蜜蜂幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因的原核表达及多克隆抗体的制备     

葛婷  何晓杰  叶尔保勒  阿斯喀·夏热甫汉  雷程红  王振宝 《动物医学进展》2018,(5)

克隆蜜蜂幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因PLMP,构建其原核表达载体后进行重组蛋白的表达及纯化,接种公兔制备多克隆抗体,以期为研究幼虫芽胞杆菌快速检测方法奠定基础。用PCR方法扩增幼虫芽胞杆菌PLMP基因,扩增产物克隆至表达载体pGEX-4T-1并转化至E.coliBL21(DE3)感受态中。经不同的诱导时间、IPTG浓度诱导表达PLMP重组蛋白,经SDS-PAGE电泳切胶回收纯化目的蛋白。用目的蛋白对公兔进行4次免疫后,采集血清制备多抗。PCR扩增得到1 242bp的PLMP基因片段;构建原核表达载体pGEX-4T-1-PLMP,经终浓度0.8mmol/L IPTG、37℃诱导表达5h得到分子质量为70ku目的蛋白;用目的蛋白免疫公兔得到的多抗经间接ELISA检测效价达到1∶12 800,Western blot检测出现条带,证明所制备的多抗能够用于PLMP抗原的检测。研究结果构建了表达幼虫芽胞杆菌金属蛋白酶基因PLMP的原核载体,获得了PLMP蛋白,制备了兔抗PLMP多克隆抗体,为建立幼虫芽胞杆菌快速检测方法奠定了基础。  相似文献   

一例羔羊传染性胸膜肺炎的诊断     

安尧汶  何晓杰  瓦热斯·吐尔松  宋瑞其  叶尔保勒  郭庆勇  巴音查汗·盖力克  王振宝 《黑龙江畜牧兽医》2018,(14)

为了对新疆霍城县三宫乡某养殖户病死羔羊进行诊断,采用临床症状检查、病理剖检和实验室诊断的方法,最后初步确诊患病绵羊所患疾病为传染性胸膜肺炎。  相似文献   

试论园林工程绿化种植施工与管理     

王振宝 《山东饲料》2015,(1)

园林是在工程理论基础上进行绿化种植。其某一特定区域内，运用艺术以及建筑手段，以市政工程原理为基础的工程造景技艺。其将花草树木、假山、流水等元素合理结合，创造出符合人们审美标准的娱乐休憩场所。在园林工程施工中，以植物生命为主要特征的工程建设是施工的重要组成部分，只有加强对其管理，才能够创造出充分体现季相变化和人与自然景观景致的和谐统一。本文通过长期的园林绿化施工实践，对园林绿化种植工程的施工组织管理进行了探讨。  相似文献   

检测牛感染犬新孢子虫的TaqMan-MGB Real-time PCR方法的建立     

陈千林  刘梦丽  许正茂  王振宝  吉尔格力  史亚明  巴音查汗 《中国农业大学学报》2016,21(12):58-64

为建立牛感染犬新孢子虫的Real-time PCR检测方法,根据犬新孢子虫Nc2基因保守序列设计特异性检测引物和TaqMan-MGB探针,建立新孢子虫病TaqMan-MGB Real-time PCR检测方法。PCR扩增产物约为150bp,与预期片段大小相符;Real-time PCR扩增表明,Ct值与梯度稀释的阳性质粒模板呈良好的线性关系;当检测牛源性弓形虫、牛环形泰勒和牛巴贝斯等虫种阳性DNA时均为阴性;经3D数字PCR判定,Real-time PCR方法的最低有效检测量为6.41拷贝/μL,灵敏性是常规PCR的1 000倍;重复性试验的组内平均变异系数为1.108%,组间为2.732%;本方法与《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499-2013)的检测符合率为100%(46/46)。该Real-time PCR方法可用于早期诊断和日常监测家畜感染犬新孢子虫。  相似文献   

