共表达γ干扰素的乙型脑炎病毒与猪细小病毒核酸疫苗的构建及其免疫原性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

叶茂  郭万柱  徐志文  王小玉  李云云 《西南农业学报》2010,23(3)

为了构建和筛选良好的猪乙型脑炎和猪细小病毒的核酸疫苗,并提高核酸疫苗的免疫效果,用重叠PCR法把PPV VP2和JEV E10连接,再将扩增的IFN-γ连入构建载体pcDNA.VEI使其共同表达.用脂质体将pcDNA.VEI介导入Vero细胞,通过间接免疫荧光法检测目的基因的体外表达.用pcDNA.VEI和不表达IFN-Κ的pcDNAZ.VE分别免疫Balb/c小鼠,同时设立PBS、猪细小病毒灭活疫苗、乙型脑炎弱毒疫苗和pcDNA3.1空白质粒免疫对照组.共免疫两次,间隔2周检测免疫指标.结果表明,通过鉴定核酸疫苗的构建达到了预期目标,并可在荧光显微镜下观察到了其转染的Vero细胞.该核酸疫苗能够诱导脾淋巴细胞增殖.ELISA结果显示,与pcDNA.VE和阴性对照组进行比较,pcDNA.VEI所诱导产生的两种抗体都较高.pcDNA.VEI组能较稳定的诱导产生T细胞亚群,并检测到CD4+/CD8+比例于首免2周后都高于pcDNA.VE.因此表明该核酸疫苗能产生特异诱导体液免疫和细胞免疫且是安全的,证明了IFNγ基因具有免疫增强效果,为乙脑和猪细小病毒核酸疫苗研究提供了实验依据.  相似文献   

H3N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立     

张博  郭万柱  徐志文  王印  朱玲  孙志勇  王小玉 《中国兽医学报》2011,31(3)

采用RT-PCR方法成功扩增了H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)四川分离株(A/Swine/Sichuan/01/2006)的NS1基因,将其克隆于原核表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET32-NS1.将该质粒转化进大肠杆菌RosettaTM,经终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导表达后,通过SDS-PAGE电泳表明融合的NS1蛋白得到了大量的表达,该融合蛋白的相对分子质量约为43 500.Western-blotting结果显示该蛋白能与阳性血清发生特异性反应具有很好的免疫反应原性.结果表明,所建立的ELISA方法与几种常见猪群传染病病原无交叉反应,具有较好的特异性、敏感性和重复性,可进一步优化应用于临床SIV的检测.  相似文献   

柠条容器育苗播种时间与生长规律的研究     

梁咏亮  李新志  王小玉 《宁夏农林科技》2007,(3):5-7

通过对沙生树种柠条在同一基质配方、同一容器、同一管理水平条件下进行不同播种时间的工厂化育苗试验,定期观测、统计分析苗高、地径、地上干重、地下干重、总干重和地上地下干重比等生长指标,初步得出柠条容器苗的苗期生长变化规律。筛选出宁夏当地工厂化育苗最佳播种、施肥、出圃时间。  相似文献   

河南省南太行地区土地利用及生态服务价值变化     

马泉来  卫华鹏  王小玉  张正飞  詹玉莹  高凤杰  周浩 《水土保持通报》2020,40(5):234-241

[目的] 研究典型区域内土地利用变化及其对区域生态系统的影响，旨在为区域国土空间布局优化和山水林田湖草系统治理提供理论依据。[方法] 基于多时间节点遥感数据，综合“3S”技术等方法模型，对南太行地区1990—2016年土地利用及生态服务价值变化规律进行研究。[结果] 研究区2000—2010年土地利用格局较其他两时间段发生了剧烈变化，其中，旱地减少211.77 km²，建设用地增加319.78 km²，各地类动态变化度达到最大值。1990—2016年，南太行土地利用转移类型方面以旱地转为建设用地为主，建设用地复垦为旱地在研究后期逐渐成为耕地补充的重要途径，大量的未利用地得到开发利用，可供开发利用的后备资源越来越少。研究区生态服务价值总量从1990年的2.12×10¹⁰元减少到2016年的1.78×10¹⁰元，减少了3.33×10⁹元，建设用地、耕地、林地、草地和水域对生态服务价值总量变化的贡献率分别为-90.19%，-25.75%，-17.51%，-10.93%和44.46%，水温调节与废物处理等生态功能在研究期间受到较大破坏。[结论] 河南省南太行地区土地利用及生态系统特征变化明显，进一步平衡建设用地与耕地保护之间的关系，调整土地利用结构，维护生态系统服务功能是研究区国土空间布局优化和生态修复过程中应当重点关注的地方。  相似文献   

我国进出口农产品转基因成分检测与分析     

成晓维  王小玉  朱绍智  胡松楠  冯家望  邝筱珊  游淑珠  唐食明 《中国农业大学学报》2014,19(3):43-48

对进出口农产品的转基因成分进行调查研究,分析转基因农产品的检出情况,探讨转基因农产品检出情况与转基因成分的关系,并总结转基因农产品的风险因素。研究采用荧光PCR法对425份进出口农产品样品进行转基因成分检测。结果表明:所检样品中检出含转基因成分的有36份,阳性率为8%。检出的转基因成分主要为转基因大豆、大米、玉米和油菜籽。研究结论是我国进出口农产品中存在转基因成分。进口农产品方面,大豆、玉米及其制品是含有转基因成分的高风险产品;出口农产品方面,大米及其制品是含有转基因成分的高风险产品。  相似文献   

