应用巢式PCR检测隐孢子虫     

李巍  吴康  张西臣  李建华  张国才  李淑红  宫鹏涛  杨举 《中国兽医学报》2010,30(6)

应用巢式聚合酶链反应(Nested PCR)建立了一种检测隐孢子虫(Cryptosporidium)的方法。试验中隐孢子虫卵囊纯化采用庶糖密度梯度离心法,以液氮-热水浴反复冻融及酚-氯仿抽提冷乙醇沉淀法制备模板DNA,根据隐孢子虫18S rRNA序列高度保守区设计2对引物,建立Nested PCR诊断方法。该方法特异性强,可检出牛源微小隐孢子虫(C.parvum)、羊源微小隐孢子虫(C.parvum)、牛源安氏隐孢子虫(C.andersoni)、鸡源贝氏隐孢子虫(C.baileyi)及猪源隐孢子虫(C.suis);敏感性高,该方法最低核酸DNA检测量达到10fg。初步应用结果表明,所建立的Nested PCR方法适合于隐孢子虫病的诊断和分子流行病学调查。  相似文献   

安氏隐孢子虫肌动蛋白部分编码基因真核表达载体的构建     

陈健  胡进平  宫鹏涛  李建华  杨举  李赫  张国才  张西臣  任文陟 《安徽农业科学》2012,(7):3860-3862

[目的]将安氏隐孢子虫肌动蛋白基因进行克隆并在Hela细胞中真核表达。[方法]根据筛选安氏隐孢子虫T7噬菌体展示文库获得的肌动蛋白(CA42)部分编码基因序列设计特异性引物,扩增目的基因CA42,构建重组真核表达载体pVAX1-CA42,将其转化入He-la细胞,用间接免疫荧光、SDS-PAGE、Western blotting检测CA42蛋白在转染细胞中的表达情况。[结果]重组质粒能在Hela细胞中表达,且表达产物具有反应原性。[结论]成功克隆并表达了安氏隐孢子虫肌动蛋白基因,并在Hela细胞中能够稳定表达。  相似文献   

猪瘟免疫猪接种PRRSV nsp2Δ1882-2241弱毒疫苗后IL-12、IL-10、TNF-α应答特征     

单悦  付云云  郎广平  郭敏  白雪  梅林  屈雪琪  温涛  杨举  邢海云  梁志选  罗胜军  赵建增  高英杰 《中国兽医学报》2012,(7):937-940,944

不同时间段采集猪的血液样本,利用ELISA方法检测血清和细胞培养上清中IL-12、IL-10、TNF-α等3种细胞因子的水平,分析猪双重免疫CSFV、PRRSV弱毒苗后血清和细胞培养上清中细胞因子的变化规律。结果显示,IL-12在血清中的浓度显著高于细胞培养上清中的浓度(P<0.01),在CSFV高抗体PRRSV高抗体组中28d采血的细胞培养上清中IL-12的浓度高于14d采血的细胞培养上清中的浓度(P<0.05);IL-10血清中水平显著低于细胞培养上清中水平(P<0.01),在CSFV高抗体PRRSV高抗体组中28d采血的细胞培养上清中的IL-10浓度显著低于14d采血的细胞培养上清中的浓度(P<0.01);TNF-α在血清中水平显著低于细胞培养上清中水平(P<0.01),在3组中28d采血的细胞培养上清液中TNF-α浓度高于14d采血的细胞培养上清液中浓度(P<0.05)。结果表明,2种疫苗特异性抗体应答高时,IL-12水平显著上调,IL-10水平显著下调,提示上调IL-12及下调IL-10都是基因缺失疫苗发挥效力的潜在机制。TNF-α总体水平上升,但在血清中水平较低。  相似文献   

长春地区发现鸡隐孢子虫病     

张西臣  杨举 《中国兽医学报》1996,(4)

长春地区发现鸡隐孢子虫病长春市某鸡场１７～１８周龄的种鸡发生一种疾病，呈现精神不振、厌食、拉稀便、消瘦和呼吸困难等症状，接着大批鸡死亡，２周内死亡５００多只，占所养鸡的１６．７％。经对病鸡剖检，发现肺表面有出血点，气管粘膜充血，内有粘性分泌物；肝呈深...  相似文献   

