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【目的】环形泰勒虫（Theileria annulata）可以感染牛B淋巴细胞、树突状细胞和巨噬细胞,并可使被感染细胞发生转化,体外培养时可获得类似肿瘤样细胞的无限增殖能力。本研究通过构建环形泰勒虫转化和非转化宿主细胞抑制性消减文库,筛选环形泰勒虫裂殖体基因及转化细胞与宿主正常细胞之间的差异表达基因。【方法】以环形泰勒虫裂殖体转化细胞和非感染牛外周血单个核细胞（即非转化宿主细胞）为试验材料,提取总RNA和mRNA,反转录合成cDNA;然后分别作为tester和driver,进行抑制性消减杂交（SSH）,构建环形泰勒虫转化和非转化宿主细胞抑制性消减文库;对随机挑取的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR对文库部分差异基因进行验证。【结果】通过对文库454个阳性克隆进行测序,共获得了有效表达序列标签（ESTs）364条,大小主要分布在350-1 200 bp之间;将这些ESTs序列在GenBank中进行BLASTn网上序列比对,其匹配于192条基因序列;其中包括环形泰勒虫序列60条(11条为虫体蛋白酶基因序列、10条为膜蛋白基因序列、7条为假设蛋白基因序列、5条为凋亡相关虫体蛋白基因序列、5条为核糖体蛋白基因序列、4条为细胞周期蛋白基因序列、4条为虫体抗原基因序列和虫体其它基因序列14条)、牛基因序列131条（其中19条为肿瘤相关蛋白基因序列）和1条未知序列;其中已有功能注释的ESTs 285条,再将已知功能的ESTs通过WEGO软件从生物学过程（biological process）、细胞组成（cellular component）和分子功能（molecular function）3个部分进行GO聚类分析,结果表明,宿主细胞差异基因主要集中在细胞、细胞进程、结合、催化、代谢进程、生物调节等功能方面。另外,通过对部分环形泰勒虫裂殖体转化宿主细胞差异基因进行荧光定量PCR分析,结果表明,肿瘤相关基因HCLS1和SENP5在转化宿主细胞中转录水平分别是非感染牛PBMCs(非转化宿主细胞)的2.06和1.32倍。【结论】利用SSH技术,成功构建了环形泰勒虫感染宿主细胞的抑制性消减文库,筛选获得了转化宿主细胞和环形泰勒虫裂殖体的表达基因,并通过荧光定量PCR分析获得了2个可能参与宿主细胞转化的基因,为进步探索环形泰勒虫与宿主细胞相互作用的分子机制奠定了基础。 相似文献
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猪流行性腹泻诊断方法的研究进展 总被引：2，自引：0，他引：2
猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪的一种高度接触性肠道传染病,以水样腹泻、呕吐、脱水和食欲下降为主要特征.由于PED与猪传染性胃肠炎(TGE)的流行特点、临诊症状和病理变化非常相似,故临床确诊较为困难.目前,对该病的诊断方法主要有流行病学诊断、临床及病理诊断、病原学诊断、血清学诊断、分子生物学诊断等方法.随着分子生物学技术的不断发展,以分子生物学诊断法的灵敏度高、特异性强而被人们所重视.笔者主要针对该病的诊断方法就近年来的研究进展进行了综述,为猪流行性腹泻的诊断提供参考. 相似文献
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落叶松是松科落叶松属的落叶乔木,是东北林区的主要森林组成树种。它的天然分布很广,适应性强,是一个寒温带及温带的强阳性树种。它生长速度快,栽培容易,是东北地区的主要造林树种之一。 相似文献
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园林作为绿化的常见手段,不仅是对传统文化、审美情趣的继承发扬,而且能改善城市生态环境,促进建筑人、自然和谐共生。本文先分析了园林景观绿化中植物造景的原则,在此基础上,重点研究了植物造景技术的运用策略,旨在为园林景观绿化实践提供一定参考。 相似文献
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针对黄土高原丘陵山区坡地等高线旋耕作业时土壤耕作侵蚀(土壤由坡高侧向坡低侧迁移)严重及其机理不明等问题,通过理论分析、仿真试验、土槽及实地试验相结合的方法,深入开展山地拖拉机坡地旋耕侵蚀规律研究。首先,构建了H245标准型常用旋耕刀在坡地工况下的扰土体积参数方程,完成了旋耕刀坡地扰土过程的经典力学分析,确定了导致坡地旋耕土壤侵蚀的主要影响因素：坡地角、耕作深度、刀轴转速以及旋耕作业速度;然后,基于EDEM离散元仿真软件研究了单把旋耕刀和旋耕机整机的坡地扰土规律,得出土壤颗粒在旋耕刀侧切刃的动态滑切作用下有水平向后运动的行为,浅层土壤颗粒位移最大,深层土壤颗粒位移最小,并且深层靠近旋耕刀回转中心的土壤颗粒位移最大;土壤的侧向位移方向受旋耕刀正切刃朝向的影响;随着旋耕刀的入土,土壤颗粒在垂直方向的位置呈先变深后变浅的趋势。最后,选取旋耕刀轴转速、旋耕作业速度和坡地角作为试验因素,进行了实地旋耕单因素和正交试验,单因素试验得到土壤水平、侧向位移随着上述3个因素变化的规律;正交试验方差分析得到影响土壤侧向位移的主次因素为坡地角、旋耕刀轴转速、旋耕作业速度,影响土壤水平位移的主次因素为旋耕作业速... 相似文献
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近年来设施农业发展迅速,成为农业种植业中效益较高的产业,随着城镇化的不断发展,西青区农业生产主要以设施农业为主。该研究利用1971—2015年西青区气象观测站冬季(12月至翌年2月)的逐日气象资料,以线性倾向估计计算特征量变化趋势的方法,对该区日光温室农业气象灾害特征进行了分析。结果表明:西青区发生低温灾害以轻度低温灾害为主,近45年间发生低温灾害的次数整体呈减小的趋势;寡照日数和总连阴天次数呈显著上升的趋势,2001—2010年重度连阴天灾害发生次数增长至8次;低温寡照灾害以轻度为主,灾害发生次数总数呈缓慢上升的趋势;大风灾害以轻度灾害为主,且总发生次数呈先减后增的趋势,近5年内发生总的大风灾害次数为82次。 相似文献
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惠民蜜桃是惠民县大年陈乡选出的大果型中熟桃优良品种 ,1 997年 8月通过专家鉴定 ,1 999年通过山东省农作物品种委员会审定。为研究该品种早期丰产栽培技术 ,我们于 1 996～2 0 0 0年进行了本项试验 ,现将结果总结如下。1 试验园的基本情况 试验在惠民县大年陈乡大邢村进行。为沙壤土 ,土层深厚 ,肥沃。 0～ 40 cm土层有机质含量 0 .70 %～ 0 .91 % ,p H值为 7,排灌条件良好。当地年平均气温 1 2 .2℃ ,7月平均气温2 6.3℃ ,1月平均气温 -9.3℃ ,≥ 1 0℃的有效积温 42 82 .6℃ ,年均日照时数 2 64 0 .4小时 ,年均降水量 61 7mm,降水… 相似文献
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草地螟又名黄绿条螟,是多食性大害虫,可取食35科,200余种植物.主要为害甜菜、大豆、向日葵、马铃薯、麻类、蔬菜、药材等多种作物.大发生时禾谷类作物、林木等均受其害.但它最喜取食的植物是灰菜、甜菜和大豆等.草地螟是一种迁飞性害虫.有间歇暴发性、迁移性和毁灭性等特点,属国家农业部高度关注的重大害虫. 相似文献
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