我国部分地区种鸡禽肺病毒感染的血清学调查     

贠炳岭  刘在斯  吴关  李久宽  秦立廷  祁小乐  王永强  高宏雷  高玉龙  王笑梅 《中国家禽》2012,34(12):64-65

禽肺病毒(Avian pneumovirus,APV)又称火鸡鼻气管炎病毒(Turky rhinotracheitis virus,TRTV)[1]。禽肺病毒属于副黏病毒科肺病毒亚科偏肺病毒亚属[2]。已经确定禽肺病毒可引起火鸡呼吸道疾病和产蛋量下降。虽然广泛认为禽肺病毒是鸡肿头综合征的因素之一,但尚不清楚禽  相似文献   

雏鸡混合感染IBDV与CAV的研究   总被引：14，自引：0，他引：14  

王笑梅  王秀荣  邱冬 《中国预防兽医学报》2000,22(5):321-324

实验分为4组：空白对照组、CAV感染组、IBBDV感染组、IBDV－CAV混合感染组。选择IBDV发病严重期（6日龄）与CAV发病严重期（13日龄）测定并计算各组鸡的法氏囊、胸腺和体重的比值；分离外周血、法氏囊和胸腺中的淋巴细胞，加入适量的刀豆蛋白（ConA）和商陆凝集素（PAM）作为有丝分裂刺激原，利用MTT法检测实验鸡免疫细胞的功能变化；统计死亡率，绘制死亡曲线。研究发现，IVDB与CAV的混合感染较单独感染严重降低了感染鸡免疫活性细胞的增殖功能，并同时增强了IBDV或CAV的致病力，出现两次死亡高峰，病死率达100％。  相似文献   

B亚型禽偏肺病毒的分离鉴定及致病性研究     

于蒙蒙  包媛玲  王素艳  辛子琪  刘鹏  冯笑艳  孟令宅  郭茹  张艳萍  刘长军  祁小乐  李俊平  王笑梅  高玉龙 《畜牧兽医学报》2022,53(10):3540-3549

旨在确定我国部分养鸡场的鸡出现甩头、精神萎靡和肿头综合征是否由禽偏肺病毒（aMPV）引起,本研究从山东、福建、黑龙江等地的发病蛋鸡和肉鸡场采集鼻甲骨、气管和肺等样品,首先利用aMPV特异性的RT-PCR方法对临床样品进行初步检测,将RT-PCR检测阳性样品接种Vero细胞进行病毒分离,然后利用G/F基因序列分析及间接免疫荧光试验（IFA）等鉴定病毒的亚型,最后将分离株感染SPF鸡进行致病性分析。结果显示：在采集的220份样品中,RT-PCR检测结果显示,有3份鼻甲骨样品在228 bp左右出现特异性条带,将阳性病料接种Vero细胞盲传5代后,细胞出现变圆、聚集和融合等aMPV特征性细胞病变（CPE）,表明成功分离到3株aMPV,将其分别命名为SD2001、SD2002和HLJ2101。G和F基因同源性分析显示,来自蛋鸡的SD2001、SD2002和来自肉鸡的HLJ2101分离株的G和F基因与其他B亚型aMPV毒株的核苷酸和氨基酸序列相似性均较高,核苷酸的相似性分别为93.4%～98.6%和95.6%～100.0%,氨基酸的相似性分别为88.7%～97.8%和97.6%～100.0%;而与A、C和D亚型的G和F基因同源性较低,核苷酸的相似性分别为27.1%～61.8%和66.8%～74.8%,氨基酸的相似性分别为16.1%～36.7%和72.5%～86.5%,这些结果表明,SD2001、SD2002和HLJ2101分离株属于B亚型aMPV。进一步利用B亚型aMPV特异性的阳性血清进行IFA检测,接种SD2001、SD2002和HLJ2101的Vero细胞均可以观察到特异性的绿色荧光信号,进一步证实3个分离株属于B亚型aMPV。选择SD2001感染3周龄SPF鸡进行了致病性研究,结果发现SPF鸡感染后3～6 d出现精神萎靡、甩头和流鼻涕等症状,鼻甲骨、气管和肺也出现病理性损伤,其发病率为90%（18/20）。3株B亚型aMPV的分离不仅有助于明确我国部分养鸡场出现肿头综合征的发病原因,同时也证实B亚型aMPV流行毒株对鸡有明显的致病性,这些结果为我国家禽疫病的诊断和有效防控提供了重要理论依据。  相似文献   

