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IBVNP基因的可溶性表达及间接ELISA方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
利用RT-PCR技术将传染性支气管炎病毒M41株的N基因克隆至原核表达载体pET-28a,构建了重组表达载体pET-NP.将其转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后,NP基因获得高效表达.经SDS-PAGE与Western blotting检测证实表达的NP蛋白具有免疫学活性,且以可溶性蛋白形式存在.以此抗原建立了检测传染性支气管炎病毒抗体的酶联免疫吸附试验 (NP-ELISA)方法.敏感性测定证实,当阳性血清1∶500倍稀释时,D450值为0.356,说明仍能检测到IB抗体,该方法比较敏感.特异性试验显示该法与AIV H9、H5、IBD、ND、EDS76的标准阳性血清不发生交叉反应,具有良好的特异性;NP-ELISA和商品化试剂盒对75份血样的阳性检出率分别为57.33%和61.33%,符合率为85%.NP-ELISA与商品化的HI试剂检测结果没有明显相关性,其效价与攻毒保护也没有相关性. 相似文献
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[目的]生产具有生物活性的、可用于临床检测的NP融合蛋白抗原,建立可用于临床检测IB抗体诊断的试剂盒。[方法]利用RT-PCR技术扩增传染性支气管炎病毒M41株的NP基因,将之克隆并重组于原核表达载体pET-28a,经PCR、酶切鉴定及序列分析构建重组表达载体pET-NP,研究NP基因在大肠杆菌中的可溶性表达。[结果]将重组载体pET-NP转化表达菌BL21,获得阳性重组菌pET-NP-BL。阳性重组子经IPTG诱导后,目的基因NP获得了高效表达。表达产物经过SDS-PAGE与Western blot检测表明,NP分子量约为49 kD,且以可溶性蛋白形式存在;表达产物可与特异性传染性支气管炎病毒抗血清发生免疫反应。表达产物可以用作检测IB抗体的抗原。[结论]该融合蛋白可用于生产检测IB的诊断试剂,生物安全性高,生产方便。但尚需建立适当的检测方法,进一步研究其实际诊断价值。同时也可以研制新型IB重组亚单位疫苗,进一步研究其刺激动物机体产生的细胞与体液免疫,深入研究新功能,筛选新的抗原表位,为生产新型IB基因工程疫苗奠定基础。 相似文献
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<正>近年来,鸡的肾脏疾病发生越来越频繁,且危害越来越大,已成为鸡病中不可忽视的疾病,尤其在当今养鸡成本不断升高,市场价格低迷的双重压力下,严重影响了养鸡生产,给养殖户造成极大的经济损失。鉴于此,为了更好减少肾肿的发生,笔者结合生产实际问题,主要从疾病、营养及中毒等方面对肾肿综合征的原因进行分析,为广大养殖户提供指导。 相似文献
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禽用基因疫苗的研究进展 总被引：1，自引：0，他引：1
自从养禽业进入规模化养殖以来,疫苗的应用一直是防治各种传染病的重要手段。从第一代全毒减活疫苗的普及到第二代基因工程亚单位疫苗的推广,疫苗给养禽业带来了一个又一个春天。然而,目前困扰养禽业的疾病越来越多越严重,尤其是抗原的突变,不同种属间的交叉感染以及新型传染病 相似文献
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【研究目的】建立可在临床上检测鸡传染性支气管炎抗体的检测IBV抗体的间接ELISA方法;【方法】以表达的重组IBVNP蛋白为包被抗原,将之包被于聚苯乙烯酶标板上,以封闭液进行封闭,然后加待检血清在37℃作用1h,洗涤后加酶标兔抗鸡IgG抗体,在37℃作用1h,加底物显色,终止反应后测定OD值;【结果】抗原包被浓度为1.45μg/ml,待检血清最佳稀释度为1:40,酶标二抗最佳工作浓度为1:1000,确定阳性判定标准为OD450≥0.314。NP-ELISA与AIVH9、H5、H7、IBD、ND、EDS76的标准阳性血清不发生交叉反应,具有良好的特异性;【结论】NP-ELISA具有特异性强、灵敏度高、重复性好、方便快速的特点,可用于临床IB抗体的检测。 相似文献
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基因枪免疫技术研究综述 总被引：1，自引：0，他引：1
DNA疫苗作为第三代疫苗，在人类防治疾病传染方面起到了重要作用，而基因枪的发明，为DNA疫苗的应用开辟了新的篇章。本文对基因枪的使用方法及其免疫机理和优点进行了综述。 相似文献
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禽白血病（Avianleucosis）是由反转录病毒科（Retroviridae）禽白血病／N瘤病毒群病毒（Avianleukosis／sarcomavirus,ALV）引起的以造血细胞恶性增生为主的多种肿瘤性疾病的总称。根据临床症状可分为淋巴细胞性白血病（Lymphoid Leukosis,LL）、成红细胞性白血病（Erythroblatosb）、 相似文献
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