禽流感病毒与鸡细小病毒二重PCR检测方法的建立     

何莹  谢芝勋  罗思思  李孟  谢丽基  邓显文  谢志勤  奉彬  黄娇玲  张艳芳 《中国畜牧兽医》2017,44(7):2126-2131

为建立一种能同时鉴别诊断禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）和鸡细小病毒（chicken parvovirus,ChPV）的检测方法,本研究根据GenBank中AIV的M基因和ChPV的NS基因保守序列,分别设计并筛选出两对特异性引物,用于AIV和ChPV的检测。通过优化反应条件,建立了AIV和ChPV二重PCR检测方法。试验结果表明,该方法特异好,能同时检测AIV和ChPV,对其他常见的禽病病原体均未反应;该法对AIV和ChPV的检测下限均为100 fg;对159份临床样品检测结果与PCR阳性产物测序结果一致。本研究建立的AIV和ChPV二重PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高的特点,对AIV和ChPV的防制具有重要意义。  相似文献   

梅花的插花艺术   总被引：1，自引：0，他引：1  

张艳芳 《南方农业》2008,2(1):16-19

1 我国梅花插花的历史 我国梅花插花的最早记载,至少应在魏、晋之际。据《荆州记》载,“陆凯与范晔交善,自江南寄梅花一枝诣长安与晔,并赠诗云：‘折花逢驿使,寄与陇头人,江南无所有,聊赠一枝春。’”  相似文献   

7个菠萝品种在云南省的引种表现     

赵维峰  杨文秀  裴红霞  张艳芳 《中国果业信息》2018,47(3)

‘卡因’和‘巴厘’为云南菠萝的主栽品种。长期的种植过程中出现了种性退化、高劣果率等问题。本研究采用橡胶/菠萝间作模式,利用单因素随机区组设计,对‘苹果’、‘金钻’、‘金菠萝’、‘甜蜜蜜’、‘8号’、‘冬蜜’、‘蜜宝’等7个品种进行引种试种试验,比较生育性状、果实内在品质以及外观品质。结果表明：在云南幼龄橡胶林下,7个间作菠萝新品种均表现出良好的生长适应性和生长结果习性。‘甜蜜蜜’其营养生长状况最佳、自然抽蕾率高、单果重大小适宜、果形为长圆筒形,果心宽度小,果实内在品质佳,可作为鲜食品种在云南区域进行推广种植。  相似文献   

江西梅岭国家森林公园古树名木资源调查与种类特征分析     

殷立新  李冬  张艳芳  刘兴平 《江西林业科技》2020,48(1):50-54

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梅花病虫害图说及防治     

张艳芳 《花木盆景》2001,(1A):38-39

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牛支原体、牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒三重二温式PCR检测方法的建立及应用     

范晴  谢芝勋  谢志勤  谢丽基  黄莉  黄娇玲  张艳芳  曾婷婷  王盛  罗思思  邓显文  刘加波  庞耀珊 《动物医学进展》2018,(2)

为建立一种可同时检测牛支原体(MB)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性支气管炎病毒(IBRV)的三重二温式PCR检测方法。根据GenBank中MB、BVDV和IBRV的保守基因Uvrc基因、5′端非编码区(5′-UTR)和GB基因,分别设计了3对特异引物,将三温式PCR扩增程序简化为两个温度梯度,优化反应条件建立了用于同时检测MB、BVDV以及IBRV 3种常见牛呼吸道传染病病原的三重二温式PCR。结果显示,该方法特异性好,只对MB、BVDV和IBRV模板进行扩增,扩增的目的片段长度分别为412、170、727bp,对其他牛病原体无特异性扩增;灵敏度高,最低能同时检测到10 000拷贝的目的核酸;干扰性小,能同时检测3个不同浓度的模板。研究所建立的MB、BVDV和IBRV三重二温式PCR检测方法,具有特异性好、灵敏度高、方便快速等优点,可用于临床鉴别诊断和流行病学调查,具有很高的临床应用价值。  相似文献   

牛传染性鼻气管炎病毒和牛病毒性腹泻病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立     

谢志勤  谢芝勋  范晴  张民秀  罗思思  张艳芳  曾婷婷  黄娇玲  王盛  谢丽基  邓显文  刘加波  庞耀珊 《动物医学进展》2019,(3)

