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从蛋白酶K的浓度、DAB显色时间、苏木素复染时间等对采用石蜡切片TUNEL法检测10日龄健康ROSS308肉仔鸡法氏囊组织内细胞凋亡的条件进行了优化。结果表明,TUNEL法最佳条件蛋白酶K浓度为20μg/mL,DAB显色时间为8 min,苏木素复染时间为10 s。优化后的石蜡切片TUNEL法,即60℃烤片5 h,20μg/mL蛋白酶K 37℃消化30 min,DAB显色8 min,苏木素复染10 s时,能特异地显示凋亡细胞为棕黄色,其他细胞核为蓝色,且对比明显,背景浅,组织结构完整清晰。 相似文献
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新城疫病毒F基因在大肠埃希菌中的表达及其抗原性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
构建新城疫病毒融合蛋白F基因的原核表达载体,并将其在宿主菌BL21(DE3)感受细胞中表达.以含有融合蛋白F基因的重组质粒pMD19T-F为模板,设计特异性引物,应用PCR技术扩增获得F基因的F1片段,定向插入原核表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-F1,将构建成功的重组质粒pET-F1转化宿主菌BL21(DE3)感受态细胞经IPTG诱导,将其在宿主菌细胞中表达,表达产物用SDS-PAGE和Western blot方法检测.结果显示,成功克隆出了新城疫病毒F1基因片段序列852 bp.构建的pET-F1载体经PCR、双酶切、测序鉴定均无误,转化表达宿主菌后经SDS-PAGE和Western blot检测结果显示,目的基因被成功表达,并具有良好的反应原性.成功构建了新城疫病毒的融合蛋白F基因原核表达载体,转化宿主细胞后成功表达了融合蛋白F1重组蛋白片段. 相似文献
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对经过流行病学调查、临床诊断、病理剖检、病原学检查确诊为猪圆环病毒感染的病猪放血处死,采集肺脏、脾脏、全身淋巴结等组织制作同源组织灭活苗.选取体重相近、有临床发病表现的仔猪160头,随机分成A、B、C、D 4组,其中A组为同源组织灭活苗+兽大菌灭注射液,B组为兽大菌灭注射液,C组为杂症一针注射液,D组为对照组,每组40头.每天用药1次,连用3 d,在相同条件下进行饲养管理,结果A、B、C、D 4组的成活率分别为95.0%、80.0%、45.0%、17.5%. 相似文献
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RT-PCR和nested-PCR技术在猪瘟病毒检测中的应用 总被引:1,自引:0,他引:1
根据已发表的CSFV核苷酸序列,设计并合成CSFV特异性引物及nested-PCR引物对。从待检猪脾脏,淋巴组织或实验感染的细胞培养物中提取总RNA,用AMV反转录酶进行反转录后,进行PCR扩增,一扩产物再nested-PCR引物对进行二次扩增,用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。进一步将该片段纯化回收后,克隆到T载体并进行测序。测序结果同已知的CSFV、BVDV和BDV核苷酸序列进行同源性比较分析,即可快速,准确地区别于BVDV和BDV,又可以确定CSFV的血清型。该方法可有效用于猪瘟的病理学和流行病学研究。 相似文献
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1 做好转群上笼前的准备工作1.1 检修鸡舍和设备转群上笼前对鸡舍进行全面检查和修理。认真检查喂料系统、饮水系统。供电照明系统、排风排水系统和笼具、笼架等设备,如有异常立即维修,保证鸡入笼时完全正常使用。1.2 清洁消毒淘汰鸡后或上笼前2~3周对蛋鸡舍进行全面清洁消毒。其清洁消毒步骤是:先清扫,清扫干净鸡舍地面、屋顶、墙壁上的粪便和灰尘,清扫干净设备上的垃圾和灰尘;再冲洗,用高压水枪把地面、墙壁、屋顶和设备冲洗干净,特别是地面,墙壁和设备上的粪便;最后彻底消毒,如鸡舍能密封,可用福尔马林和高锰酸钾熏蒸消毒,… 相似文献