鸡传染性法氏囊病超强毒VP1基因的原核表达及兔抗血清的制备     

康忠惠  王永强  王琦  李久宽  秦立廷  高玉龙  高宏雷  祁小乐  林欢  王笑梅  许修宏 《中国家禽》2011,33(2)

以鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株基因组RNA为模板,通过RT-PCk扩增VP1基因,经EcoRI和和Xho I双酶切处理后与经相同酶切处理的pET-30a原核表达载体连接,将酶切、PCR及测序鉴定正确的阳性重组子转化BL21(DE3)感受态细胞,融合蛋白His-VP1经IPTG诱导表达后主要以包涵体形式存在.Western blot检测到约97 ku的目的蛋白能够与特异性的VP1单克隆抗体反应.将纯化的目的蛋白免疫新西兰白兔后获得了抗VP1蛋白的血清.该血清能够与重组杆状病毒rBacGxVP1感染的sf9细胞发生特异性反应,而且其ELISA抗体效价达到1:25 600.鸡传染性法氏囊病超强毒VP1基因的表达与兔抗血清的制备为病毒的检测及VP1功能的研究提供了有效工具.  相似文献   

表达传染性法氏囊病毒超强毒流行株VP2基因重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建   总被引：2，自引：0，他引：2  

葛金英  温志远  高宏雷  王永  胡森  鲍恩东  王笑梅  步志高 《中国农业科学》2008,41(1):243-251

 【目的】重组新城疫病毒（newcastle disease virus,NDV）作为新型的活病毒载体疫苗具有巨大的优势和应用前景,本研究旨在探讨新城疫病毒作为防制传染性法氏囊病超强毒（very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV）及新城疫重组二联活病毒载体疫苗的可行性。【方法】采用单股负链RNA病毒反向遗传操作技术,救获野生型NDV LaSota疫苗株rLaSota及表达vvIBDV Gx株VP2基因的重组疫苗株rLaSota-VP2,分别经滴鼻点眼途径免疫SPF雏鸡,免疫后21 d分别以vvIBDV Gx超强毒和新城疫强毒进行攻击。【结果】rLaSota及表达vvIBDV－VP2基因平均鸡胚致死时间均大于120 h,脑内致病指数（ICPI）分别为0.4和0.36,静脉内致病指数（IVPI）均为0;接种后72～96 h每毫升尿囊液EID50则分别达到109.0以上。rLaSota-VP2以106.0 EID50一次免疫7日龄SPF鸡雏,免疫后3周对新城疫强毒致死攻击100％保护,对vvIBDV攻击免疫保护率达90％以上。 【结论】重组病毒rLaSota-VP2保持了LaSota亲本疫苗株高滴度的鸡胚生长特性和低致病性及遗传稳定性,免疫雏鸡对新城疫强毒和传染性法氏囊病毒超强毒株的致死均形成有效免疫保护。本研究为研制传染性法氏囊病－新城疫重组二联活载体疫苗奠定了基础。  相似文献   

牛血清中鸡传染性法氏囊病病毒非特异性抑制物质的存在形式     

王笑梅  陈冠春  于大海 《中国预防兽医学报》1989,(Z1)

薄层凝胶电泳扫描的结果证明:成年牛血清中αβ球蛋内含量为20.5％,r球蛋白含量为30.9％;胎牛血清中αβ球蛋白含量为7.6％,r球蛋白含量为3.4％。以H~3-尿嘧啶标记的鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV-H~3)测定牛血清中抑制IBDV增殖的非特异性物质,成牛血清αβ球蛋白条带的衰变率为458和470dpm,γ球蛋白条带的衰变率为145dpm;胎牛血消αβ球蛋白条带的衰变率为60和47dpm。γ球蛋白条带的衰变率为38dpm。蛋白质盐析法提取的成年牛血清中的αβ球蛋白对IBDV蚀斑形成抑制率为100％。γ球蛋白为43.7％,血清其它蛋白成份为15.6％,试验证明,IBDV非特异性抑制物质以与αβ蛋白结合形式存在于牛血清中。  相似文献   