猪II型圆环病毒四川分离株鉴定及其ORF2基因序列分析     

王新  郭万柱  朱玲  徐志文  颜其贵  王印  王小玉  罗燕  周婷 《畜牧市场》2009,(11):21-22

猪圆环病毒（Porcinecircovirus,PCV）,属于圆环病毒科（Circoviridae）,圆环病毒属（Circovirus）,血清型为PCV—1和PCV－2。PCV—1首先由Tis2cher于1974年从PK-15猪肾传代细胞系中分离获得,PCV－2首先由Clark报道了是断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）的主要病原,  相似文献   

减毒猪霍乱沙门菌C500作为基因疫苗运载体的研究现状     

韩国全  郭万柱  林华  张博  王利娜  李小欢  王小玉 《猪业科学》2009,26(6):80-83

基因疫苗具有众多的优点,被誉为疫苗研究的第3次革命,但是在畜牧生产的使用中存在系列亟待解决的问题,其中关键的问题就是如何将基因疫苗表达质粒导入到动物机体免疫细胞,减毒胞内寄生菌的应用很好的解决这一问题.目前我国仔猪副伤寒弱毒活疫苗使用的基本都是C500株,以其作为猪群重要传染病基因疫苗运载体的应用研究具有重要临床应用价值,对猪霍乱沙门菌疫苗株C500作为基因疫苗运载体的研究现状予以概述.  相似文献   

伪狂犬病病毒Fa株gE基因的克隆与序列的比较分析   总被引：4，自引：0，他引：4  

王勤  郭万柱  徐志文  汪铭书  王小玉 《畜牧兽医学报》2003,34(4):389-393

根据已发表的伪狂犬病病毒（PRV）的基因序列,设计合成一对引物PCL1和PCL2,以PRV Fa株的DNA为模板成功地扩增得到预期的长约1.7kb的特异片段,经本科切鉴定,初步确定为gE基因。将扩增产物经Kpn Ⅰ、EcoRⅠ消化形成粘末端克隆到pUC18质粒,得到了明显大于载体的重组质粒PpgE。重组质粒PpgE经本科切鉴定为含有PRV的gE基因,测序PpgE得到完整的gE基因片段,并与4株不同来源的毒株进行了比较分析。5毒株的gE同源性比较分析发现毒株间同源性最低也高达97%,这体现了gE基因的保守性。分析还表明Fa与TNL同源。同时99%的高同源性也显示Fa、Ea、SH可能是同一毒株。gE序列在1040-1410碱基的高同源性区域作为PRV的PCR检测或作为PRV的PCR检测或作为核酸探针是非常重要的。  相似文献   

含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒的构建   总被引：6，自引：2，他引：6  

罗燕  郭万柱  徐志文  刘艳丽  殷华平  王新  王小玉  苟琳 《畜牧兽医学报》2005,36(10):1064-1068

将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2．EGFP中，构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2．EGFP．VP2。采用磷酸钙转染系统，将pPI-2．EGFP．VP2 DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察、Dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒，将其中一株（命名为SA215-B）DNA用BamHI酶切和Southern转印杂交进一步验证重组病毒构建成功，并通过SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测表明PPV VP2基因在重组病毒内获得表达，产生大小约93ku的融合蛋白，同时融合蛋白中的PPV VP2结构蛋白仍然保持了原有的反应原性，表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒。  相似文献   

ORF3基因缺失对猪圆环病毒Ⅱ型感染复制能力的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨晓农  郭万柱  徐志文  王新  殷华平  王小玉  龙虎 《中国兽医学报》2008,28(9)

设计1对特异性引物AF-P1/AF-P2,从疑似PCV2感染的病料中扩增获得1 767 bp的PCV2全基因组(命名为PCV2-CD),克隆至pMD18-T Simple载体构建重组质粒pTS-PCV2-CD.序列分析表明:PCV2-CD与GenBank中公布的12个PCV2毒株间的同源性高达95.0%～100%.用Nco Ⅰ酶切pTS-PCV2-CD获得4 459 bp线性目的DNA片段,补平CATG 4个碱基、连接环化构建ORF3基因插入缺失重组质粒pTS-PCV2-CD-C并测序.用Sac Ⅱ酶切pTS-PCV2-CD-C.回收1 771 bp线性目的片段,体外连接环化构建了ORF3基因缺失突变毒株mPCV2-C.PCR-RFLP检测表明,在脂质体转染法转染mPCV2-C、培养并盲传4代的IBRS-2细胞中(PCVl阴性),特异性检测到mPCV2-C的DNA;电镜观察发现,在盲传6代的IBRS-2细胞胞核内观察到突变毒株的病毒颗粒.试验结果表明:ORF3基因缺失突变毒株mPCV2-C具有感染性,能够在IBRS-2细胞中复制增殖,证实ORF3基因不是PCV2复制的必需基因.  相似文献