应用巢氏PCR方法快速检测猪鼻拭子样品中产毒素多杀性巴氏杆菌     

汤细彪  吴斌  刘国平  杨明柳  罗勇  卢顺  陈焕春 《畜牧兽医学报》2007,38(10):1083-1087

根据产毒素多杀性巴氏杆菌的toxA基因序列,设计了2对特异性引物,扩增的片段大小分别为864和447 bp,从而建立了一种能直接从猪鼻拭子中快速检测产毒素多杀性巴氏杆菌的巢氏PCR方法。该方法能检出26CFU菌量以上的模板DNA,且不能从猪的其它7种常见病原菌扩增到特异性条带。通过对5个不同地区阳性猪群中采集的146份临床鼻拭子样品进行巢氏PCR检测和细菌分离鉴定,结果2种方法同时为阳性的样品有44份,同时为阴性的样品有97份,另有5份样品只有巢氏PCR检测为阳性,巢氏PCR检测与细菌分离鉴定的符合率为96.58%。试验表明:巢氏PCR方法能快速、灵敏地从猪鼻拭子样品中检出产毒素多杀性巴氏杆菌,适合临床进行大规模病原学检测,具有良好的应用前景。  相似文献   

浅谈畜禽养殖污染治理四原则及对目前治理措施的评估     

尹建文  高其双  郭俊武  卢顺  李忠良  周莉  彭霞  陈志华  向敏  占才耀 《上海畜牧兽医通讯》2013,(6):72-73

本文从畜禽养殖污染特点论述了治理畜禽养殖污染必须遵循的四条原则,从分析现有智力技术的优缺点论述了治理畜禽养殖污染应选择的途径,以期为我国彻底解决养殖污染问题,促进养殖业进一步深入发展提供参考。  相似文献   

猪水肿毒素单抗竞争ELISA试剂盒的研制及应用     

张建民  吴斌  赵战勤  卢顺  何华  向敏  李利娅  张福涛  陈焕春 《畜牧兽医学报》2009,40(7)

本研究旨在建立猪水肿毒素抗体的快速检测方法.以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达产物作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单抗,并利用表达蛋白和猪水肿毒素A亚基单抗酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪水肿毒索抗体.经过研究确定抗原包被浓度为0.32 btg·mL-1,待检血清最佳稀释度为1:2,酶标单抗工作浓度为1:3 200,血清抑制率大于40 %为阳性.应用单抗竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时对60份血清进行猪水肿毒素抗体检测,竞争ELISA的检出率为33.8%,细胞毒性中和试验检出率为30.9%,两者符合率达88.2 %.试验结果表明,该ELISA方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性好,操作简便.本方法的建立在实验室诊断的标准化、猪水肿病疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有较高的应用价值.  相似文献   

猪支气管败血波氏杆菌菌毛fimD基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立     

何华  裴洁  吴斌  赵战勤  张建民  罗勇  向敏  卢顺 《畜牧兽医学报》2009,40(1)

参照GenBank上支气管败血波氏杆菌的菌毛fimD基因序列（X75811）,设计1对引物,从本实验室分离鉴定的猪源支气管败血波氏杆菌中扩增出fimD编码区1098bp的片段,将其克隆至原核表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行融合表达。SDS-PAGE和Western blot检测证实该表达产物以包涵体形式存在,大小约42ku,与用支气管败血波氏杆菌菌体制备的阳性血清能发生特异性反应。将包涵体变性和复性后包被酶标板建立间接ELISA（fimD-ELISA）,特异性良好。用fimD-ELISA检测临床送检的668份血清,阳性率为30．7％。用该法与微量凝集试验平行检测102份血清,fimD-ELISA的敏感性高于微量凝集试验。  相似文献