RNAi技术及其在动物传染病预防上的作用     

段廷云  陈红英  崔保安 《中国兽医杂志》2008,44(5):51-53

近年研究发现,除体液和细胞两大免疫系统外动物体内还存在着另一种古老的免疫机制.一些短的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)通过结合细胞内相应基凶的mRNA,可以阻止该基因表达,这就是RNA干扰现象(RNA interference,RNAi).RNAi在线虫和果蝇的研究中被发现后,很快发展成为基因功能研究的有力工具.由于RNAi具有超越疫苗和抗病毒药物的诸多优点,它也给许多疾病的防治提供了新思路[1].本文主要就其作用机制和动物病毒性疾病预防的应用研究作一阐述.  相似文献   

板蓝根多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响   总被引：4，自引：0，他引：4  

邱妍  胡元亮  董发明  崔保安  张红英 《中国兽医学报》2008,28(7)

150只14日龄蛋公鸡随机均分成3组,用新城疫传染性支气管炎二联(Newcastle disease-infectious bronchi-tis,ND-IB)弱毒苗点眼滴鼻免疫的同时,2个试验组分别肌肉注射高、低剂量的板蓝根多糖(Isatis root polysaccha-ride,IRPS)溶液,对照组注射生理盐水,每天注射1次,连续注射3次。分别于免疫后7、14、21、28、354、2 d各组随机抽取8只鸡翼下静脉采血,分离血清,用微量法测定新城疫血凝抑制(HI)抗体效价;于免疫后10、20、30、40、50 d每组随机抽取5只鸡心脏采血,分离淋巴细胞,用流式细胞仪双染色法检测CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞含量,并放血致死称取体质量和胸腺、脾脏、法氏囊的质量,计算器官指数。结果表明,板蓝根多糖高、低剂量组的HI抗体效价、CD4+/CD8+比值和免疫器官指数均明显高于对照组;提示板蓝根多糖对新城疫疫苗的免疫效果有明显的增强作用。  相似文献   

鸡胚蛋重比作为评价传染性支气管炎病毒致侏儒化指标的研究     

程亚辉  崔保安  李新生  李双亮  冯利霞  高文明 《中国畜牧兽医》2009,36(1):86-87

在鸡胚上接种鸡传染性支气管病毒（M41、H120、HN99株）后6 d内,每天称量胚体和各自种蛋的重量,计算胚体/种蛋重量的比值（EE值）。EE值与未接种病毒的对照组鸡胚相比,计算出最小感染量,EE指数通过接种过IBV的鸡胚EE值和对照组EE值相比计算出来。结果表明,在接种M41株和HN99株后第4天EE值与对照组差异显著,在接种H120株后第5天EE值与对照组差异显著,可初步判定是被传染性支气管炎病毒感染,这种方法可更快更有效的观察胚体损伤程度,尤其适用于需经传代才能看到矮小化现象的野毒株。  相似文献   

猪IL-2基因的克隆、序列分析及其杆状病毒表达载体的构建   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭小参  崔保安  陈红英  王彦彬  方剑玉  吕晓丽  王东方 《中国兽医学报》2009,29(2)

参照GenBank发表的猪IL-2 cDNA基因序列设计1对引物,将猪脾淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下体外培养27 h后,提取激活淋巴细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆到pGEM-TEasy载体上并测序.测序结果显示,克隆的猪IL-2 cDNA全长为516 bp,开放阅读框(ORF)包含465 bp,编码154个氨基酸,相对分子质量为17 400,等电点为5.27,此cDNA与已报道的猪IL-2同源性为100%.与猫、牛、鸡、犬、鸭、山羊、马、人、家鼠等的IL-2基因进行比较分析,核苷酸同源性分别为83.7%、82.6%、28.2%、80.6%、29.6%、83.4%、81.3%、82.0%和61.5%.将此IL-2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual后获得了重组质粒pFBD-IL2,进而转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用;经抗性及蓝白斑筛选得到了含猪IL-2基因的重组DNA,将其命名为Bacmid-IL2.本试验为进一步在昆虫细胞中表达猪IL-2基因、开发研制新型免疫佐剂奠定了基础.  相似文献   

金银花、山银花绿原酸类提取物体外抗NDV作用研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

王林青张红英  崔保安李文增 李坤陶 《中国农学通报》2011,27(19):277-282

为研究比较价格差异较大的金银花和山银花的体外抗病毒作用,分别提取金银花和山银花绿原酸类活性成分,利用Vero细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应（CPE）,并用MTT法检测细胞活性来评价和比较金银花和山银花绿原酸类提取物体外抑制新城疫病毒（NDV）对细胞的感染作用。结果表明：在安全浓度范围内,金银花和山银花绿原酸类提取物均具有显著的抗病毒作用,体外对NDV分别具有明显的阻断作用、抑制作用和中和作用,且两者之间的抗病毒效果差异不显著。本试验为价格相对便宜的山银花在一定领域部分代替金银花提供了实验依据。  相似文献   

