鲤鱼白细胞介素10(IL-10)基因cDNA克隆及序列分析     

冯祥汝  陈义龙  赵晓  王文东  张俊辉  杨振国  孙真  贾生美  卢强 《安徽农业科学》2012,40(22):11314-11316,11319

[目的]获取鲤鱼全长IL-10(interleukin 10)cDNA,并对其序列进行分析。[方法]利用DD-RTPCR(differential display RT-PCR)方法获得差异表达IL-10 cDNA片段,以地高辛标记做为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,克隆鲤鱼IL-10全长cDNA,并对该序列进行序列分析和同源性比较。[结果]鲤鱼全长IL-10 cDNA共1 117 bp,包含55 bp的5'端非编码区,一个540 bp的编码179个氨基酸的开放阅读框及522 bp的3'端非编码区,其中,3'非编码区包含3个mRNA不稳定基序"ATTTA";该蛋白序列具有IL-10家族的典型序列特征;序列同源性比较表明,所获得的序列与GenBank上登录的鲤鱼IL-10基因同源性为89.1%。[结论]该试验为进一步研究IL-10在体内的表达方式、功能特点、调控机理及其在炎症反应和免疫应答中的作用机制奠定了基础。  相似文献   

高山瓢儿白安全高效栽培技术     

罗云米  付丽  刘吉振  刘勇  刘玉英  卢强 《西南园艺》2011,5(4):23-24

为优化高山蔬菜品种结构，加快高山蔬菜产业发展，在2009—2010年进行了瓢儿白的品种引进及栽培技术的优化集成与示范。文章从选择地块、选用良种、整地施肥、播种育苗、适时定植、田间管理、病虫防治、采收8个方面总结介绍了高山地区瓢儿白的安全高效栽培技术。  相似文献   

嗜水气单胞菌Aer毒素的研究进展   总被引：6，自引：0，他引：6  

李莲瑞  罗红斌  卢强  刘明远 《塔里木大学学报》2004,16(3):46-51

嗜水气单胞菌是革兰氏阴性杆菌，弧菌科气单胞菌属，可引起软体动物、淡水鱼类、两栖类、爬行类、鸟类及哺乳动物等多种动物全身性败血症或局部感染，并常致动物死亡。嗜水气单胞菌对人也有致病性，可引起人的急性胃肠炎、败血症及伤口感染、中耳炎、腹膜炎等。近年来，该病原菌对水产养殖动物的危害尤为严重，已成为养殖甲鱼、鲤鱼、鳗鱼、罗非鱼、河蟹、鲶鱼、牛蛙等的常见病，又因为是  相似文献   

嗜水气单胞菌重组Aer毒素的纯化和抗原性分析     

李莲瑞 卢强刘明远  付宝权孙树民郭恒  崔国祯 《云南农业大学学报(自然科学版)》2005,20(5):710-713,719

对原核表达的重组嗜水气单胞菌Aer毒素进行初步纯化,比较了它与天然Aer毒素的抗原性,为建立检测该毒素的免疫学方法奠定了基础。将原核表达的重组Aer毒素经SDS-PAGE后,切下目的蛋白,利用电洗脱法将蛋白洗脱出来,后经透析、PEG8000浓缩、定量,对獭兔进行免疫,采集血清,提纯IgG,在W estern b lotting试验中可与天然Aer毒素起反应,说明,体外表达的重组Aer毒素保留了天然Aer毒素所具有的抗原性。同时,将嗜水气单胞菌AHCS02菌接种于兔鲜血平板,30℃、培养15 h后,将具有β-溶血的单菌落于LB液体培养基中培养后,用饱和硫酸铵法提取上清液中的天然Aer毒素,用甲醛脱毒后,以同样免疫方法免疫獭兔,免疫结束后,采集血清提取IgG,在W estern b lotting试验中,可以检测到重组Aer毒素。试验说明:原核表达的重组Aer毒素和天然Aer毒素诱导獭兔产生的血清IgG抗体可以互相识别重组Aer毒素和天然Aer毒素,重组Aer毒素和天然Aer毒素有相似的抗原性。  相似文献   

旋毛虫新生幼虫期特异性基因N10的表达及鉴定     

高长玲  刘明远  郭恒  孙树民  付宝权  崔国祯  卢强  陈启军  P.Boireau 《中国兽医学报》2006,26(3):284-287

根据旋毛虫新生幼虫期特异性基因pBK—CMV—N10序列设计引物，利用PCR技术将基因N10的信号肤去除后，用T／A法克隆到pMD-18T载体，转化至大肠杆菌NovaBlue，经鉴定及序列测定，结果显示成功克隆到N10基因。将重组质粒pMD-18T—N10进行酶切后连接到原核表述载体pET-28a中，重组质粒经鉴定后转化大肠杆菌BL21star（DES），用IPTG诱导表达出与理论相符的融合蛋白，相对分子质量为38700，诱导4h的表达量占菌体总蛋白量的15％。从N10重组蛋白提取可溶性融合蛋白，对其生物学特性初步鉴定结果表明，具有类似脱氧核糖核酸酶Ⅱ的活性。  相似文献   

