禽流感病毒血凝素基因在大肠杆菌中的表达   总被引：4，自引：0，他引：4  

宋晓晖  王中立  孙明  田克恭  陈西钊 《中国预防兽医学报》2004,26(3):173-176

采用RT-PCR技术扩增禽流感病毒HAI基因,将HAI结构基因克隆于pGEX-T载体上,测序结果表明插入的片段为HAI目的基因.切下目的基因HAI,重组到含有谷胱甘肽(GST)的融合蛋白原核表达载体PGEX-4T-2,获得的重组质粒经PCR、酶切以及序列分析鉴定,表明HAI基因插入的位置、大小和读码框架均正确.证明成功构建了融合表达载体pGEX-HAI.构建好的重组质粒,经1 mmol/LIPTG诱导,在大肠杆菌BL21中得到了大量表达,经过4 h表达量既达到高峰.融合蛋白GST-HAI的分子量为62KD,以包涵体形式存在.Western-Blot分析表明,融合蛋白能够与H5亚型AIV阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的抗原性和特异性.  相似文献   

犬乳腺肿物临床病案分析   总被引：2，自引：1，他引：2  

姚华  林德贵  田克恭  遇秀玲  胡冬梅 《中国兽医杂志》2006,42(7):50-51

犬乳腺肿瘤是兽医临床上常见的肿瘤疾病之一，约占母犬肿瘤发病率的50％，严重影响动物的健康与生活质量。目前，犬乳腺肿瘤的诊断主要基于临床症状、病史调查及其健康状况，而缺乏临床资料分析，实施病理诊断和分类、采取适宜治疗措施仍是兽医临床需解决的主要问题。本文对北京市区疑似犬乳腺肿瘤病例临床进行分析，运用病理学方法进行诊断分类，并对治疗本病提出建议。  相似文献   

系列功能区缺失的猪内源反转录病毒5′非编码区的构建及序列分析     

丁芳  吕茂民  马玉媛  吴健敏  田克恭  毕丁仁  章金刚 《中国兽医学报》2007,(4)

为构建缺失不同功能区的猪内源性反转录病毒(PERV)5′非编码区(5′UTR)克隆,分析5′UTR的转录调控规律,以质粒WZSP-293-5′UTR为模板,应用重组PCR方法分别扩增5′UTR与缺失引物结合区及前导序列(PBS-Leader),即5′UTR(5′长末端重复区)、U3区、R区、U3区中重复序列的5′UTR等5种PCR片段,并分别将其克隆至T载体上,挑取阳性克隆,酶切鉴定插入方向,选择正确方向插入的克隆,测序并进行序列分析。结果表明,构建了系列功能区缺失的5种5′UTR克隆,分别命名为UTR-PMD、LTR-PMD、UTR-U3-PMD、UTR-R-PMD、UTR-U-PMD以备后用。结论:在PERV 5′UTR的不同功能区中含有一系列可能的转录因子结合位点;中国五指山猪内源性反转录病毒(WZSP-PERV)在293细胞中传代时,不仅U3重复区数目增加,重复亚型也发生了一定的改变。  相似文献   

H7N2禽流感病毒CK/HB/1/02株NA全基因序列分析     

王传彬  孙明  金萍  王宏伟  遇秀玲  陈西钊  田克恭 《中国兽医学报》2007,27(1):31-34

采用RT-PCR扩增了国内H7N2禽流感病毒(AIV)CK/HB/1/02分离株的完整神经氨酸酶(NA)基因节段,测定了其核苷酸序列,并与GenBank中AIV NA基因序列进行了同源性比较和氨基酸编码分析,绘制了NA基因的系统发育进化树。结果表明,AIVCK/HB/1/02分离株NA基因的完整序列长度为1467bp,包括5′-末端和3′-末端的非编码区,其最大阅读框(ORF)编码469个氨基酸,第61~65位氨基酸序列为-NITGI-,不同于国内H9N2AIV的特殊遗传标记。该病毒NA基因的核苷酸序列与GenBank中人类流感病毒A/Leningrad/134/57(H2N2)的NA基因同源性最高,为93.3%;其次为香港的鸭源、人源、猪源H3N2病毒(89%~93%);而与我国北京、广东、香港和韩国的H9N2AIV以及美国的H7N2AIV的同源性较低(85%~88%)。在N2基因系统发育进化树中,CK/HB/1/02分离株处于欧亚分支内,与H2N2人流感病毒的亲缘关系较近;与北美H7N2AIV处在不同分支,遗传距离较远。  相似文献   

系列功能区缺失的猪内源反转录病毒5''''非编码区的构建及序列分析     

丁芳  吕茂民  马玉媛  吴健敏  田克恭  毕丁仁  章金刚 《中国兽医学报》2007,27(4):473-476,480

为构建缺失不同功能区的猪内源性反转录病毒（PERV）5＇非编码区（5’UTR）克隆，分析5’UTR的转录调控规律，以质粒WZSP-293—5’UTR为模板，应用重组PCR方法分别扩增5’UTR与缺失引物结合区及前导序列（PBS—Leader），即51UTR（5＇长末端重复区）、U3区、R区、U3区中重复序列的51UTR等5种PCR片段，并分别将其克隆至T载体上，挑取阳性克隆，酶切鉴定插入方向，选择正确方向插入的克隆，删序并进行序列分析。结果表明，构建了系列功能区缺失的5种51UTR克隆，分别命名为UTR—PMD、LTR—PMD、UTR—U3-PMD、UTR-R—PMD、UTR—U—PMD以备后用。结论：在PERV5＇UTR的不同功能区中含有一系列可能的转录因子结合位点；中国五指山猪内源性反转录病毒（WZSP—PERV）在293细胞中传代时，不仅U3重复区数目增加，重复亚型也发生了一定的改变。  相似文献   

