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单抗介导的银加强金标免疫技术检测传染性支气管炎病毒 总被引：1，自引：0，他引：1
利用胶体金标记纯化的羊抗鼠IgG,建立了一种银加强金标免疫技术(SECGA)检测IB抗原.检测抗原时先将抗原点样于硝酸纤维素膜(NCM)中央,封闭后浸于1:40 IBV单抗中作用10 min,洗涤后再浸于1:4金标羊抗鼠IgG液中作用1 h,银染10 min后观察,在膜上出现灰黑斑点的为阳性结果,反之,不出现斑点为阴性结果.SECGA对IB抗原最低检测量为0.703 ng/点(2 μL),对含毒尿囊液的最低检测量为102.9 EID50,检测IBV M41在鸡胚中繁殖时以36～54 h含毒量最高;检测SPF鸡气管粘液,至少于感染后3 d内检出病毒.结果表明,SECGA检测抗原可用于IBV早期诊断,具有群特异性、快速、敏感、简便,不需特殊设备、结果易判定等优点,尤适于基层实验室或现场应用. 相似文献
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IBVNP基因的可溶性表达及间接ELISA方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
利用RT-PCR技术将传染性支气管炎病毒M41株的N基因克隆至原核表达载体pET-28a,构建了重组表达载体pET-NP.将其转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后,NP基因获得高效表达.经SDS-PAGE与Western blotting检测证实表达的NP蛋白具有免疫学活性,且以可溶性蛋白形式存在.以此抗原建立了检测传染性支气管炎病毒抗体的酶联免疫吸附试验 (NP-ELISA)方法.敏感性测定证实,当阳性血清1∶500倍稀释时,D450值为0.356,说明仍能检测到IB抗体,该方法比较敏感.特异性试验显示该法与AIV H9、H5、IBD、ND、EDS76的标准阳性血清不发生交叉反应,具有良好的特异性;NP-ELISA和商品化试剂盒对75份血样的阳性检出率分别为57.33%和61.33%,符合率为85%.NP-ELISA与商品化的HI试剂检测结果没有明显相关性,其效价与攻毒保护也没有相关性. 相似文献
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为建立一种快速、准确地检测H1和H3亚型猪流感病毒（swine influence virus,SIV）的方法,根据H1和H3亚型SIV血凝素（hemagglutinin,HA）基因保守序列,分别设计2对特异性引物和2条TaqMan探针,建立双重实时荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法敏感性高,可检测到最低拷贝数为102拷贝/μL;重复性良好,重复孔Ct值的变异系数均在5%以下;特异性好,除H1和H3亚型SIV外,H4、H5、H7、H9亚型SIV、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒检测均为阴性;在田间样品中成功检出1株H1和1株H3亚型SIV,检出率为1.16%。该方法准确、快速、灵敏、特异,可为H1、H3亚型SIV的快速鉴别检测及流行病学调查提供有效的技术手段。 相似文献
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抗菌肽(antibacterial peptides)是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的多肽,是天然免疫的重要组成部分.为了提高抗菌肽的表达量以及很方便地检测抗菌肽的表达情况,本研究利用口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV) 2A将荧光蛋白dTomato基因和3个串联的MagaininⅡ基因融合到一个开放阅读框中(open reading frame,ORE),融合的基因被置于pPIC9K载体醇氧化酶基因(AOX1)启动子的下游,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC9K-dTomato -2A-3M,将线性化的重组酵母表达载体通过电击法转入毕赤酵母(Pichia pastoris )GS115中,经G418筛选和PCR鉴定得到阳性转化子,然后将其转至摇瓶,在30℃、0.5％甲醇的条件下进行诱导表达,连续诱导3d.SDS-PAGE电泳图谱显示,在31 kD(dTomato)和9.5kD(3M)处有蛋白条带出现,在荧光显微镜下观察酵母表达上清发出红色荧光,对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)抑菌试验结果表明,重组抗菌肽串联的MagaininⅡ具有明显的抑菌效果.结果表明,由2A连接的融合基因(荧光蛋白dTomato和串联的MagaininⅡ)在毕赤酵母中成功的进行了表达,FMDV 2A在其C端剪切多聚蛋白,得到dTomato和串联的MagaininⅡ两个独立而有活性的蛋白,为小分子抗菌肽的表达提供一个高效的检测方法. 相似文献
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为研究低致病性禽流感H9N2病毒感染鸡群的变化,用107.4 EID50/0.1 ml H9N2病毒,0.5ml/只,接种1月龄SPF鸡.结果5日后引起鸡群发病,并引起一些个体发生死亡,剖检发现喉头充血、肺淤血,气囊膜增厚.皮下胶样浸润、出血,腺胃乳头出血,十二指肠出血.肝、脾、肾、肺常见有灰黄色坏死灶.无菌取肺组织做细菌培养时发现在血平板上有灰白色露珠状菌落,挑取菌落做碱性美蓝染色镜检发现两极浓染的球杆状菌;经生化和PCR检验确认该菌属于多杀性巴氏杆菌.低致病性禽流感H9N2病毒感染鸡群可引起巴氏杆菌的内源性感染,从而导致鸡群的高发病率与高死亡率现象. 相似文献
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兔栓尾线虫在家兔体内的发现何宏轩，孙景荣，李瑞莹，常新耀，刘保国（河南职技师院新乡４５３６００）兔栓尾线虫（Ｐａｓｓａｌｕｒｕｓａｍｂｌｇ。ｕｓ）隶属于蛔目（Ａｓｃａｒｉｄａ）尖尾科（（）ｘｙｕｒｉｄａｅ）栓尾属（Ｐａｓｓａｌｕｒｕｓ）。据文献记载，... 相似文献
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