猪圆环病毒1型ORF2基因的改造及其在大肠杆菌中的表达     

张福良  孙利华  宋长绪 《中国动物检疫》2009,26(6):33-35

根据GenBank中猪圆环病毒1型(PCV1)ORF2基因序列,设计合成了一对引物,对PCV1ORF2基因进行PCR扩增,将扩增出的ORF2基因(702bp)克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒命名为pMD-ORF2。由于ORF2前面有120多个信号肽和序列中有大量的稀有密码子,所以将ORF2进行改造并将改造的ORF2双酶切产物插入原核表达载体pET-32α与pET-41α,得到重组子命名为pET-ORF2-1与pET-ORF2-2。用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE和Westernblot分析,结果表明PCV1-ORF2在pET-32α和pET-41α中获得了高效融合表达,其表达蛋白分子量约为30Kda和45Kda。  相似文献   

猪蓝耳病病毒分离纯化及Nsp2序列分析     

张军杰  龙桃  孙瑞芹  李艳  夏平安  宋长绪 《广东农业科学》2013,40(2)

对广东省几个地区发生疑似PRRSV感染的猪场送检的502份血清进行RT-PCR检测.将检测到的阳性血清接种到Marc-145细胞上并连续传代4～5次,收获出现明显细胞病变(CPE)的样品,利用蚀斑试验克隆纯化PRRSV.根据高致病性PRRSVNsp2基因缺失区的两端保守区设计了1对引物区分经典PRRSV和高致病性PRRSV.研究结果表明,成功分离到12株PRRSV并纯化出2株病毒.从502份血清样品中检测到156份阳性血清,PRRSV感染阳性率达32％,经鉴定均为高致病性PRRSV变异株.对分离毒株的Nsp2基因序列进一步分析,发现此次分离株Nsp2基因与VR-2332株(70.7％～74.6％)的核苷酸同源性较JXA1株(87.1％～100％)偏低;在系统进化树上分离株与JXA1变异株亲缘关系比较近,而与VR-2332株亲缘关系比较远.说明广东省地区普遍存在PRRSV的感染,并且病毒出现了不同程度的变异.  相似文献   

猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白单克隆抗体的制备及鉴定     

元永平  丛丽媛  陈德坤  蒋智勇  张春红  宋长绪 《西北农业学报》2008,17(1):15-19

以纯化复性的猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Cap重组蛋白作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经间接ELISA筛选,获得了3株分泌PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为1C7A4、4F3F5和4G8F7,其染色体平均数为98～103,间接ELISA检测3株细胞培养上清效价分别为1:3125、1:3125、1:15625,小鼠腹水效价分别为1:390000、1:390000、1:1950000.ELISA结果显示,1C7A4、4F3F5和4G87F仅与融合表达的PCV2-Cap蛋白反应,而与PET-32a载体表达的蛋白不反应.相加ELISA结果显示3株单克隆抗体对应两个不同的病毒抗原位点.间接免疫荧光结果显示,1C7A4、4F3F5和4G8F7能与PCV2发生反应,而不与PCV1发生交叉反应.结果表明所获得的3株单抗是PCV2型特异性的,为PCV1和PCV2鉴别诊断方法的建立奠定了基础.  相似文献   

猪渗出性皮炎病原的分离鉴定   总被引：5，自引：0，他引：5  

张曦  杨增岐  宋长绪 《西北农业学报》2008,17(4):38-41

从广东省棠下、增城等地区猪场送检病料中,分离到9株葡萄球菌, 经TH-16S细菌生化编码系统鉴定表明,其中4株松鼠葡萄球菌,3株木糖葡萄球菌,2株猪葡萄球菌.参考Genebank中登录的基因序列,设计合成可区分4种猪葡萄球菌表皮脱落毒素ExhA、ExhB、ExhC、ExhD的引物,并以此引物对2株猪葡萄球菌和其余7株葡萄球菌进行了 PCR检测,结果表明1株为ExhB型,1株为无毒力型,其余7株葡萄球菌均不能产生表皮脱落毒素,用此9株葡萄球菌回归动物后证实,ExhB毒力型的猪葡萄球菌致病力强,很快死亡;无毒力型的猪葡萄球菌无致病力;4株松鼠葡萄球菌都有不同程度的致病性;3株木糖葡萄球菌无致病力,说明猪渗出性皮炎的发生与猪葡萄球菌所产生的表皮脱落毒素有关.  相似文献   

全群普免PRRS活疫苗的效果研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

宋长绪  姚建聪  吴良波  韦官秋  方树河  聂卫星  朱连德 《猪业科学》2006,23(5):31-33

在中国,自从1995年底爆发PRRS,该病毒已在很多省市猪群中流行,成为规模化养猪场繁殖障碍的主要疫病之一。对于该病,很多学者在不同时间都作了一定范围内的流行病学调查,证明该病在不同养猪地区广泛存在。闫之春等人预测在规模化猪场该病的流行率为80％以上。  相似文献   