流式细胞术检测不同试验条件对猪T 淋巴细胞亚群的影响   总被引：1，自引：0，他引：1  

屈雪琪  赵建增  梁智选  李勇  白雪  梅林  温涛  何斌  杨举  罗胜军  邢海云  高英杰 《中国畜牧兽医》2011,38(4):101-104

通过不同方式处理猪外周血淋巴细胞,对不同保存时间的淋巴细胞进行流式细胞术检测,探讨其对T淋巴细胞亚群中CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋亚群的影响。采用肝素钠、EDTA、枸橼酸钠3种抗凝剂抗凝猪外周静脉血,分别在第1、2、4、6、8、10天用流式细胞仪检测。结果表明,肝素钠抗凝,第1、2、4天内检测差异不显著(P＞0.05),第6天检测CD4^＋、CD8^＋细胞显著减少(P＜0.05),第8、10天极显著减少(P＜0.01)。EDTA抗凝,第1、2、4天内检测差异不显著(P＞0.05),第6天检测CD3^＋细胞显著减少(P＜0.05),第8、10天极显著减少(P＜0.01);枸橼酸钠抗凝,第1、2、4、6、8天内检测差异不显著(P＞0.05),第10天检测CD3^＋、CD4^＋细胞极显著减少(P＜0.01),CD8^＋细胞显著减少(P＜0.05)。3种抗凝剂检测比较,处理后的第1、2、4、6天肝素钠抗凝管检测结果CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋均高于EDTA和枸橼酸钠抗凝。本研究表明,流式细胞术检测猪外周血优选肝素钠抗凝,样本采集后4 d内检测完毕。  相似文献   

硝唑尼特对四翼无刺线虫的驱虫效果     

王泽东  马月  李文超  李伟志  孟莹  宫鹏涛  杨举  李建华  张西臣 《中国畜牧兽医》2011,38(7):187-189

20只自然感染四翼无刺线虫的雌性昆明系小鼠,随机分成4组,每组5只,常规饲喂。第1~3组小鼠分别以200、400、800 mg/kg剂量的硝唑尼特灌胃,第4组设为空白对照组,每24 h一次,连续灌胃5 d。用虫卵减少率和粗计驱虫率作为评价药物效果的指标。结果显示,硝唑尼特对四翼无刺线虫的驱虫效果随药物剂量的增加而提高,以800 mg/kg剂量效果最好。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白质研究进展   总被引：2，自引：1，他引：1  

付云云  单悦  郎广平  郭敏  白雪  梅林  温涛  杨举  罗胜军  邢海云  梁志选  赵建增  高英杰 《中国畜牧兽医》2012,39(4):60-63

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种折叠的正义RNA病毒,属于动脉炎病毒科(Arteriviridae),尼多病毒目(Nidovirales)。除了动脉炎病毒科,尼多病毒目还包括冠状病毒科(Coronaviruses)。15.1~15.2 kb长的PRRSV基因组通过互相重叠的开放性阅读框编码蛋白质。ORF1a翻译过程中产生pp1a多聚蛋白。ORF1b表达产生了 pp1ab多聚蛋白。pp1a和pp1ab经病毒蛋白酶处理后又生成了14个非结构蛋白。一些非结构蛋白为蛋白酶(NSP1、NSP1β、NSP2和NSP4)、RNA-依赖性RNA聚合酶(NSP9)、解旋酶(NSP10)和核酸内切酶(NSP11)。ORFs2-5编码GP2-GP5,ORF6编码M,ORF7编码N蛋白。ORF2b完全包括在ORF2内,表达小的非糖基化E或2b蛋白。相当一部分的囊膜蛋白是nidoviruses所特有的,所有的结构蛋白都是感染所必需的。  相似文献   

猪繁殖与呼吸综合征的免疫学研究进展   总被引：5，自引：3，他引：2  

屈雪琪  赵建增  梁智选  李勇  白雪  梅林  温涛  何斌  杨举  罗胜军  邢海云  高英杰 《中国畜牧兽医》2010,37(8):194-198

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reporoductive and respiratory syndrome,PRRS)是严重危害养猪业的重要疾病之一。作者综述了近年来PRRS免疫学研究的最新进展,特别对细胞免疫、体液免疫、天然免疫、抗体依赖性增强作用等方面进行了深入的论述,对参与该病免疫反应中相关因子引起的免疫病理学研究做了详细的介绍。  相似文献   

IFN-γ研究进展及其在猪繁殖与呼吸综合征研究中的应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

白雪  赵建增  梁志选  屈雪琪  李勇  梅林  温涛  何斌  杨举  罗胜军  邢海云  高英杰 《中国畜牧兽医》2010,37(12):145-150

γ-干扰素(interferon gamma,IFN-γ)是干扰素的一种,又称为Ⅱ型干扰素或免疫干扰素,主要由活化的T细胞和NK细胞产生。IFN-γ是动物机体最重要的细胞因子之一,是主要的巨噬细胞活化因子(macrophage activating factor,MAF),具有强大的免疫调节作用和抗病毒、抗肿瘤作用。目前,干扰素基因工程和基因治疗研究引起了广泛关注,已被应用于人类疾病临床治疗和动物疾病防控研究。作者就IFN-γ的基本特征、生物学活性、检测及其在猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)中的研究应用进行了综述。  相似文献   

猪急性细颈囊尾蚴病的诊治   总被引：3，自引：0，他引：3  

杨举  张西臣 《中国兽医科技》1999,29(3):37-38

  相似文献