鲤免疫应答相关基因的克隆与鉴定          下载免费PDF全文

丰培金  王文东  李伟  卢强 《中国水产科学》2011,18(5):1179-1188

为研究鲤(Cyprinus carpio L.)白细胞免疫应答相关的分子机理,以体外培养的鲤外周血白细胞为实验材料,用荧光标记的mRNA差异显示(FluoroDDRT-PCR)技术,研究丝裂原(50μg/mL LPS、50μg/mL PHA和50μg/mL ConA)在刺激白细胞4、12和24 h内诱导白细胞免疫应答相关基因的mRNA表达差异,共获得92个差异片段,其中87个片段有再扩增产物,再扩增率为94.6%;将差异片段克隆,经PCR鉴定,获得81个阳性克隆,鉴定率为93.1%;差异片段序列同源性功能分析结果表明,本研究共获得3个免疫应答相关的cDNA克隆,它们分别编码鲤的蛋白酶体激活因子PA28α亚基、翻译延伸因子(EF-1α)和基质金属蛋白酶13(Mmp13)部分序列,为进一步研究这些差异表达基因在鱼类免疫中的作用机制奠定了基础。  相似文献   

鲤吉陶单极虫免疫原性的研究     

杨振国  陶增思  卢强  周玉  汪建国  徐广宏  刘子  李德昌 《中国兽医学报》2002,22(2):143-145

以鲤吉陶单极虫孢子的可溶性抗原 ,采用 B淋巴细胞杂交瘤融合技术制备了 4A8、6 B8、7B93株杂交瘤细胞 ,并用该抗原免疫新西兰白兔制备了高免血清。通过对虫体进行抗原检测、定位和 Western- blot试验 ,结果发现 :4A8、6 B8、7B9和多抗经间接 EL ISA可检出抗原的最低质量浓度分别为 0 .14、0 .2 0、0 .32和 0 .86 mg/ L;IFA定位显示 ,单、多抗检出的抗原都定位于虫壁 ,其中 4A8的抗原主要位于虫体后部 (胚核附近 ) ,6 B8和 7B9的抗原主要位于虫体前部 (极囊附近 )和极丝 ;Western- blot试验表明 ,4A8结合的抗原相对分子质量为 72 0 0 0 ,多抗结合的抗原相对分子质量分别为 5 80 0 0、70 0 0 0、880 0 0 ,3株单抗和多抗均为抗 T.kitauei的抗体 ,4A8具有明显的种、期特异性 ;自然感染该虫的鲤鱼血清中查不到循环抗体。  相似文献   

旋毛虫新生幼虫差减cDNA文库的构建及其步筛选   总被引：9，自引：6，他引：3  

刘明远  黎诚耀  吴秀萍  J F Fabien  付宝权  C Trap  卢强  张西臣  P Boireau 《中国兽医学报》2001,21(4):355-358

利用差减杂交（减法杂交，subtractive hybridization)技术，以旋毛虫新生幼虫（newborn larvae,NBL)的cDNA作为试验方（tester)，以肌幼虫＋成虫的cDNA作为驱动方（driver)，制备新生幼虫差减cDNA,利用T载体构建NBL差减cDNA文库，获克隆株90个，以试验方的差减cDNA第2次PCR产物＋未差减cDNA为试验方探针，以驱动方的差减cDNA第2次PCR产物＋未差减cDNA为驱动方探针，在NBL差减cDNA文库中初筛NBL的期特异性克隆，获初筛克隆24个。这些初筛斯异性克隆进一步用Southern blot确认鉴定，获直阳性期特异性克隆2个（NBL SSC1，NBL SSC2）.DNASIS以及Blaster的分析结果显示，这2个克隆为旋毛虫的2个新基因，其中NBL SSC1编码糖蛋白，NBL SSC2编码丝氨本蛋白酶，本试验为旋毛虫期特异性基困全长序列的调取，分析，鉴定以及强保护性抗原基因的筛选奠定了基础。  相似文献   

鲤鱼白细胞介素10基因组DNA克隆及序列分析     

冯祥汝  陈义龙  孙真  贾生美  王文东  张俊辉  杨振国  卢强 《中国畜牧兽医》2013,40(4):65-68

为获得鲤鱼白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)全长基因组序列,本研究利用鲤鱼IL-10全长cDNA序列(GenBank登录号:JX524550),通过在两端非编码区设计引物,以提取的鲤鱼脾脏基因组为模板,使用PCR方法成功获得鲤鱼IL-10全长基因组序列。鲤鱼IL-10基因组全长2176 bp,GenBank登录号为JX524551。将所获得的序列与其他物种IL-10基因组序列相比,结果发现都含有5个外显子,4个内含子,外显子在进化上相对保守,剪切位点都符合"gt......ag"规则;序列包含540 bp的开放阅读框,编码179个氨基酸,有2段典型的IL-10氨基酸信号基序。  相似文献   

旋毛虫新生幼虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ基因家族的筛选和分析   总被引：2，自引：1，他引：1  