为建立基于TaqMan探针的双重荧光PCR技术检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法,根据IBRV gB基因序列和BVDV 5′端非编码区序列的保守区域,分别设计1对IBRV的特异性引物和1条FAM标记的TaqMan探针,1对BVDV的特异性引物和1条ROX标记的TaqMan探针,建立双重荧光定量PCR检测IBRV和BVDV的方法。对建立的检测方法进行特异性和敏感性测定,并用临床样品进行检测验证。特异性试验结果显示,该方法检测参试的IBRV毒株,在波长530μm(FAM)时收集到特异性荧光信号曲线,检测参试的BVDV毒株,在610μm(ROX)时收集到特异性荧光信号曲线,无交叉信号出现,对照的毒株无论是在530μm(FAM),还是610μm(ROX)处,均无荧光信号曲线出现,方法的特异性好;敏感性试验结果显示,该双重荧光定量PCR可检测到100个拷贝的IBRV和BVDV质粒DNA模板;临床样品检测结果表明,对保存在-70℃的127份牛病料样品核酸进行检测,IBRV阳性12份,BVDV阳性26份,IBRV和BVDV同为阳性2份,为混合感染,检测的拷贝数分别为6.24×105和6.32×104拷贝/μL。阳性样品经序列比对分析,分别与IBRV和BVDV的序列100%同源。建立的双重实时荧光定量PCR方法检测IBRV和BVDV具有特异、敏感等优点,可用于临床样品的鉴别检测。  相似文献   

广西某健康鸡群Ⅰ群禽腺病毒的hexon蛋白loop 1基因遗传进化分析     

张民秀  谢芝勋  谢志勤  高约  谢丽基  刘加波  邓显文  罗思思  张艳芳  曾婷婷 《中国兽药杂志》2019,53(8):8-14

为调查广西某规模化鸡场健康鸡群Ⅰ群禽腺病毒(FAdV-Ⅰ)的感染情况,于2017年11月-2018年12月采集不同日龄鸡群咽喉拭子和泄殖腔拭子样品4700份,对样品进行FAdV-Ⅰ检测和hexon蛋白loop 1基因扩增,应用LaserGene7.1和MEGA4.1软件对loop1基因序列进行核苷酸和遗传进化分析。结果显示,FAdV-Ⅰ的阳性检出率为8.72%;40~70日龄和71~99日龄鸡群阳性FAdV-Ⅰ的检出率分别为28.17%和22.91%;测序获得的38条loop 1基因序列分析表明该鸡场健康鸡群感染了5个不同种的FAdV-Ⅰ,其中26.32%的序列为A种(FAdV-A)、2.63%为B种(FAdV-B)、10.53%为C种(FAdV-C)、39.47%为D种(FAdV-D)和21.05%为E种(FAdV-E);遗传进化分析表明该鸡场健康鸡群主要感染的种为FAdV-D,血清2型(FAdV-2)为优势血清型,其次为A种的血清1型(FAdV-1)和E种的血清8a型(FAdV-8a)和8b型(FAdV-8b)。结果表明,40~70日龄健康鸡群的FAdV-Ⅰ的检出率最高,在健康鸡群中感染的FAdV-Ⅰ主要为FAdV-D种中的FAdV-2。  相似文献   

薄皮甜瓜早春小拱棚栽培技术     

张艳芳  李娟  陆晴  张爱敏  赵振海  孙逊 《中国瓜菜》2018,(5)

‘唐甜11号’为早熟薄皮甜瓜品种,根据该品种的特性和华北地区早春的天气、土壤条件等,分别从育苗、定植、田间管理、病虫害防治等方面介绍了薄皮甜瓜‘唐甜11号’的早春小拱棚栽培技术,为该品种在华北地区的推广种植提供参考。  相似文献   

H6N1亚型禽流感病毒GeXP检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

罗思思  谢芝勋  谢志勤  谢丽基  邓显文  范晴  黄娇玲  张艳芳  王盛  曾婷婷  张民秀 《畜牧与兽医》2018,(11)

根据基因库中H6亚型禽流感病毒(AIV) HA基因、N1亚型AIV NA基因和所有亚型AIV M基因序列,分别设计筛选出3对特异性引物,优化反应条件,建立了H6N1亚型AIV GeXP检测方法。该法对H6亚型AIV的检测出现194 bp (H6)、164 bp (AIV通用检测) 2个目的峰,对N1亚型AIV的检测出现249 bp (N1)、164 bp 2个目的峰,对H6N1亚型AIV的检测出现194 bp、249 bp和164 bp 3个目的峰,对其他亚型AIV的检测只出现164 bp通用检测目的峰,对常见禽病病原体均未出现任何检测峰;该法对H6亚型和N1亚型AIV检测下限为102拷贝/μL。本研究建立的H6亚型和N1亚型AIV高通量GeXP检测方法特异性强、灵敏度高,可同时快速鉴别检测H6亚型、N1亚型和所有亚型AIV,为H6N1亚型AIV的检测提供了一种简便、快速和有效的方法。  相似文献