4种多糖对鸡淋巴细胞中IL-4、IFN-γ mRNA表达的影响   总被引：2，自引：0，他引：2  

邱妍  崔保安  胡元亮  董发明  张红英 《江苏农业科学》2009,(2)

为了研究中药多糖增强免疫的作用和分子机理,用Primer Premier软件设计了1对白介素-04（IL-4）引物,1对干扰素-γ（IFN-γ）引物。从多糖辅助ConA刺激的鸡外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT—PCR技术扩增出目的基因片段,并对其进行了酶切鉴定和测序。用荧光定量PCR方法测定黄芪多糖（APS）、板蓝根多糖（IRPS）、山药多糖（CYPS）、牛膝多糖（ARPS）4种多糖对鸡外周血T淋巴细胞IL-4、IFN-γ的mRNA表达的影响。结果表明,合适剂量的APS、IRPS、ARPS和CYPS均能提高淋巴细胞IL-4、IFN-γ的mRNA表达水平,并且APS、IRPS的效果优于ARPS、CYPS,这可能是多糖增强机体免疫的分子机制之一。  相似文献   

板蓝根多糖对PRRSV的体外抗病毒试验     

王学兵  张红英  崔保安  刘蕊  徐端红 《西北农业学报》2009,18(1):198-200

水煮醇沉法从中药板蓝根中提取板蓝根多糖,以其为试验药物,观察在Marc-145单层细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用效果.结果表明,在安全浓度范围内,板蓝根多糖体外对PRRSV具有较好的阻断和抑制作用,其最小阻断浓度为2.094 μg/mL,最小抑制浓度为8.375 μg/mL.  相似文献   

罗曼鸡白细胞介素18基因的克隆、表达及生物学活性检测     

陈红英  崔沛  崔保安  胡功政  朱前磊  王子馨 《四川农业大学学报》2009,27(2):218-222

应用RT-PCR技术从罗曼鸡脾淋巴细胞RNA中扩增鸡白细胞介素18(ChIL-18)全基因,并克隆和测序。结果表明,获得了ChIL-18全序列,其大小为597 bp。将其成熟蛋白基因(510 bp)亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下表达融合蛋白(GST-ChIL-18)。SDS-PAGE可检测到分子质量为约46 kDa的融合蛋白,Western blot证实该融合蛋白可与鼠抗鸡IL-18单克隆抗体发生特异性反应。用MTT法测定表明,重组蛋白能明显促进鸡T细胞转化的活性。  相似文献   

H1N1亚型猪流感病毒SW/HN/405/10株神经氨酸酶基因来源的探究   总被引：1，自引：1，他引：0  

王俊亚周云飞  朱春平刘媛媛张晓娟  崔保安李新生 《中国农学通报》2013,29(14):21-25

为了研究H1N1亚型猪流感遗传演化与变异的特性,2010年2月从河南省某发病猪场采集疑似猪流感的病猪鼻拭子,通过鸡胚尿囊腔传代接种法分离病毒,利用血凝试验(HA)、血凝抑制试验(HI)及RT-PCR方法对病毒分离株进行鉴定,并对分离株的NA基因进行了序列扩增及遗传进化分析。结果表明：分离到一株H1N1病毒,命名为A/swine/Henan/405/2010(H1N1)(SW/HN/405/10);同源性分析结果发现：分离毒株NA基因与GeneBank中登录的类禽型H1N1流感病毒代表株有较高的同源性(92.1%~99.4%),与A /swine/ Hong Kong/ NS62 /2005的同源性最高;NA核苷酸序列分析发现：没有核苷酸插入或缺失,其酶活性中心,二硫键及糖基化位点高度保守,但抗原位点有变异;系统进化树分析发现：该分离株的NA基因与类禽型H1N1猪流感病毒进化关系最近且处于同一分支上。由此推测该分离株NA基因可能来源于类禽型H1N1猪源谱系,遗传特征相对稳定,但同时也发生了一定的变异,说明该分离株还在不断地变异和演化。  相似文献   

鸡传染性喉气管炎病毒PCR快速检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

邵攀峰  陈红英  崔保安  王振亚  宋亚鹏  李森  谢佳喜 《安徽农业大学学报》2010,37(1):58-62

根据GenBank发表的传染性喉气管炎病毒(ILTV)TK基因序列(EF552578),设计合成了1对特异性引物,通过优化反应条件,成功地从ILTV疫苗株中扩增出329 bp特异性片段,而传染性支气管炎病毒、新城疫病毒及马立克病毒基因组均未扩增为出相应的片段。回收的PCR产物经EcoRⅠ酶切和测序鉴定,证实了该扩增片段的特异性。PCR检测ILTV DNA的最小检测量为30 pg。经临床初步应用表明,该方法的建立使传染性喉气管炎病毒的检测更为快速、简便、经济和实用。  相似文献