ALV-J分离株Hrb-1 gp85基因蛋白的原核表达及多克隆血清的制备     

侯磊  高宏雷  高玉龙  祁小乐  王笑梅  张淼涛 《黑龙江畜牧兽医》2009,(8)

禽白血病(Avian leukosis)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的以造血细胞增生为主的一类传染病,对养禽业危害最大的是禽淋白细胞性白血病.禽白血病病毒属反转录病毒科C型肿瘤病毒属,其亚群特异性由病毒囊膜糖蛋白gp85决定.  相似文献   

传染性法氏囊病病毒超强毒株的分离与VP2基因序列分析     

宇文延青  高玉龙  高宏雷  祁小乐  王笑梅 《黑龙江畜牧兽医》2009,(9)

为了探讨传染性法氏囊病流行的原因,从4个发生传染性法氏囊病的鸡场采集病变法氏囊,处理后用特异性单克隆抗体进行荧光检测,结果均为阳性;然后提取病毒RNA,利用RT-PCR扩增病毒VP2基因cDNA并进行序列和遗传进化分析.结果表明:所分离的4株病毒均具有超强毒的分子特征,属于传染性法氏囊病病毒超强毒病毒群,4株病毒在第1亲水区的212位有1个氨基酸突变(D→N);HLJ-3和HLJ-4在第2亲水区321位还有1个突变(A→V),这些突变可能造成传染性法氏囊病病毒的抗原发生变异,进而发生免疫失败.  相似文献   

鸡传染性法氏囊病超强毒Gx与疫苗毒Gt在鸡体内的复制研究     

李久宽  王永强  康忠惠  王琦  高玉龙  高宏雷  祁小乐  秦立廷  林欢  王笑梅  许修宏 《中国家禽》2012,(1):15-18

本试验利用鸡传染性法氏囊病超强毒Gx及其致弱疫苗毒Gt为对象,研究超强毒与弱毒株在鸡体主要免疫器官内的复制情况,以探讨两类毒株表现不同生物特性的原因。分别利用鸡胚半数致死量和鸡胚成纤维细胞半数感染量对超强毒Gx和疫苗株Gt进行病毒滴度的测定;再利用荧光定量RT-PCR对两类毒株进行病毒量的校准。以相同量的病毒对2周龄SPF鸡进行攻毒。攻毒试验表明超强毒Gx能造成47.5%的死亡,法氏囊、脾脏、胸腺等免疫器官均严重损伤;而疫苗毒Gt无致死,且未能造成任何病理可见的损伤。病毒的体内复制情况表明超强毒相对于疫苗毒复制更为迅速,病毒载量更高。  相似文献   

鸡传染性法氏囊病毒基因组A节段编码前体多聚蛋白的遗传踪迹分析     

侯仲杰  王靖飞  付朝阳  高宏雷  高玉龙  祁小乐  郭莹莹  王笑梅 《中国预防兽医学报》2012,34(1):28-32

为研究鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)毒力变异的分子机理,本实验采用进化踪迹分析方法对GenBank中登录的28个毒力不同的IBDV参考病毒株的基因组A节段编码的前体多聚蛋白(NH2-pVP2-VP4-VP3-COOH)推导的氨基酸序列进行分析。结果表明超强IBDV与标准IBDV的差异位点集中在第299位、451位、680位、715位和751位氨基酸上;致弱IBDV与标准IBDV的差异位点在第242位、253位、330位和981位氨基酸。该结果为进一步研究IBDV的毒力变异奠定基础。  相似文献   

