11株禽多杀性巴氏杆菌OmpA基因克隆测序及其序列分析     

高明燕  徐步  龚建森  王鑫  范建华  刘学贤 《浙江农业学报》2013,25(5):0

为了解国内禽多杀性巴氏杆菌流行株（Pasteurella multocida,Pm）OmpA基因的变异情况,参考GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌序列设计一对特异性引物,采用PCR方法对11个禽Pm菌株和3个荚膜型参考株（A,B,D）的OmpA基因进行扩增,将各菌株纯化回收的扩增产物与pMD18-T载体连接,筛选阳性克隆进行测序。结果表明：14个菌株的OmpA基因开放阅读框在1 047～1 077 bp之间,其中长度为1 062 bp的有9个菌株;Signal IP 4.0预测表明,信号肽均为N端21个氨基酸残基,成熟蛋白氨基酸残基数量在327～332之间,推测的分子量为35.19～36.35 kD。与GenBank中12个菌株OmpA基因核苷酸序列比对及遗传进化分析发现,核苷酸同源性为85.3%～100%;氨基酸同源性为83.1%～100%;其中C48-1,1010,9003,890920,921012,xj等6个国内禽Pm分离株OmpA序列同源性为100%。由此可见国内禽Pm菌株OmpA基因非常保守。  相似文献   

H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化分析及F株灭活疫苗的免疫效果评价     

童海兵  张小荣  吴艳涛  刘学贤  龚建森  刘秀梵 《中国预防兽医学报》2010,32(12)

为了解H9N2亚型禽流感病毒(AIV)变异情况及评价作为H9亚型F株禽流感灭活疫苗的免疫效果,本研究对2009年～2010年期间从免疫鸡群中分离的9个H9N2亚型AIV株进行血凝素(HA)基因序列测定和分析。这9个病毒株HA基因编码区长度均为1 683 nt,HA基因核苷酸序列同源性为90.7%～98.9%,其推导氨基酸序列同源性为92.2%～98.8%;分离株与F株的HA基因之间的核苷酸序列同源性为91.6%～99.6%,氨基酸序列同源性为92.9%～99.3%;9个分离株与F株均属于Beijing/1/94-like进化分支,但分别属于3个不同的基因亚型。免疫试验结果显示:3周龄SPF鸡接种F株灭活疫苗21 d后,产生的HI抗体效价在log2 9以上;而且免疫鸡对分离株及F株攻毒后的喉头和泄殖腔排毒产生明显的抑制作用。本研究数据表明,F株灭活疫苗可以提供对这些分离株的有效免疫保护。  相似文献   

鸡霍乱口服弱毒菌株的选育及其性能的研究IR1－23菌株的筛选     

刘学贤  丁铲  于圣青  尤兆岚 《中国家禽》1996,(4)

试验以本所历年来分离、收集、保存的多株禽源多杀性巴氏杆菌菌种为选种素材，以各菌株的培养特性、菌落形态、菌落虹彩、生化反应及其在历次传代过程中的稳定性为选种依据，初步筛选出四个菌株，代号为：ＲＩ—２３、ＲＩ—２４、ＲＩ—３９和ＲＩ—６５、经过皮下注射安全量、口服耐受量、近期免疫效力和毒力稳定性比较测试后，筛选出一株既适应鸡口服免疫又具有良好免疫原性的自然弱毒菌株──Ｒ１－２３菌株（５：Ａ）。该菌株的皮下注射安全量为每只５０亿个活菌，一次性口服的耐受量每只在２０００亿个活菌以上，活体继代６代次、人工培养继代５０代次后均未见有毒力增强表现，两次口服免疫后的近期保护率达８０—１００％。  相似文献   