禽免疫抑制性传染病的危害和防制   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭艳  付朝阳  王笑梅 《畜牧兽医科技信息》2003,19(11):6-8

近年来,我国养禽业的发展非常迅速,已成为我国畜牧业的支柱产业之一。可是随着养禽业的快速发展,各种内在及外在因素也正严重地威胁着养禽业的健康发展,其中疫病已成为威胁养禽业的头号大敌。虽然通过使用疫苗接种及药物控制等手段,使禽类主要传染病的防制取得了一定的成效,但在各地鸡场的生产实践中免疫接种过的鸡群仍会不断发生各种疾病,其中不容忽视的原因之一就是禽类免疫抑制病。所谓免疫抑制可以定义为免疫系统对某一抗原的应答反应能力低下,它可能是部分的,也可能是  相似文献   

传染性法氏囊病超强毒Gx株的致弱研究   总被引：11，自引：2，他引：9  

曾祥伟  王笑梅  高宏雷  付朝阳  魏萍 《中国预防兽医学报》2003,25(2):140-144

本研究成功将鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDVGx株通过SPF鸡胚的快速培育及鸡胚成纤维细胞传代致弱，揭示了vvIBDV从超强毒力向弱毒力转化过程中，其主要结构蛋白VP2基因核苷酸及推导的氨基酸序列的变化规律。对不同代次细胞毒进行了序列分析。发现细胞毒在第7代以前，VP2基因序列没有改变。与欧洲标准超强毒氨基酸同源性达100%；细胞毒第8代，有个别核苷酸发生了改变。但没有影响氨基酸序列；细胞毒第9代是变化复杂的过渡代；10代毒VP2基因与欧洲标准弱毒Cu-1氨基酸序列同源性达97%；以后的细胞适应毒至20代。其VP2基因序列不再改变。致病性实验表明原代毒对4周龄SPF鸡致死率为64%。细胞毒第5代的致死率为60%，而20代毒对鸡无致病性。在鸡体内连续传代6代不返强。  相似文献   

进口白羽肉种鸡禽白血病疫情鉴定     

马美哥  于蒙蒙  许传田  黄庆华  孟照洁  王素艳  邢立晓  常芳芳  李猷  何希君  刘长军  祁小乐  王永强  孙延鸣  王笑梅  高玉龙 《中国预防兽医学报》2019,(5):526-529

2018年以来,某进口品种肉种鸡发生疑似禽白血病病例,流行范围广,危害严重,为确定该次疫情的病原,本研究从辽宁、山东等地发病鸡场采集55份疑似禽白血病病料样品。病理组织切片观察显示,病料样品肝脏和脾脏均有髓细胞样肿瘤细胞增生。针对禽白血病病毒(ALV)、鸡马立克氏病病毒(MDV)和网状内皮组织增生症病毒(REV)的特异性PCR检测结果显示,55份病料样品中ALV阳性样品12份(21.8%),MDV阳性样品1份(1.82%),REV均为阴性。将12份ALV阳性病料样品经处理后接种DF-1细胞进行病毒分离,ELISA检测结果显示有8份ALV群特异性抗原阳性。ALV多重PCR检测结果表明,8个分离株均为J亚群ALV(ALV-J),测序结果显示,8个分离株之间核苷酸序列同源性为99.5%~100%,与A、B、C、D、E亚群ALV的同源性仅为56.5%~58.8%,与ALV-J的同源性为90.7%~96.6%,进一步表明所有分离株均为ALV-J。上述结果表明,引起该次进口白羽父母代肉种鸡发生禽白血病的病原主要以ALV-J为主,该研究结果为疫情的溯源和有效防控奠定了基础。  相似文献   

进口白羽肉种鸡J亚群禽白血病病毒的全基因组序列分析     

马美哥  于蒙蒙  许传田  黄庆华  孟照洁  王素艳  邢立晓  常方方  刘长军  祁小乐  王永强  孙延鸣  王笑梅  高玉龙 《中国预防兽医学报》2019,(7):750-754

