犬细小病毒北京分离株VP2基因的表达与抗原性分析     

曾妮  李刚  朱鸿飞  侯绍华  史利军 《中国畜牧兽医》2010,37(4):185-186

本研究基于犬细小病毒(canine parvovirus, CPV) VP2基因序列设计引物,利用PCR技术扩增该基因。扩增的VP2基因连入表达载体pET-32a(＋),经PCR及双酶切鉴定基因连入正确。重组表达载体转入大肠杆菌后,经IPTG诱导,SDS-PAGE及Western blotting分析表明有特异蛋白的表达,分子质量大小为87 ku。将表达的蛋白包被酶标板后用抗犬细小病毒单抗与其反应,表明表达的VP2蛋白可以与相应抗体特异结合。  相似文献   

血常规检查在犬猫疾病诊断中的应用     

张华  侯绍华 《中国动物检疫》2009,26(3):55-56

血常规检查主要包括红细胞计数、血红蛋白含量测定、白细胞计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数以及血小板计数等。机体贫血时,因循环血液中红细胞的量发生改变,可导致红细胞计数、红细胞压积和血红蛋白含量等指标下降,临床上可据此对不同贫血类型进行初步诊断;白细胞检查的结果可为临床兽医提示犬猫的易感性、侵入微生物的毒性、疾病过程的性质与严重性,个体的全身反应以及疾病过程的长短及转归的可能性,对白细胞总数、白细胞的分类计数及形态学变化检查的结果分析得当,可为疾病的诊断、疗效的观察及预后的判断提供重要参考。  相似文献   

鸭大肠杆菌病的诊断   总被引：1，自引：0，他引：1  

裘孝良赵志军  侯绍华沈海娥 郝勤宗 《河北畜牧兽医》2003,19(5):30-31

  相似文献   

新型鸭呼肠孤病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用     

张博  陈立功  武华  阴雅洁  孟利佳  郭康康  侯绍华  董世山 《河北农业大学学报》2020,43(5):80-84

  相似文献   

犬粪肠球菌的分离鉴定及耐药性分析     

王俊书  徐进强  金红岩  封家旺  侯绍华 《黑龙江畜牧兽医》2019,(2)

为了鉴定从拉萨市病犬的粪便中分离出的一株细菌的种属及耐药性,试验采用了革兰氏染色、生化鉴定、16S rRNA PCR扩增和序列比对及药敏试验的方法对该菌株进行了研究。结果表明:该分离菌株为革兰氏阳性菌,经16S rRNA PCR鉴定为粪肠球菌,仅对多黏菌素B和利奈唑胺表现高度敏感,对其他28种抗生素均表现耐药。说明从犬中分离出的粪肠球菌对多种抗生素都具有极高的耐药性。  相似文献   

不同类型CpG基序对细粒棘球蚴Eg95抗原的免疫增强作用研究     

董瑞凯  郭晓宇  袁维峰  贾红  鑫婷  侯绍华  朱鸿飞 《中国畜牧兽医》2016,43(10):2716-2723

为探究不同类型CpG基序对细粒棘球蚴（Echinococus granulosus）Eg95抗原的免疫增强作用,将pET-32a-3Eg95重组大肠杆菌,经IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白pET-32a-3Eg95。将重组蛋白分别与常规佐剂Quli-A、pUC18-CpG和CpG ODN混合制备基因工程亚单位疫苗样品,免疫小鼠。通过间接ELISA方法检测抗体水平,通过实时荧光定量PCR方法测定体外刺激试验后细胞因子的相对表达量,检测不同佐剂在体液免疫和细胞免疫方面对Eg95抗原免疫效果的增强作用。结果显示,诱导表达重组蛋白的大小约为56 ku,与理论值相符,用羊细粒棘球蚴阳性血清检测有特异性条带;pUC18-CpG组和CpG ODN组小鼠免疫后14、28、42 d的抗体平均水平（D_{450 nm}）分别为3.10、3.03、3.22和2.98、3.12、3.27,与Quli-A组抗体平均水平相比均差异显著（P<0.05）;CpG ODN组血清中抗体平均水平略高于pUC18-CpG组,但差异不显著（P>0.05）。重组蛋白刺激后pUC18-CpG组与CpG ODN组IFN-β、IFN-γ和TNF-α的相对表达量分别为6.88、2.35、6.28和5.03、2.85、7.07,与Quli-A组相比差异均显著（P<0.05）。因此相对于常规佐剂Quli-A,pUC18-CpG和CpG ODN在体液免疫和细胞免疫方面对Eg95抗原都有显著的免疫增强作用,CpG ODN的免疫增强作用略优于pUC18-CpG,二者均可作为免疫佐剂,增强现有包虫病基因工程疫苗抗原的免疫效果。  相似文献   