李莲瑞  吴秀萍  付宝权  卢强  王学林  刘明远 《吉林农业大学学报》2009,31(2)

利用旋毛虫新生幼虫期特异性基因N5cDNA作为探针,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行筛选,并将阳性克隆全部送测序公司测序.对测序结果进行序列分析后,根据信号肽不同分为15种基因.NCBI BLAST 检索表明,其中有13种基因均为旋毛虫未知基因序列,并且氨基酸序列最前面均包含有1个信号肽,属于分泌性蛋白.InterProSean检索表明,15种氨基酸序列均编码脱氧核糖核酸酶Ⅱ(DNaseⅡ),均含有DNase Ⅱ的保守序列.通过互联网将编码蛋白序列输入CLUSTAL W数据库,检索结果表明,这些编码的脱氧核糖核酸酶Ⅱ蛋白质同源性高达85%～98%.  相似文献   

维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA的克隆及原核表达     

翟新新  温振才  沈雪飞  孙真  贾生美  张俊辉  王文东  杨振国  卢强 《中国畜牧兽医》2014,41(7):40-43

本试验旨在利用大肠杆菌BL21（DE3）表达维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性。根据GenBank公布的序列设计1对引物,经PCR扩增获得flaA基因的完整开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-30a,转入大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导、表达和纯化。SDS-PAGE结果显示重组目的蛋白在大肠杆菌成功表达,约在38 ku处可见清晰的表达产物,诱导产物大小与理论值相符。经Western blotting检测,结果显示表达的重组蛋白可与特异性血清抗体和His-tag抗体发生免疫反应。因此,本试验成功表达了维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,为进一步研究其生物学功能及免疫佐剂作用奠定了基础。  相似文献   

全球1亿人没饭吃，食品浪费却非常严重     

卢强 《山西农业:致富科技版》2008,(8)

本刊讯 许多国家或多或少地感受到了通货膨胀的压力,其中尤以粮价和油价的疯涨为甚。 世界银行的报告称,目前全球有1亿人面临严重的粮荒。国际机构的研究报告称生物燃料当是“罪魁祸首”。  相似文献   

天然牧草青贮添加剂研究进展     

贾玉山  于浩然  都帅  王伟  卢强  孙林 《草地学报》2018,26(3):533-538

青贮添加剂能够改善天然牧草青贮品质,降低营养成分损失,提高青贮的成功率、牧草的供给水平及家畜的采食量,进一步满足反刍动物的营养需要,解决国内春冬季饲料缺乏和营养不足问题,缓解放牧与牧草生长季饲草供应不足之间的矛盾。本文综述了国内外天然牧草青贮添加剂的种类、效果及应用等方面的研究,总结了青贮添加剂对天然牧草青贮饲料营养品质和发酵品质的影响,展望了天然牧草青贮添加剂今后的发展方向,以期为调制优质天然牧草青贮饲料及天然牧草可持续利用提供可借鉴的理论依据与实践参考。  相似文献   

牛传染性鼻气管炎病毒截短gB基因原核表达与间接ELISA诊断方法建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

李伟  孟日增  石建平  何江帅  赵晓  卢强 《中国畜牧兽医》2010,37(2):83-86

用DNAstar-Protean分析牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白的亲水性、抗原性和表面展示概率,据IBRVgB全基因序列设计引物,PCR扩增编码385-550位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向连接到pET-28b载体上,转化表达菌DE3并诱导表达。经SDS-PAGE分析,获得大小约为21.4 ku的目的蛋白,与预测值相符。纯化后的蛋白浓度约为2.0 mg/mL,纯度为95.27%。间接ELISA及Western blotting证明,表达的目的蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原建立的间接ELISA诊断方法,确定的抗原包被量为50μg/mL,血清的最佳稀释倍数为50。与进口IBRV全毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性为92.3%、敏感性为93.8%、符合率为93.3%;试验结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性。  相似文献   

嗜水气单胞菌的随机扩增多态DNA分型   总被引：1，自引：0，他引：1  

卢强  任瑞文  胡岩  王文东  郑伟 《中国兽医学报》2002,22(1):34-36

用 4 5条随机引物对不同来源的 9株嗜水气单胞菌进行了 DNA指纹分析 ,其中 10条引物呈现良好的多态性和稳定性。建立的随机扩增多态 DNA(RAPD)反应的最佳条件 :模板 DNA 2 0 ng,随机引物 0 .8μm ol/ L ,d NTP 15 0μmol/ L,Mg2 3.5 mm ol/ L,Taq酶 2 .0 U;95℃预变性 5 min,94℃变性 6 0 s,36℃退火 70 s,72℃延伸 12 0 s,4 0个循环。初步建立了嗜水气单胞菌的 RAPD指纹图谱 ,分析了 9株嗜水气单胞菌之间的遗传距离。据此将 9株菌归为 3个组 ,为该菌的分型提供了新的方法。  相似文献