广东省猪伪狂犬病时间分布和空间分布的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈平洁  余业东  宋长绪  孙彦伟  任裕琪  陈溥言 《华南农业大学学报》2006,27(4):78-81

为了研究猪伪狂犬病（PR）的流行病学,对1998-2004年间广东省PR血清流行的时间和空间分布进行了调查．结果表明：东莞、惠州、深圳、阳江、珠海的PR血清阳性率较高（〉20％）,清远和汕尾地区最少（〈10％）,最高地区是最低地区的3．82倍．有51．7％猪场血清阳性率分布在10％以下．PR血清流行在时间序列有每隔5个月出现1个峰值的可能（P〉0．05）．通过ARIMA模型预测,2005年1月广东省的PR血清阳性率为14．23％,与真实值15．06％符合得较好．时间-空间对应分析表明：2002、2003年为珠江三角洲PR流行的高峰期,粤北在2001年为高发年份;2002、2003年,PR的流行率均以粤东为最低．二维对应分析图概括了原始信息量的83．3％．  相似文献   

华南地区猪圆环病毒3型感染的分子流行病学调查与分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘相聪  申翰钦  张鹏飞  黎嘉豪  刘燕玲  张乐宜  宋长绪 《畜牧与兽医》2018,(6)

为了解猪圆环病毒3型(porcine circovirus 3,PCV3)在我国华南地区的感染情况,从2016年12月到2017年12月期间,从广东、广西、海南、福建、江西和湖南的177家规模化猪场采集1 078份病料,利用PCR技术检测PCV3的流行情况,并对PCV3阳性病料进行全基因组测序分析。结果显示:样品阳性率为29.04%(313/1 078),猪场阳性率为44.63%(79/177);从病料中测得的10株PCV3毒株全基因组核苷酸序列相似性为98.8%~100%,与国内外其他毒株的同源性在98.2%~100%之间;全基因组遗传进化分析显示PCV3遗传进化可以分为PCV3a和PCV3b,其中毒株CHN/HUNAN、CHN/GD-SH和CHN/GD-ZQ属于以美国毒株US/MO2016为代表的PCV3a分支,其余7个毒株属于PCV3b分支。结果表明:PCV3广泛存在于华南地区的猪群中,其基因组在不断进化,对PCV3的流行与致病机理有待进一步研究。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp基因的克隆与原核表达   总被引：1，自引：1，他引：0  

蔡汝健  宋长绪  郝永清  杨鼎  何锦玲 《动物医学进展》2009,30(2)

将猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA依赖性的RNA聚合酶(RdRp)基因进行克隆、表达,并获得纯化重组蛋白,为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp的功能奠定基础.以RdRp基因cDNA为模板,用PCR扩增出RdRp基因片段,应用定向克隆策略将扩增后片段与高效表达载体pET32a(+)重组,阳性克隆重组质粒经酶切及测序鉴定,IPTG诱导高效表达.PCR法扩增出720 bp的片段,酶切及测序鉴定获得正确的重组质粒,在大肠埃希菌LB21中表达得到分子质量约为46 ku的融合蛋白.成功克隆及表达了猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp基因.  相似文献   

广东省猪繁殖与呼吸综合征流行情况的调查和分析     

刘燕玲  王旭荣黄忠 宋长绪 《动物科学与动物医学》2007,24(10):72-73

应用RT-PCR检测方法,对2004年至2006年珠三角、粤北、粤西、粤东等4个地区的293个规模化养猪场采集的2015份病料进行了检测,所检测样品的总阳性率为48.5%,而猪场阳性率为19.4%。其中,以珠三角地区的阳性率最高,其猪场阳性率为57.4%,样品阳性率为22.0%,而粤西地区阳性率最低,猪场阳性率为32.7%,样品阳性率为15.9%。粤北和粤东的阳性率介于珠三角和粤西之间,其猪场阳性率分别为49.1%和51.0%,样品阳性率分别为19.4%和18.9%。说明猪繁殖与呼吸综合征病毒在广东省各个地区的猪场中广泛存在,应加强针对该病毒感染的防控措施。  相似文献   

猪圆环病毒2型GD株ORF2基因重组腺病毒的构建及其表达     

宋长绪  蒋智勇  王贵平  高向阳  赵亚华 《中国预防兽医学报》2005,27(5):348-351

根据PCV2ORF2基因的序列设计两条引物从PCV2的PK15细胞培养物中扩增出ORF2基因(702 bp).将此基因片段克隆入pMD 18-T载体,经酶切、测序鉴定筛选出重组质粒pMD-ORF2.将PCV2 ORF2基因克隆入pAdeasy腺病毒载体系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV中,获得重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-ORF2,将重组质粒与腺病毒骨架载体共转化大肠杆菌BJ5183,通过细菌内同源重组获得重组腺病毒质粒pAdCMV-ORF2,然后用PacⅠ线性化后转染293细胞,在293细胞内包装出重组腺病毒.通过荧光显微镜观察、PCR检测和Western blot检测证明PCV2 ORF2基因在293细胞内获得表达,ORF2多肽具有良好的免疫原性.  相似文献