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【研究目的】探索高质量的旋毛虫(Trichinella spiralis)肌幼虫总RNA提取方法;【方法】利用Trizol试剂采用三种方法提取旋毛虫肌幼虫总RNA。(1)液氮预冷的研钵中研磨新鲜虫体至样品快融化时,加入适量的Trizol,继续研磨至液状后转移到离心管中;(2)A将新分离的虫体放到-20℃预冷的研钵中,在研磨过程中不断地添加液氮以保持虫体冷冻,之后对冷冻状的样品粉末继续操作;B把液氮冻存的新鲜旋毛虫肌幼虫取出,放到-20℃预冷的研钵中重复A的操作;(3)新鲜虫体放入匀浆器中,加适量Trizol,在冰水混合物中研磨20分钟。虫体破碎后按Trizol说明书继续抽提。最后通过凝胶电泳和紫外吸收光度值检测。【结果】用液氮和Trizol结合的方法,使用新鲜样品提取旋毛虫肌幼虫总RNA,在纯度和得率上都较为理想;【结论】使用新鲜的样品,且液氮与裂解液结合,是获得高质量RNA的可行方法。 相似文献
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猪附红细胞体检测方法研究进展 总被引：2，自引：0，他引：2
猪附红细胞体病是由猪附红细胞体寄生在猪红细胞表面而引起的感染性疾病,以高热和急性黄疸性贫血为典型临床症状.有关该病原的分类地位国内外一直不统一.<伯吉氏细菌鉴定手册>第八版将其归属于立克次氏体目无形体科附红细胞体属.依据对各种附红细胞体16S rRNA基因序列的系统进化分析结果,Neimark等[1-2]认为附红细胞体16S rRNA基因序列与支原体属生物16S rRNA基因序列的亲缘关系较近,提议将其划入支原体属.目前,绝大多数英文学术论文已将附红细胞体属归为支原体属.我国学者对流行于国内的病原的遗传学和分子生物学特征尚未进行系统研究,因而仍然沿用附红细胞体的命名. 相似文献
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碘醚柳胺脂质体定向剂是抗肝片吸虫药—碘醚柳胺的一种新剂型,为了探讨其是否对绵羊细胞免疫机能有影响,本试验将8只通过粪检为肝片吸虫病阳性的绵羊分为两组每组4只,试验组以0.3mg·kg~(-1)体重皮下注射碘醚柳胺脂质体定向剂,对照组以3mg·kg~(-1)体重皮下注射碘柳胺注射液,分别于用药前和用药一周后用 E-玫瑰花环形成试验对 T 细胞计数,并对用药前后的数据进行 t 检验。结果为:试验组用 相似文献
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通过对微小隐孢子虫TSP3氨基酸序列进行生物信息学分析设计多肽片段,偶联KLH载体蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA方法检测血清效价并利用特异性亲和层析的方法纯化抗体。以该抗体作为一抗,利用Western blot检测虫体天然蛋白质在体内的表达情况,通过间接免疫荧光方法进行亚细胞定位分析。结果表明:制备的多克隆抗体能够特异性识别虫体天然蛋白,亚细胞定位发现其位于子孢子以及裂殖子的顶端。 相似文献
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猪血凝性脑脊髓炎病毒HE基因的克隆及真核表达 总被引：1，自引：1，他引：0
应用特异性引物,从猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）中扩增出HE蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体,得到重组质粒pTHE。用EcoRⅠ和NotⅠ双酶切pTHE,回收目的基因HE片段并将其定向克隆到pPiCZαA中,构建重组质粒pPiCZαA HE。用BstXⅠ酶切pPICZαA HE使其线性化,并电击转化至感受态毕赤酵母细胞GS115。PCR法鉴定阳性重组子,用1％甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及westem blot分析。结果在酵母菌培养基上清中检测到相对分子量为43kD的重组蛋白,且该重组蛋白可与HEV多克隆抗体发生特异性血清学反应,表明HEV的HE蛋白片段在Pichia Pastoris中获得成功表达。 相似文献
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不同地理株及其杂交株柔嫩艾美耳球虫细胞免疫水平研究 总被引：3，自引：3，他引：0
本文首先培育了5个不同虫株柔嫩艾美耳球虫(Emeria tenella):3个不同地理株吉林株[J]、山东株[S]、黑龙江株[H]和2个杂交株F1(山东株×黑龙江株)、F2(F1×吉林株).将300只AA肉鸡鸡雏随机分成6组,每组50只,12日龄时分别用不同株柔嫩艾美耳球虫进行免疫,首免剂量为1 × 104卵囊.24日龄时攻虫,剂量为1×104卵囊.攻虫后10日龄时翼下静脉采血1 mL检测学液中的CD4 ,CD8 的数量,以此判断柔嫩艾美耳球虫的细胞免疫功能,结果证明:杂交株柔嫩艾美耳球虫CD4 ,CD8 的数量远远高于其它组,F2组更高.各组的CD4 ,CD8 的数量依次为F2＞F1＞S＞H＞J. CD4 ,CD8 的数量的比值也不同.即各组的细胞免疫功能不同,从数值上反应出,F2株细胞免疫水平最高,其次是F1,再次是山东株,黑龙江株和吉林株最低. 相似文献
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本文报道了应用双抗夹心─ＥＬＩＳＡ检测兔粪便中隐孢子虫卵囊抗原方法的建立。试验所用抗体为抗小球隐孢子虫（Ｃ．ｐａｒｖｕｍ）卵囊壁的单克隆抗体，经对２０头份兔粪便样本分别进行抗酸染色和双抗夹心─ＥＬＩＳＡ试验．结果抗酸染色法检出８份有隐孢子虫卵囊，而ＥＬＩＳＡ法除对抗酸染色阳性的８份粪样判为阳性外，还对抗酸染色阴性的１份粪样判为阳性；并不与兔球虫粪便发生类属反应。此外，本试验还在稀释液中加入ＥＤＴＡ，并增加了反应温度，使得试验在抗体包被反应板并封闭完成后３０分钟结束整个检测过程。 相似文献
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化学和生物发光的原理及其在生命科学研究中的应用 总被引：1，自引：0，他引：1
在生命科学研究领域内,化学发光和生物发光在对生物分子的快速敏感检测和对功能活性分子以及细胞的活动规律进行原位跟踪观察上发挥着非常重要的作用。化学发光(Chemiluminescence)是指在生物体外的化学反应体系内,通过特定基团或成分的转化(如氧化还原反应等)使化学能量以光能的形式释放出来,再经特殊的检测系统将反应过程记录下来。生物发光(Bioluminescence)是指生物发光器在细胞或生物体内发生光能释放反应的过程。实际上,很多生物发光反应就是在细胞或生物体内的化学发光反应。在这些反应中,光能的产生方式主要有2种:一种是被激发后产生的光能信号,另一种是发生化学或生物学反应后产生的光能信号。近年来,随着光能检测仪器的不断进步,尤其是仪器灵敏度的提高,化学发光和生物发光系统在生命科学研究领域中的应用不断扩大,在病原或病原成分的检测、分子与分子之间相互作用的分析以及病原或细胞在机体内的动态分布规律的观察等方面都发挥了非常重要的作用。1化学发光的原理及其在生命科学领域中的应用1.1化学发光及其原理在医学和生物检测过程中,应用最多的化学发光体系主要有3类:增强鲁米诺发光体系、吖啶类化合物发光体系[1]和碱性磷酸... 相似文献