鲤鱼肿瘤坏死因子α1基因cDNA的克隆及序列分析     

赵晓  何江帅  冯祥汝  陈义龙  王彬  李伟  张俊辉  王文东  杨振国  卢强 《中国畜牧兽医》2011,38(7):114-118

试验以鲤鱼外周血白细胞肿瘤坏死因子α1(tumor necrosis factor alpha 1,TNFα1) EST序列为基础,经地高辛标记作为探针对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从0.9×10⁴个重组噬菌体中,经过2轮筛选获得3个阳性克隆。序列分析结果显示,该序列包含128 bp的5''非编码区(5''-UTR),423 bp的3''非编码区(3''-UTR),开放阅读框ORF长768 bp,共编码255个氨基酸,在其3''非编码区存在几个ATTTA不稳定基序。预测蛋白等电点为8.20,分子质量大小为28.1 ku。序列同源性比较结果表明,所获序列与GenBank上登录的鲤鱼TNFα基因的同源性达94%。蛋白质的序列和结构分析结果发现,其具有TNF家族的典型序列特征、1个跨膜区结构和1个假定的产生成熟肽的裂解位点。  相似文献   

旋毛虫新生幼虫期特异性T668全长cDNA的克隆及序列分析   总被引：6，自引：4，他引：2  

刘明远  付宝权  吴秀萍  卢强  任瑞文  姚春雨  牛廷献  张西臣  黎诚耀  P.Boireau 《中国兽医学报》2002,22(1):37-40

利用旋毛虫新生幼虫期特异性 c DNA片段 T6 6 8- SS2作为核酸探针 ,在新生幼虫 c DNA文库中筛选出 10个阳性克隆。序列测定及分子生物学软件分析表明 ,克隆 G10 - 6的 c DNA片段全长 16 0 0 bp,含 12 90 bp的开放阅读框架 ,编码 1个由 4 30个氨基酸残基组成的多肽 ,其相对分子质量理论推导值为 4 6 84 0 ,等电点 (PI)为 9.6 5。主导氨基酸为Ser(11.39% )和 Thr(10 .93% )。开放阅读框架中具有丝氨酸蛋白酶保守功能区及酶活性位点结构 ,其 N末端的信号肽及 2个糖基化位点表明 ,其为分泌性糖蛋白 ,预示其可能在细胞外起着重要作用。DNA同源性分析表明 ,该 c DNA为一新的 c DNA分子。  相似文献   

胆总管切开探查取石后放置与不放置"T"管的疗效观察     

姜杰  刘华安  曹锡朝  卢强 《湛江医学院学报》2006,24(2):142-143

目的:观察胆总管切开探查取石后不放置“T”管的可行性。方法:胆道结石患者135例分为两组:(1)放置“T”管组(n=70),按传统方法在胆总管切开探查取石后放置“T”形管;(2)不放置“T”管组(n=65),在胆总管切开探查取石后不放置“T”管。结果:不放置“T”形管组的住院时间平均为(8.0±2.0)d,而放置“T”管组为(18.0±2.5)d,差异有统计学意义(P<0.01)。不放置“T”管的患者避免了因“T”形管引起的胆瘘并发胆汁。结论:在正确掌握患者适应证的前提下,胆总管切开探查取石后以不放置“T”形管为好。  相似文献   

旋毛虫FYVE锌指结构蛋白基因的克隆及表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

孟学平  卢强等 《中国兽医科技》2001,31(12):9-12

用旋毛虫新生幼虫差减cDNA文库中的T54克隆作为核酸探针，对旋毛虫成虫和新生幼虫混合cDNA文库进行筛选，获得1个全长1464bp的cDNA分子，该cDNA含有1个1290bp的开放阅读框架（ORF），Blastn同源性分析表明，与其它已知生物基因序列无明显的同源性，为一新的cDNA。该ORF编码1个429个氨基酸残基组成的多肽，其分子质量理论推导值为49．9ku，等电点为5．6，在12－14及103－105氨基酸残基处分别有2个糖基化位点NLS及NVS，在C末端344－409氨基酸残基处有1个FYVE锌指结构域（Profile PS50178)。Blastp同源性分析表明，与广东管圆线虫（Angiostrongylus cantonensis)66.0ku蛋白（gi/1743430)同源性最高，为39．0％。在此基础上对旋毛虫FYVE锌指结构重组蛋白进行了表达，表达蛋白占菌体蛋白的24％。  相似文献   

旋毛虫G10-7基因在大肠杆菌中的高效表达   总被引：4，自引：0，他引：4  

牛廷献  刘明远  卢强  付宝权  吴秀萍  郑明光  Pascal Boireau 《中国兽医学报》2002,22(5):481-483

旋毛虫新生幼虫期特异性 G10 - 7基因从 PBK- CMV- G10 - 7重组质粒中亚克隆到 p ET- 2 8b( )原核表达载体上 ,成功地构建了重组表达质粒 p ET- 2 8b- G10 - 7。将其转化到大肠杆菌 DE3感受态细胞中 ,经 IPTG诱导表达 ,其细菌裂解物经 SDS- PAGE电泳可检测到相对分子质量约为 34 0 0 0的目的蛋白带 ,且随诱导时间的延长蛋白表达量逐渐增加 ,诱导 4h达到峰值 ,薄层扫描结果显示 ,目的蛋白占菌体总蛋白的 6 1.7%。Western- blotting检测显示 ,此蛋白可被感染旋毛虫家猪阳性血清所识别 ,表明该蛋白具有良好的抗原性。  相似文献   

