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91.
92.
根据已发表的结核分枝杆菌23S rRNA和牛分枝杆菌特殊基因序列,设计并合成了2对可扩增结核分枝杆菌和牛分枝杆菌特异性基因片段的引物,建立二重PCR快速检测结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,并研制出检测试剂盒。结果表明,该检测试剂盒对结核分枝杆菌能特异性地扩增出838 bp条带而扩增不出631 bp条带,牛分枝杆菌能特异地扩增出838 bp和631 bp条带,而对其他牛菌株的DNA扩增结果均为阴性;敏感性试验表明最低能检测出50 pg的结核分枝杆菌和牛分枝杆菌DNA模板;保存期测定结果表明,在-20℃条件下保存至1、3、6、9个月时,试剂盒的敏感性无明显变化,仍能检测到50 pg的DNA模板,保存至12个月时其敏感度仍能100%检出阳性样品。 相似文献
93.
根据派琴虫的基因保守序列设计了特异性引物,对派琴虫的DNA进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序.结果表明,扩增大小为596bp,与预期扩增序列同源性为99.8%.该PCR方法检测灵敏度高,最低可检测1pg的派琴虫DNA;特异性强,对荧光假单胞菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌、葡萄球菌、副溶血孤菌、沙门氏菌、诺瓦克样病毒等贝类病原体的扩增均为阴性.用该PCR技术对广西沿海的104份牡蛎、49份贻贝和20份文蛤病料进行检测,阳性率分别为14.6%、10.6%和15.0%.结果显示,派琴虫广泛存在于中国南方沿海的养殖贝类中,建立的PCR方法可用于贝类派琴虫的临床快速检测. 相似文献
94.
根据基因库中鸭I型肝炎病毒和番鸭细小病毒的基因序列,分别设计了两对特异性引物,通过对二重RT-PCR扩增条件的优化,研究建立了可同时鉴别检测鸭I型肝炎病毒和番鸭细小病毒的二重RT-PCR方法.该方法对同一样品中的鸭I型肝炎病毒和番鸭细小病毒模板进行扩增,结果均同时得到2条大小与实验设计相符的202 bp(鸭I型肝炎病毒)和474 bp(番鸭细小病毒)的特异性扩增条带,对鸭圆环病毒、鹅细小病毒、鸭副黏病毒、鸭瘟病毒和禽流感病毒等病原体的检测全为阴性.敏感性试验结果表明,该技术最低能检测到100 fg的鸭I型肝炎病毒RNA和番鸭细小病毒DNA.研究建立的鸭I型肝炎病毒和番鸭细小病毒的二重RT-PCR方法,具有快速、敏感、特异、定量和重复性好等优点,可用于临床上鸭I型肝炎病毒和番鸭细小病毒感染的检测. 相似文献
95.
绿脓杆菌广泛存在于自然界的土壤、水源和空气之中,是一种条件性的病原菌。我们曾在南宁郊区某鸡场观察到一起罗曼雏鸡暴发绿脓杆菌感染,导致大批雏鸡死亡的病例,现报告如下。 相似文献
96.
对重组表达质粒σNS-pGEX-4T-1 IPTG的诱导浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行了试验。当细菌的D600值为0.55～0.65时,IPTG最佳诱导浓度为0.8mmol//L,最佳诱导时间为4h,最适诱导温度为28～37℃,表达的目的蛋白相对分子质量约为66200,约占菌体总量的31.5%～33.3%。37℃及32℃诱导时,目的蛋白σNS主要以包涵体的形式存在;28℃诱导时目的蛋白主要以可溶性的方式表达。利用28℃诱导表达目的蛋白,用谷胱苷肽活化的Sepharose 4B亲和层析柱纯化,测定纯化蛋白的纯度与浓度,并对纯化的蛋白进行Western-blot分析。结果显示,纯化后的目的蛋白纯度达93%,质量浓度为0.91g/L,并能与禽呼肠孤病毒阳性血清发生特异性反应。 相似文献
97.
贝类折光马尔太虫荧光定量PCR检测方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
根据基因库中折光马尔太虫的基因保守序列,设计合成了一对引物和一条TaqMan探针,建立检测折光马尔太虫的荧光定量PCR方法,将建立的荧光定量PCR检测方法与常规PCR检测对比,所建立的荧光定量PCR方法灵敏度可达40个拷贝/μl,比常规PCR灵敏度高100倍,对派琴虫、单孢子虫、嗜水气单胞菌、荧光假单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、河弧菌和拟态弧菌等病原体的检测结果为阴性。结果显示研究建立的折光马尔太虫荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床上折光马尔太虫感染的检测。 相似文献
98.
鸡毒支原体 (ＭＧ)主要引起鸡的慢性呼吸道病 ,造成肉鸡胴体品质下降 ,种鸡产蛋率、受精率和孵化率下降等。当ＭＧ与其它病原合并感染时 ,还会引起严重的并发症 ,导致鸡群死亡率增高 ,给养鸡业带来严重危害。ＭＧ在我国鸡群中的感染相当普遍 ,据对全国 2 0个省市调查结果表明 ,该病的平均感染率高达 78% ,我们对广西调查结果显示 ,鸡群中该病平均感染率为 5 6 9% ,种鸡群中阳性率更高达89 5 % ,严重危害我国养鸡业的健康发展。快速准确诊断是有效防治ＭＧ的前提 ,由于ＭＧ所需培养条件苛刻 ,传统病原分离培养需要 2- 3周 ,甚至更长时间才得… 相似文献
99.
鸡毒支原体(MG)主要引起鸡的慢性呼吸道病,造成肉鸡胴体品质下降,种鸡产蛋率、受精率和孵化率下降等.当MG与其它病原合并感染时,还会引起严重的并发症,导致鸡群死亡率增高,给养鸡业带来严重危害.MG在我国鸡群中的感染相当普遍,据对全国20个省市调查结果表明,该病的平均感染率高达78%,我们对广西调查结果显示,鸡群中该病平均感染率为56.9%,种鸡群中阳性率更高达89.5%,严重危害我国养鸡业的健康发展.快速准确诊断是有效防治MG的前提,由于MG所需培养条件苛刻,传统病原分离培养需要2-3周,甚至更长时间才得出结果,不适于临床诊断需要,为此我们建立了快速检测MG的PCR方法,并在此基础上研制出MG PCR诊断试剂盒,并在生产中推广应用. 相似文献
100.
应用多重聚合酶链反应同时检测鉴别鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒和鸡毒支原体的研究 总被引：5，自引：0，他引：5