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目的:研究化学防腐剂及植物提取物在单一及复配条件下对组织培养过程中常见霉菌的抑制效果,为防腐剂降低组培污染率提供依据。方法:利用涂布平板法测定单一及复配防腐剂对青霉和黑曲霉的抑制作用。结果:肉桂酸钾、尼泊金复合酯对青霉和黑曲霉抑菌效果优于丙酸钠、山梨酸钾,最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentrations,MIC)分别为0.040%、0.035%;大蒜提取物、阿魏提取物、薰衣草精油的抑菌效果优于孜然提取物,MIC分别为0.9%、1.4%、0.35%。与单个防腐剂相比,复合防腐剂抑菌效果更好。通过尼泊金复合酯、肉桂酸钾和大蒜提取物3因素正交试验设计,发现对青霉抑制最优组合浓度分别为0.02%、0.03%、0.2%,或0.03%、0.03%、0.15%,对黑曲霉抑制最优组合浓度分别为0.03%、0.02%、0.2%。结论:采用防腐剂与植物提取物复配方式可以抑制霉菌孢子萌发及菌丝生长,在降低组培污染率具有较好的应用前景。 相似文献
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为提高农杆菌介导的苜蓿遗传转化效率,获得转K88ac-STⅡ-LTA2/LTB基因苜蓿植株,以苜蓿下胚轴为外植体,对影响遗传转化的预培养时间、农杆菌菌液浓度、筛选方式等进行研究.结果表明,苜蓿下胚轴预培养3 d,菌液浓度为OD6000.5,筛选剂Kan浓度第一阶段和第二阶段分别为30和50 mg/L ,延迟筛选7 d时转化效率最高.对转基因苜蓿进行PCR和PT-PCR检测,初步证实目的基因已经整合到苜蓿基因组中,转化率达28.4%. 相似文献
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拟南芥At3g28220基因抗寒功能初步分析 总被引：1，自引：0，他引：1
采用RT-PCR分析、基因克隆、转化等方法对At3g28220基因功能进行了研究.结果发现At3g28220基因在拟南芥受到低温及盐胁迫时才会在拟南芥中表达,且在不同生长期不同器官中的表达量无明显差异.通过构建35s:At3g28220基因正反向表达载体转化拟南芥,T1植株经卡那霉素抗性筛选,RT-PCR检测,结果表明At3g28220基因已经整合到拟南芥基因组中,并在转录水平表达.正常生长条件下,转基因拟南芥与野生型拟南芥的生长未见明显区别,而经过低温胁迫研究发现,正向表达转基因拟南芥的冷冻耐受能力明显高于野生型植株.说明拟南芥hos10-1冷驯化能力的丧失是与At3g28220基因的表达下调有直接的关系. 相似文献
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HRAP基因诱导型植物表达载体的构建及烟草转化 总被引：1，自引：0，他引：1
系统获得性抗性是植物抵御病菌侵染的一种独特的防御机制.HRAP基因是一种从甜胡椒中克隆的蛋白质激发子,可以有效引发植物系统性抗性.SAR8.2b基因是烟草系统获得性抗性信号传导途径中下游响应基因,受病原物和水杨酸诱导.本试验根据Genebank发布SAR8.2b基因的启动子序列,利用PCR技术,克隆了SAR8.2b基因的完整启动子,命名为SAR8.2bP,然后将SAR8.2bP构建到pUC18-HRAP载体中命名为pUC18-SAR8.2bP-HRAP,然后用SAR8.2bP-HRAP替换p2300-121载体中的35S启动子和GUS基因,重组子命名p2300-SAR8.2bP-HRAP.将构建的植物表达载体转化农杆菌GV3101,利用叶盘法转化烟草,通过PCR筛选,获得了转基因植株.为进一步验证转基因烟草的抗病效果奠定了基础. 相似文献
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乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)催化脂肪酸合成的第一步,是脂肪酸合成的限速酶.采用PCR方法分别从陆地棉和拟南芥基因组中扩增出ACCase基转移酶β-CT亚基编码基因αccD,ACCase羧基转移酶α-CT亚基编码基因CAC3的定位于叶绿体的转运肽序列.将CAC3基因转运肽序列与αccD基因进行体外重组,构建融合植物表达载体pBI-CAC3tp-αccD.重组质粒通过冻融法转化根癌农杆菌GV3101.渗透法转化拟南芥,收种子,在含卡那霉素的MS培养基中发芽筛选.用叶盘法转化烟草,经不定芽诱导、生根培养,荻转基因烟草植株.T1代转基因拟南芥和转基因烟草植株经卡那霉素检测、PCR、RT-PCR检测后,初步表明目的基因已在植株中转化成功,并可以正常转录. 相似文献
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小果雪兔子的组织培养 总被引：1，自引：0，他引：1
小果雪兔子分布于新疆帕米尔高原,是一种濒临灭绝植物。利用组织培养的方法研究和保存珍稀的种质资源,是一种有效途径。以小果雪兔子无菌苗下胚轴为外植体,在含有6_BA(0.2 mg/L)和NAA(2 mg/L)的MS固体培养基上,20 d后可诱导出紫红色愈伤组织。当经4℃处理的愈伤组织转移到含6_BA(2 mg/L) NAA(0.2 mg/L) 水解乳蛋白(250 mg/L)的MS培养基上,25 d后在愈伤组织上即可诱导出芽,出芽率为240%,继代培养后形成丛生苗,增殖率可达3~5倍。将2~3 cm长的幼苗,转移到IAA(0.5 mg/L) 活性炭(0.5%)的1/2MS固体培养基上,20 d即可从茎基部生根,生根率74%。 相似文献
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大叶补血草Na+/H+ 逆向转运蛋白基因( SOS1)的克隆与序列分析 总被引：1，自引：0，他引：1
用RT-PCR及RACE方法从盐生植物大叶补血草Limonium gmelinii (Willd. ) Kuntze中分离出Na+/H+ 逆向转运蛋白基因的cDNA (LgSOS1, GenBank登录号EU780458) , LgSOS1的cDNA全长为3 910bp, 5′非翻译区为79 bp, 3′非翻译区为376 bp, 开放阅读框为3 455 bp, 编码1 151个氨基酸, 推测分子量为126 kD。氨基酸同源性分析表明, LgSOS1与冰叶午时花、沙拐枣、番茄、盐芥和拟南芥质膜型Na+/H+ 逆向转运蛋白的一致性分别为69.02%, 64.42% , 61.96% , 60.12%和59.62%。预测分析表明, LgSOS1有12个跨膜结构区域。系统发育分析表明该蛋白与质膜型的Na+/H+ 逆向转运蛋白的亲缘关系较近, 与液泡型的Na+/H+ 逆向转运蛋白亲缘关系较远。 相似文献
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纤维素资源是地球上最丰富的可再生资源,纤维素酶的酶活力和生产成本制约着纤维素的利用.本研究从多年户外放置的朽木(Populus bonatii)中分离出一株真菌G-1,经18S rDNA序列分析鉴定为绿色木霉(Trichoderma viride).从G-1中分离出一种纤维素内切酶基因(endoglucanase,EG;GenBank登录号:HM116999.1).通过重叠引物延伸法对EG进行定点突变,得到一个突变序列EG-mut,将EG和EG-mut分别插入分泌型表达载体pPIC9K,并导入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris),筛选到两个菌株,经刚果红染色和DNS法对酶活性测定,显示其内切酶的活性分别达到20.915 U/mL和24.110 U/mL,酶活力高于本实验中得到的其它重组菌株.结果表明某些定点突变可以揭示影响酶活的重要功能域. 相似文献
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