gga-miR-21过表达细胞株对传染性法氏囊病病毒复制的影响     

欧阳伟  朱向东  王永山  王永强  潘群兴  毕振威  王笑梅 《中国预防兽医学报》2012,(11):847-853

为研究microRNA(gga-miR-21)对传染性法氏囊病病毒(IBDV)复制的影响,本研究利用PCR方法从鸡的肝细胞基因组中扩增细胞pri-gga-miR-21,克隆于慢病毒表达质粒pL-EGFP中构建重组质粒pL-miR-21。将pL-miR-21与3个包装质粒pLP1、pLP2和pLP/VSVG共转染293FT细胞,制备含gga-miR-21基因的重组慢病毒VL+miR-21。将VL+miR-21感染DF-1细胞,经杀稻瘟菌素筛选获得过表达gga-miR-21的细胞株DF-miR-21,采用定量RT-PCR(qRT-PCR)检测表明,gga-miR-21的表达量比正常DF-1细胞提高60%。将IBDV接种于DF-miR-21细胞,在96 h后,其病毒滴度(104.75TCID50/0.1 mL)显著低于正常DF-1细胞的病毒滴度(108.75TCID50/0.1 mL)。采用生物信息学方法和双荧光素酶报告系统分析验证,在IBDV基因组VP1基因中存在gga-miR-21的结合靶点。将IBDV感染DF-miR-21细胞,采用western blot分析,VP1蛋白的表达量比正常DF-1细胞显著降低;用qRT-PCR分析,VP1 mRNA水平与正常DF-1细胞没有明显差异。本实验结果表明:细胞gga-miR-21可以抑制IBDV的复制,其分子作用机理是在VP1基因翻译水平上实现的。  相似文献   

IBDV血清Ⅱ型VP5蛋白原核表达及型特异性单克隆抗体的制备   总被引：1，自引：0，他引：1  

秦立廷  祁小乐  高宏雷  高玉龙  王笑梅 《中国预防兽医学报》2009,31(4)

本实验构建表达了传染性法氏囊病病毒(IBDV)血清Ⅱ型23/82株VP5蛋白,并制备出能够区分不同血清型IBDV的单克隆抗体(mAb).利用EcoR I和Xho I双酶切pUC57-23/82VP5质粒,获得23/82株IBDV VP5基因片段,连接到同样处理的原核表达质粒pET-28a,经酶切鉴定获得重组质粒pET-23/82VP5,转化到宿主茵BL21(DE3),在IPTG诱导下表达融合蛋白,SDS-PAGE分析表明该融合蛋白分子量大小约为23 ku.Ni-NTA柱纯化重组蛋白,复性后免疫8周龄BALB/c小鼠,3次免疫后,常规方法进行细胞融合,获得1株阳性杂交瘤细胞株(5D3),IFA和western blot分析表明该细胞株分泌的mAb仅与血清II型IBDV 23/82株VP5反应,不与血清I型IBDV Gt株VP5反应.腹水抗体间接ELISA效价为1×104.该mAb的制备为研究血清II型IBDV的VP5的功能和标记疫苗的研制奠定了基础.  相似文献   

IBD野毒株的培育     

王笑梅  陈冠春  王秀荣  尹训南  邱冬 《中国预防兽医学报》1998,(5)

由国内ＩＢＤ高发地区分离到一株ＩＢＤ野毒，使现地鸡群发病率９６％，死亡率６０％以上，为一株超强毒。将该毒株分离，纯化，经鸡胚及鸡胚成纤维细胞传代，得到一株ＩＢＤ超强毒的细胞适应株，毒价高达２．０×１０８ＰＦＵ／ｍｌ以上。回归本动物，经免疫原性试验，致病性试验及返祖试验，证明该毒株免疫原性较好而致病力降低。  相似文献