒具有良好的特异性、敏感性,重复性、稳定性,完全达到国内外同类产品质量要求,可大规模应用于临床检测。 相似文献
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为确定发病兔场兔的死亡病因并对其病原进行鉴定分析,经临床诊断、病理剖检、病毒分离、纯净性检测、血凝性检测、致病性试验、特异性试验、免疫原性试验以及qPCR和测序鉴定,用病死兔病料组织接种健康易感家兔,成功分离到1株兔出血症病毒。分离株病毒不含细菌、霉菌、支原体;对人"O"型红细泡的血凝效价为1∶1024;分离株病毒能够使健康易感兔在96h内全部死亡兔病毒性出血症;兔出血症病毒阳性血清对分离株病毒具有中和作用;用分离株病毒制备的灭活疫苗具有良好的免疫原性;分离株病毒通过qPCR测序鉴定为RHDV毒株。 相似文献
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鸡传染性支气管炎是一种急性高度接触性呼吸道传染病,影响鸡的产蛋量和蛋品质。本研究以鸡传染性支气管炎病毒标准株M41人工感染21日龄700只海兰褐雏鸡,使其发病。接种病毒前后在饮水中分别添加不同剂量的清瘟败毒颗粒,以清瘟败毒散为对照治疗组,观察不同处理鸡的临床症状、发病率、病理变化和死亡率等。结果表明:饮水中添加0.z5%o清瘟败毒颗粒,对IBV标准株M41的攻毒保护作用与阳性对照组相比较差异显著(P〈0.05);清瘟败毒颗粒低剂量治疗组与高、中剂量治疗组及清瘟败毒散治疗组之间差异显著,因水中添加0.5‰清瘟败毒颗粒,对人工感染鸡传染性支气管炎治疗作用明显,治愈率达88.00%,显著高于清瘟败毒散治疗组(P〈0.05)。 相似文献
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小麦是祁县的主要粮食作物之一,而麦蚜是小麦生产上的重要害虫,分布极广,全县麦区均普遍发生。祁县麦蚜种群以穗蚜即麦长管蚜为防治优势种。麦长管蚜长卵形,草绿色,腹管长圆筒形,成、若虫均以刺吸式口器吸食小麦叶、茎、穗的汁液,被害叶片出现黄白色斑点,严重者叶片变黄,全株枯死,影响小麦的生长发育并造成减产10%左右,大发生年份超过30%。此外,蚜虫是小麦黄矮病毒病的传播媒介,其间接危害远远大于蚜害本身。 相似文献
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