牛传染性鼻气管炎病毒血清抗体检测试验及结果分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

季新成  王振宝  王文  陈新民  刘晓晖  王陆宝 《中国动物检疫》2008,25(9):37-39

采用SYNBIOTICS公司酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒对来自新疆15个不同地区(包括4个养牛场)共635份牛血清进行了牛传染性鼻气管炎病毒血清抗体检测,共检出阳性血清329份,最高感染率达90%,最低感染率为5%,平均感染率为51.8%,结果显示该病已在全疆普遍存在,感染没有明确的地域分布规律。对其中的106份血清用Institute Pourquier公司ELISA试剂盒重新检测,发现两试剂盒的符合率为90.6%,Institute Pourquier公司ELISA检测试剂盒敏感性稍高。从该106份血清中再次随机抽取其中的35份用病毒中和实验(VN)检测方法进行了检测,检测结果与SYNBIOTICS公司ELISA检测试剂盒相比较,同为阳性样品24份,同为阴性样品7份,两者符合率88.6%;与Institute Pourquier公司ELISA检测试剂盒相比较,同为阳性样品24份,同为阴性样品6份,两者符合率85.7%。试验结果表明,与VN相比,ELISA检测试剂盒具有操作简便,敏感性高等优点。  相似文献   

小亚璃眼蜱、亚洲璃眼蜱和残缘璃眼蜱的分子生物学鉴定     

吕继洲  吴绍强  张永宁  王振宝  冯春燕  王彩霞  邓俊花  袁向芬  林祥梅 《中国畜牧兽医》2013,40(6):7-14

本研究旨在建立小亚璃眼蜱、亚洲璃眼蜱和残缘璃眼蜱的分子生物学鉴定方法,并探讨它们的系统发生关系。在新疆、内蒙古从动物体表采集寄生蜱,形态学鉴定后,PCR扩增测序获得3种璃眼蜱的16S rRNA及线粒体色素氧化酶亚基Ⅰ基因(cytochrome oxidaseⅠ,COⅠ)序列后进行同源性分析。用Mega 5.0和Mrbayes 3.2软件分别构建系统进化树,亚洲璃眼蜱、小亚璃眼蜱样本16S rRNA序列与GenBank中已知相应蜱虫16S rRNA序列聚类,而残缘璃眼蜱COⅠ序列与GenBank中已知残缘璃眼蜱COⅠ序列聚类,与形态学鉴定结果一致。在传统形态学分类的基础上,结合分子生物学鉴定方法能简易、准确鉴定小亚璃眼蜱、亚洲璃眼蜱和残缘璃眼蜱。  相似文献   

草原革蜱和边缘革蜱的分子生物学鉴定     

吕继洲  王振宝  袁向芬  吴绍强 《中国畜牧兽医》2013,40(9):8-15

本研究旨在建立草原革蜱和边缘革蜱的分子生物学鉴定方法,并探讨其系统发生关系。在新疆从动物体表采集寄生蜱,形态学鉴定后,PCR扩增获得2种革蜱的16S rRNA及线粒体色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列,测序后进行同源性分析。用Mega 5.0和Mrbayes 3.2软件分别构建系统进化树,草原革蜱16S rRNA序列与GenBank数据库中已知草原革蜱16S rRNA序列聚类,而边缘革蜱COⅠ序列与GenBank数据库中已知边缘革蜱COⅠ序列聚类,与形态学鉴定结果一致。本研究结果表明,在传统形态学分类的基础上,结合分子生物学鉴定方法能简易、准确鉴定草原革蜱和边缘革蜱。  相似文献   

美洲幼虫腐臭病二温式PCR诊断方法的建立及应用     

何晓杰  阿曼吐尔·阿黑哈提  叶尔保勒  史秀丽  齐鑫  皮志媛  王振宝 《新疆农业科学》2015,(2):288-291

【目的】为建立蜂及蜂产品中美洲幼虫腐臭病(AFB)二温式PCR诊断方法。【方法】选取幼虫芽孢杆菌基因保守序列设计一对特异性引物,优化反应参数,进行特异性、敏感性和重复性试验验证,建立了诊断AFB的二温式PCR方法。【结果】扩增出130 bp的特异性片段,与参考株序列相似性为100%,DNA灵敏度检测幼虫芽孢杆菌达到33 fg/PCR体系,重复性良好。应用该方法对40份实验室模拟样本和50份临床样本进行了检测,与预期结果一致。【结论】该方法具有特异、灵敏、准确等优点,可用于蜂及蜂产品中AFB的快速诊断。  相似文献