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211.
犬瘟热、犬冠状病毒联合RT-PCR检测方法的建立及应用 总被引:21,自引:0,他引:21
用CDV、CCV特异性引物对同一样品中CDV和CCV RNA模板进行联合RT-PCR扩增,并对扩增条件进行了优化。结果同时得到了两条大小与试验设计完全相符的特异性扩增带,且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒、轮状病毒的核酸。敏感性试验表明,该联合PCR能检测出10^-4倍稀释的CDV模板(10^6.6TCID50/0.1mL)和10^-3倍稀释的CCV模板(10^5.9TCID50/0.1mL)。通过对7份临床发病犬病料的检测,其阳性检出率高于电镜负染检查。初步应用表明,此法具有高度敏感、特异、准确、快速等特点,适用于兽医临床对CDV、CCV的检测和鉴别诊断。 相似文献
212.
首次对犬冠状病毒V1野毒株核蛋白(N)基因进行了克隆和序列测定。根据GenBank中报道的CCV Insavc-1株N基因序列,设计了1对特异性引物,对分离的CCV V1野毒株进行了RT—PCR扩增;将扩增得到的阳性PCR片段经纯化后与pGEM—T连接得到重组质粒pTN1,进行核苷酸序列测定,并与GenBank中CCV标准毒株Insavrc—1 N基因进行了比较。结果该基因全长为1146bp,编码382个氨基酸,两者核苷酸的同源性为91.7%;推导的氨基酸序列的同源性为90.2%,显示出较高的保守性。在V1野毒株推导的N蛋白N端156-179位存在一个SRXX富集区,与小鼠肝炎病毒相应区域相同,推测可能是RNA结合区。另外,推导的该蛋白氨基酸序列其疏水性和抗原表位与标准毒株Insavc-1 N蛋白存在一定的差异;在氨基酸组成上,该蛋白丝氨酸和赖氨酸含量高达9.84%,提示该蛋白具有高度螺旋和缠绕的分子结构: 相似文献
213.
犬冠状病毒基因重组抗原间接ELISA检测方法的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以在E、coli高效表达的犬冠状病毒核蛋白为抗原,用辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗犬IgG为二抗,建立了检测犬冠状病毒抗体的间接ELISA方法。经方阵滴定确定出最佳反应条件为lμg/孔纯化的E.coli表达的重组N蛋白抗原包被酶标板,用10%的兔血清进行封闭,以正常E.coli裂解上清液稀释待检血清。结果表明:应用重组N蛋白作为诊断用抗原具有特异性强、稳定性高、成本较低等特点。 相似文献