一种包被抗原稳定剂的研制及其特性鉴定     

张茂林  段铭  关振宏  单晶辉  卢强  孟锐奇  刘红全  何秀苗 《湖北农业科学》2010,49(7)

以纯化的狂犬病病毒2μg/mL包被酶标板,将乳糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖分别以5%(W/V)的终浓度加到1%BSA+4%PEG的PBS中,所制备的溶液作为封闭剂,研究其对于37℃贮存板的稳定性,从中选取最佳的封闭剂组合,并研究其对于乙肝表面抗原、猪瘟病毒E2抗原和猪繁殖与呼吸综合征nsp2基因原核表达产物在包被状态下的稳定性。结果显示,以1%BSA+4%PEG+5%蔗糖的PBS溶液的封闭效果最佳,该封闭剂对于乙肝表面抗原、猪瘟病毒E2抗原和猪繁殖与呼吸综合征nsp2基因原核表达产物也具有良好的稳定性。  相似文献   

旋毛虫新生幼虫p46 000抗原基因的克隆及序列分析     

付宝权  吴秀萍  刘明远  张亚兰  原丽红  李莲瑞  卢强  陈启军  P.Boireau 《中国兽医学报》2005,25(1):37-39

应用旋毛虫感染猪血清，对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行了免疫筛选。对阳性克隆pBK-cMV-WN10的序列分析结果表明。cDNA全长为1352bp。含有1个1218bp的完整的开放阅读框架(ORF)，编码的多肽由406个氨基酸残基组成，其相对分子质量理论推导值为45900，等电点为5．43，N末端的信号肽及糖基化位点(NCS)表明其可能为分泌性糖蛋白，氨基酸序列19～156与158～295为重复区域，相似性为74％．C末端有1个半胱氨酸蛋白酶抑制剂结构域，但旋毛虫p46000抗原与其他线虫的半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白结构有很大差异，可能已经失去半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白的功能。PCR结果显示。从旋毛虫新生幼虫、肌幼虫、3日龄成虫和5日龄成虫cDNA中均扩增出此基因，表明此基因在旋毛虫各个时期均有表达。  相似文献   

渠县耕层土壤养分现状及应对措施探讨     

杨建平  伍渠  赵小英  卢强  熊震  叶汇 《现代农业科技》2009,(9)

根据渠县2005年来土壤耕层养分测试与第2次土壤普查数据比较,摸清耕层养分现状及其演变。结果表明,近30年间耕层养分总体上升,其中耕层有机质、全氮、速效磷上升幅度较大,缓效钾、速效钾下降加剧,有效锌稍富余,有效镁、硼、钼缺乏;有机质及全氮高中分布比例超过85%,速效磷高中分布升高32.2%、速效钾下降41.8%,二者一半仍属缺乏。据此,提出了应对措施。  相似文献   

PCR扩增invA基因特异性检测沙门氏菌   总被引：14，自引：2，他引：12  

卢强  陈贵连 《中国兽医学报》1994,14(3):251-256

建立了扩增invA基因检测沙门氏菌的PCR方法。对收集的50个血清型123株沙门氏菌及7种27株非沙门氏菌进行PCR,2％琼脂糖电泳检查,结果所有沙门氏菌都扩增出了300bp的特异性产物,非沙门氏菌都未扩增出此目的条带。产物的特异性由slot blot杂交进一步证实。通过电泳判定结果,该法可检出扩增体系中10pg染色体DNA及10~2cfu的纽波特沙门氏菌50029。为下步克隆而设计的两个酶切点（Bam HI,Eco RI）对引物的特异性没有影响。本研究为沙门氏菌的检测提供了简洁、敏感、特异的新方法,同时为克隆invA基因做属特异性探针打下了基础。  相似文献   

旋毛虫3日龄成虫cDNA文库的免疫筛选   总被引：5，自引：0，他引：5  

张亚兰  付宝权  刘明远  原丽红  吴秀萍  李莲瑞  卢强  陈启军  P.Boireau 《中国兽医学报》2004,24(4):355-357

以旋毛虫感染猪血清为抗体探针 ,对旋毛虫 3日龄成虫 c DNA文库进行免疫筛选 ,将获得的阳性克隆进行测序 ,用分子生物学软件对所得 c DNA序列进行序列分析。结果从 4× 10 5个重组噬菌体中共获得 33个阳性克隆。序列分析结果显示 :共发现新 c DNA序列 16个 ,已知 c DNA序列 4个。其中阳性克隆 Zh8,9,10 ,12 ,13,14 ,2 0 ,2 6 ,2 8,2 9,36 ,5 4 ,6 8,70编码丝氨酸蛋白酶。通过免疫学筛选直接获得了具有免疫反应原性的阳性 c DNA克隆 ,为旋毛虫病诊断抗原及保护性抗原的筛选奠定了基础  相似文献