规模化猪场猪伪狂犬病和猪繁殖与呼吸综合征的诊断及防控效果评估     

郭玲花  刘红强  赵文影  孙哲  卫璐璐  谢莉敏  田克恭  张云静  逄文强 《现代畜牧科技》2023,(11):1-6

为摸清某规模化养猪场猪群发病的原因。通过流行病学调查、病理剖检进行现场诊断,根据临床初步诊断对发病猪进行实验室检测,对阳性病料进行基因测序和分型鉴定;在临床诊断和实验室检测的基础上,进行临床方案制定及效果评估。结果表明,引起该场育肥猪发病的主要病原是猪伪狂犬病病毒（PRV）,其次是猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）;分型鉴定和测序分析显示,该场感染的PRV毒株为变异株,PRRSV毒株为NADC30-like毒株,且成功分离1株PRV毒株。  相似文献   

非洲猪瘟病毒pF317L在昆虫细胞中的表达及鉴定     

白露露  李胜强  宋欢欢  颜世君  李向东  王同燕  田克恭 《黑龙江畜牧兽医》2020,(7):66-69,76

  相似文献   

口蹄疫病毒VPg2基因克隆表达及VPg2-ELISA检测抗体评价     

田克恭  王宏伟  孙明  王传彬  陈西钊  遇秀玲  曹振  金萍  许燕辉  赵心力 《中国农业科学》2005,38(11):2344-2348

 成功亚克隆了口蹄疫病毒（FMDV）太保毒株3ABC中VPg2基因，并将其插入pGEX-4T-1表达载体构建重组表达质粒，Western blotting分析表明，表达的VPg2蛋白与FMDV阳性血清发生反应。以VPg2表达蛋白为抗原建立间接ELISA方法，对背景清楚的试验牛血清进行检测，结果VPg2表达蛋白与空白对照组（C组）和灭活疫苗反复免疫组（CI组）牛血清均不发生反应，与未免疫直接攻毒组（D组）和免疫后攻毒组（I组）血清均发生反应；对D组和I组，VPg2表达蛋白抗体持续时间最长，可达90d，最早呈阳性反应时间为攻毒后第10天。VPg2表达蛋白抗体持续时间与先前测定的3ABC表达蛋白抗体几乎相同。用VPg2-ELISA方法检测2 170份进口阴性牛血清，12份出现假阳性，假阳性率为0.55%，而用3ABC-ELISA方法检测，48份出现假阳性，假阳性率为2.21%。  相似文献   

H9亚型禽流感病毒HF株的分离鉴定和免疫原性评价     

程艺  田辉  张亚  薛景景  盛东北  刘武杰  王婉冰  张盼涛  田克恭 《中国畜牧兽医》2020,47(9):2945-2952

2015年,从安徽合肥某养鸡场分离出一株H9N2亚型禽流感病毒（AIV）,命名为HF株。该毒株鸡胚半数感染量（EID₅₀）为10^9.17/0.1 mL,最小致死量的平均死亡时间（MDT）为87 h。对其HA基因分析发现,其氨基酸裂解位点为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV特征;HA基因的遗传进化分析结果表明,该分离株属于h9.4.2.5谱系,符合当前毒株流行趋势。将HF株与2006-2018年分离自全国各地的10株H9N2亚型AIV分离株同时制备灭活疫苗,免疫SPF鸡,制备阳性血清,通过交叉血凝抑制试验分析病毒抗原性,结果显示HF株与2014年之前毒株抗原相关性介于0.50~0.56之间,与2014年及之后毒株抗原相关性介于0.89~1.00之间,表明该分离株与2014年之后的流行毒株具有良好的抗原相关性。用0.2%甲醛灭活HF株病毒液,其HA效价在灭活前后未发生变化;用灭活抗原制备油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡,免疫后21 d HI抗体效价几何平均值达到9.0log2以上,可使免疫鸡完全抵抗H9亚型AIV的感染,提供100%的攻毒保护。研究结果表明,HF株具有良好的免疫原性,可作为疫苗候选株用于H9N2亚型禽流感疫苗的研制。  相似文献   

2009年我国猪群中猪圆环病毒2型感染情况调查     

韩雪  蔡林  倪建强  夏应菊  訾占超  汪葆玥  周智  吴佳俊  宁昆  邱鹏  遇秀玲  翟新验  田克恭 《兽医大学学报》2012,(7):941-944

为了解我国猪群中猪圆环病毒2型（Porcine circovirustype2，PCV2）的感染情况，分析感染与猪年龄的关系，本试验于2009年在我国28个省市的71个中小规模场、22个屠宰场和62家散养户采集了2905份猪血清样品，用PCR法对PCV2进行检测。结果显示，检出阳性血清429份，阳性率为14．8％。在被调查的场／P中，86．4％屠宰场、52．1％中小规模场和58．1％散养户为PCV2感染阳性，其中48．6％的PCV2阳性中小规模场的群阳性率低于10％。分析中小规模场PCV2感染情况和猪年龄之间的关系发现，在5个年龄组中，2～4周龄组未检出PCV2感染，5周龄以上各组均检出PCV2感染，其中11～14周龄组和15～26周龄组阳性率较高，高于5～7周龄组和8～10周龄组。  相似文献