非洲猪瘟病毒p72蛋白杆状病毒表达系统的构建及其抗原性分析     

侯绍华  柏丽华  郭晓宇  贾红  姜一曈  朱鸿飞 《中国预防兽医学报》2012,34(1):33-36

为研究真核表达非洲猪瘟病毒(ASFV)主要结构蛋白p72,本研究从含ASFV p72基因全序列的重组质粒pGEX-6p-p72中扩增出1 941 bp的p72全长基因,将其插入于pFastBac HTa杆状病毒载体中,构建了重组质粒pFastBac HTa-p72,转化至感受态细胞DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-p72。再将其转染至sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。Western blot和夹心法ELISA分析表明ASFV p72基因在昆虫细胞sf9中获得了正确表达,重组p72蛋白可以被特异性抗ASFV血清、p72单克隆抗体识别,表明该蛋白特异性强、活性稳定,具有良好的抗原性。为进一步研究p72蛋白的结构、功能和免疫学特性奠定基础。  相似文献   

新型鸭呼肠孤病毒分离鉴定及其σC基因序列分析     

张薇  武华  阴雅洁  李松励  侯绍华 《中国畜牧兽医》2022,49(9):3520-3529

【目的】 了解并掌握新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus,NDRV）流行特点及生物学特性,为NDRV的防治提供理论基础和技术支持。【方法】 采集河北某鸭场疑似发生鸭呼肠孤病毒感染的组织,无菌处理后接种SPF鸡胚分离病毒,收获第3代尿囊液进行血凝试验,通过PCR、透射电镜观察、间接免疫荧光法（IFA）鉴定病毒,对分离得到的病毒进行体外细胞培养和动物回归试验,并采用Mega 7.0对其σC基因进行遗传进化分析。【结果】 分离得到的病毒不能凝集鸡红细胞,可致死鸡胚,死亡鸡胚出血、充血严重;经PCR鉴定,病毒呈NDRV阳性,其他病原（禽呼肠孤病毒、鸭病毒性肝炎、鸭坦布苏病毒、鸭瘟病毒、禽腺病毒血清4型）均呈阴性,将分离得到的病毒命名为BD/CHN/2020株;病毒纯化后,经电镜观察可见直径为60~80 nm、无囊膜的球形病毒粒子,该毒株可在BHK和LMH细胞上稳定增殖并产生细胞融合的细胞病变效应（CPE）;IFA结果显示,BD/CHN/2020株接种BHK细胞后在激光共聚焦显微镜下观察可见特异性绿色荧光;BD/CHN/2020株经皮下接种后,发病鸭出现精神沉郁、排白色稀粪等临床症状,剖检可见脾脏出血、肿大、有白色坏死灶等病理变化;序列比对发现,BD/CHN/2020株与NDRV毒株（TH11、091等毒株）在同一分支,与NDRV SY株核苷酸和氨基酸序列相似性最高,均为99.7%,属于NDRV。与灭活疫苗TH11株（KC493571.1）和弱毒疫苗JS01-105P株（V202168）相比,BD/CHN/2020株第93、120、132、158、253、298位氨基酸处发生了位点突变。【结论】 成功分离得到1株NDRV BD/CHN/2020株,分离毒株对北京鸭有较强的致病性,与国内疫苗株相比,BD/CHN/2020株的σC蛋白已经发生了氨基酸位点的突变,结果可为新型鸭呼肠孤病毒病的流行病学及疫苗研发奠定基础。  相似文献   

新型鸭细小病毒VP3基因克隆与原核表达     

经美  王建昌  崔元  李晓轩  陈萍  王金凤  侯绍华  孙继国  袁万哲 《动物医学进展》2018,(6)

应用PCR方法扩增新型鸭细小病毒(NDPV)VP3基因,将其克隆至原核表达载体pQE1中,获得重组质粒pQE1-VP3。重组质粒pQE1-VP3经优化诱导表达后,通过SDS-PAGE对表达产物进行分析并利用His标签抗体对表达的蛋白进行Western blot鉴定。结果表明,NDPV VP3蛋白在25℃、IPTG浓度为1.0mmol/L经诱导5h,可获得最大诱导表达量,表达蛋白的分子质量约为60ku,主要以不溶性包涵体形式存在。纯化复性后,可获得浓度为5.165 mg/mL及纯度为97%的VP3蛋白。获得的重组菌pQE1-VP3以及高纯度的VP3蛋白,为进一步研究NDPV检测方法和新型疫苗奠定了基础。  相似文献   

抗猪圆环病毒2型病毒样颗粒单克隆抗体的制备及鉴定     

侯强  侯绍华  贾红  姜一曈  鑫婷  李明  陈青  朱鸿飞 《中国预防兽医学报》2018,(4)

为制备能够特异性识别猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP)的单克隆抗体(MAb),本研究利用杆状病毒表达系统分别制备了具有VLP结构的核衣壳蛋白(Cap)和去掉核定位信号肽的tCap蛋白,以前者为免疫原,后者为筛选抗原制备了一株杂交瘤细胞(1F6),通过western blot、间接免疫荧光和透射电镜对其生物学特性进行鉴定。结果显示,1F6 MAb与PCV2 VLP具有良好的特异性反应,同时能够特异性识别天然PCV2和线性结构的Cap蛋白。本研究制备的MAb为PCV2抗原表位的鉴定和PCV2 VLP定量方法的建立提供了工具。  相似文献