抗菌肽Shiva-1基因的人工合成与克隆   总被引：6，自引：1，他引：5  

卢强  刘维全  江禹 《中国兽医学报》2000,20(2):160-162

参照抗菌肽Ｓｈｉｖａ－１的氮基酸序列，兼顾鱼类、昆虫和大肠杆菌偏爱的密码子，设计了Ｓｈｉｖａ－１基因序列，加上适宜基因工程操作的酶切位点，人工合成了２条分别为９２ｂｐ和９１ｂｐ的寡聚核苷酸片段。经互补链延伸反应、ＥｃｏＲＩ酶切，将完整的Ｓｈｉｖａ－１基因反向克隆至ｐＵＣ１８载体，经ＰＣＲ检测和序列分析证明，已正确克隆了抗菌肽Ｓｈｉｖａ－１基因。  相似文献   

论钻孔灌注桩施工缺陷及处理措施     

卢强 《技术与市场》2009,(8):15-16

钻孔桩基础施工简便,在公路桥梁基础工程中得了广泛应用,但施工中易出现质量缺陷。本文对桥梁工程施工中出现的钻孔桩施工缺陷进行了分析,并结合施工实际介绍了一些钻孔桩质量缺陷的处理方法。  相似文献   

地震成因环境污染及其防治对策探讨——以汶川8.0级特大地震为例     

李运彩  张松林  赵国庆  陈粉丽  王红  刘在平  卢强  张豪  王旭 《河北农业科学》2009,13(3)

通过深入分析震后灾区环境污染状况,提出了相应的环境污染防治对策.  相似文献   

鲤外周血白细胞蛋白酶体激活因子PA28β全长cDNA的克隆、鉴定及其差异表达分析          下载免费PDF全文

付保忠  卢强  谭业平  孙晓义  李伟  刘相叶  邓洪宽 《水产学报》2008,32(6):831-837

采用基因文库筛选方法克隆了鲤鱼外周血白细胞蛋白酶体激活因子PA28βcDNA，对其序列进行了分析，同时利用半定量反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测了不同外界因子刺激下鲤鱼外周血白细胞PA28β的表达情况。结果显示，用DD-RTPCR的方法获得差异显示片段A18，经地高辛标记作为探针对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选，从0.8×104个重组噬菌体中，经过两轮筛选获得阳性克隆。序列分析表明，该阳性克隆长1175bp,含有一个大小为735bp编码244个氨基酸的完整开放阅读框，为编码鲤鱼蛋白酶体激活因子PA28β的全长cDNA。系统发生分析其与已报道的斑马鱼蛋白酶体激活因子PA28β亲缘关系最近，基因序列的同源性达95﹪。分离培养鲤鱼外周血白细胞，在不同条件下经PHA和ConA刺激后，利用Trizol提取总RNA，根据得到的PA28β全长cDNA序列和鲤鱼β-actin序列设计引物，利用RT-PCR方法对鲤鱼外周血白细胞PA28β进行差异表达分析，结果表明：经有丝分裂原刺激后前期（4h）白细胞中PA28β的表达量明显增大，但随着时间推移(12h、24h)表达增加量有所降低，并不随时间的延长而持续增加。在刺激的和正常的白细胞中PA28β表达趋势都成抛物线图，不同的是经刺激的比正常的PA28β的表达量提前达到峰值。本文属国内外首次报道鲤蛋白酶体激活因子PA28β的全长cDNA序列，鲤鱼PA28β的cDNA序列GenBank注册号为EU255233，并对其进行差异表达分析，这些结果可为PA28β在鱼类免疫应答中的作用研究提供参考和依据。  相似文献   

鲤鱼外周血白细胞的分离和体外培养   总被引：6，自引：0，他引：6  

丰培金  卢强  李莲瑞  张俊辉 《中国兽医学报》2004,24(4):369-371

通过调整淋巴细胞分离液中泛影葡胺 (Urografin)的用量 ,发现采用比重为 1.0 85的分离液可将鲤鱼外周血中的白细胞有效地分离出来 ,每毫升外周血可分离到的白细胞的数量平均为 1.71× 10 6 个。经优化培养条件 ,分离得到的鲤外周血白细胞体外分别培养 4、12和 2 4 h,成活率分别为 92 .6 %、90 .2 %和 87.6 % ,加入终质量浓度 5 0 m g/ L的刀豆球蛋白 (Con A)同外周血白细胞共同孵育 4 h和 2 4 h,结果白细胞的成活率为 99.1%和 89.6 % ;将 5 0 mg/ L 脂多糖 (L PS)和 5 0 mg/ L 植物血凝素 (PHA)与白细胞共同孵育 4 h和 12 h,白细胞成活率为 98.1%和 97.7%。本试验成功地建立了鲤外周血白细胞的分离技术和鲤白细胞体外短期培养体系  相似文献