为研究引起我国部分地区进口白羽肉种鸡发生禽白血病疫情的病毒来源及其变异趋势,本研究对从进口白羽肉种鸡分离的8株J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的全基因组序列进行测序分析。8株ALV-Jgp85氨基酸遗传演化分析显示,其与ALV-J肉鸡分离株(包括ALV-J原型病毒株HPRS-103、美国肉鸡ALV-J分离株、国内肉鸡分离株)及蛋鸡分离株氨基酸序列同源性均低于92.5%,而与国内2014年父母代白羽肉种鸡ALV-J分离株GD14J2同源性较高,为93.5%~95.1%,处于同一分支。8株ALV-J的3'非编码区(3'UTR)在rTM区缺失203bp,DR-1区缺失7bp,E元件位置缺失125bp,仅保留了22个碱基,这一缺失特征与GD14J2一致。8株ALV-J的3'LTRU3区序列与ALV-J肉鸡分离株及蛋鸡分离株的相应基因序列同源性均低于91.5%,而与GD14J2病毒株的同源性较高,为94.3%~96.3%。序列分析发现U3区存在连续11bp缺失和164位碱基突变(C/T),该突变形成2个新的转录调控元件AIBREP1、AIBREP2。综合gp85、3'UTR和U3区序列特征,推测引起本次进口白羽肉种鸡禽白血病的ALV-J与国内2014年父母代白羽肉种鸡ALV-J分离株GD14J2为同一来源。但本次分离到的ALV-J病毒株也有新的变异趋势,这些变异是否与ALV-J致病性相关,还需进一步研究。本研究为ALV-J有效防控和净化提供数据支持。  相似文献   

禽网状内皮组织增生症病毒感染鸡胚成纤维细胞的转录组学分析     

王静  杨彦超  李凯  高立  王永强  张艳萍  崔红玉  刘长军  祁小乐  高玉龙  潘青  王笑梅 《中国家禽》2018,(14)

为了更好地揭示禽网状内皮组织增生症病毒(REV)感染致瘤及免疫抑制的机制,利用Illumina HiSeq~(TM)技术对REV感染鸡胚成纤维细胞(CEF)后宿主细胞的转录组学进行了全面分析,鉴定REV感染24 h宿主差异表达基因1 147个,感染120 h差异表达基因2 254个。通过差异表达基因GO分析和KEGG分析,发现TLRs、NLRs、RLRs等模式识别受体信号通路、WNT信号通路、JAK-STAT信号通路等在REV的致瘤及免疫调控机制中发挥重要作用,而且REV感染后可以诱发宿主的炎症反应,进一步加强REV的致病性及与其他病原的混合感染。结果对揭示REV的致病、致瘤及免疫抑制的分子机制提供了新的信息具有重要意义。  相似文献   

哈兽研所研制成IBDⅠ号疫苗     

王笑梅 《中国家禽》2000,(11)

鸡法氏囊病 (IBD)新Ⅰ号疫苗为哈尔滨兽医研究所承担的国家“九五”攻关项目、省攻关项目中最新研制出的中试产品。其特点：①疫苗毒种为国内 vvIBDV致弱株— Gt株：国内 vvIBDV－ G经鸡胚和鸡胚成纤维细胞传代、驯化为 Gt株，为 IBDV致弱株。 Gt株对雏鸡无致病性，有较好的免疫原性， Gt株疫苗安全可靠。②疫苗毒株性能稳定，毒价高：试验证明， Gt株生长特性稳定，在鸡体靶器官、法氏囊中增殖，引起免疫反应，但不引起机体的免疫抑制，在鸡胚成纤维细胞上大量地、有规律地增殖，毒价可达 4.0× 108PFU/mL。以其为毒种制备的疫…  相似文献   

鸡传染性法氏囊病的流行与防控     

王笑梅 《北方牧业》2013,(22)

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