鸡霍乱口服弱毒菌株的选育及其性能的研究：I R1—23菌株的筛选     

刘学贤  丁铲 《中国家禽》1996,(4):23-25

试验以本所历年来分离、收集、保存的多株禽源多杀性巴氏杆菌菌种为选种素材，以各菌株的培养特性、菌落形态、菌落虹彩、生化反应及其在历次传代过程中的稳定性为选种依据，初步筛选出四个菌株，代号为：Ｒ１－２３、Ｒ１－２４、４１－３９和Ｒ１－６５。经过皮下注射安全量、口服耐受量、近期免疫效和毒力稳定性比较测试后，筛选出一株既适应鸡口服免疫又具有良好免疫原性的自然弱毒菌株－Ｒ１－２３菌株（５：Ａ）。该菌株的皮下  相似文献   

雏白痢沙门氏菌琼扩沉淀试验抗原的研制(初报)     

刘学贤 《中国家禽》1988,(2)

用四种不同方法制备的四种雏白痢沙门氏菌琼扩沉淀(AGP)试验抗原,经沉淀抗体效价为64倍的雏白痢沙门氏菌阳性血清滴定后找出,以每毫升含菌量为300亿的菌悬液,经3次反复冻溶、裂解后离心制得的AGP—UTSA抗原的效价最高,可达32倍。其每毫升蛋白质含量为22.5毫克。在4℃保存14个月效价不降。根据最高反应稀释度出现的沉淀线位置应居于抗原孔和抗体孔中间的标准进行试验的结果,确定AGP—UTSA抗原的实际应用单位为8个抗原单位。  相似文献   

应用琼脂沉淀试验清除鸡白痢病的研究：Ⅱ,琼脂沉淀试验检查人工感染和接触..     

刘学贤 《中国家禽》1989,(3):30-33

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间接ELISA检测禽多杀性巴氏杆菌抗体中包被抗原的选择     

龚建森  施祖灏  单艳菊  陆俊贤  葛庆联  刘学贤 《吉林畜牧兽医》2008,29(1):10-12

间接ELISA已在抗体检测中广泛应用,而抗原包被作为间接ELISA中必不可少的一步可直接影响试验的准确性。本试验分别使用超声波裂解抗原、脂多糖蛋白抗原和全茵抗原作为包被抗原,建立相应的检测方法并进行重复性试验。试验证明全菌抗原建立的禽多杀性巴氏杆菌ELISA检测方法在敏感度、特异性、稳定性方面均优于其他两种抗原。  相似文献   

禽蛋中胆固醇含量快速测定方法研究     

章双杰  陆俊贤  高玉时  施祖灏  刘学贤  陈宽维 《中国家禽》2008,30(21)

本文建立了一种禽蛋中胆固醇含量快速测定方法——酶催化分光光度法。禽蛋匀浆液由直接皂化法处理，经酶工作液催化后，照分光光度法于500nm测定其含量。该方法回收率均在90％以上，变异系数均低于似，线性范围20-600mg／mL，具有良好的准确度与精密度。适合禽蛋中胆固醇含量的快速测定。  相似文献   

饲料中使用棉仁粕、菜籽粕对种鸡生产性能的影响     

章双杰  吕晓娟  吴华俊  陆俊贤  刘学贤 《中国家禽》2007,29(17):21-23

对饲料中棉仁粕、菜籽粕不同用量对肉种鸡生产性能的影响进行了研究.结果表明:在8%以下使用量时对鸡群产蛋率、死淘率、孵化性能、后代生长发育、鸡体中毒反应等方面的影响不显著.  相似文献   

采用全菌抗原干燥包被法ELISA检测禽霍乱血清抗体的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

徐步  高明燕  龚建森  吕晓娟  单艳菊  刘学贤 《中国家禽》2009,31(5)

利用戊二醛的偶联作用将禽多杀性巴氏杆菌的全细胞抗原在聚苯乙烯酶标板上进行干燥包被,酶标板以2.5%的戊二醛溶液预处理.通过直接和间接ELISA方阵滴定确定其包被的全菌抗原最适浓度为108个菌/mL.特异性、重复性、稳定性检验,以及初步建立的间接ELISA用于样品检测的结果表明,所创建的禽多杀性巴氏杆菌全菌抗原干燥包被方法能够很好地应用于建立检测禽霍乱血清抗体的ELISA.  相似文献