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为研究鸡程序性细胞死亡因子1(PD 1)胞外区的生物学活性,根据 GenBank 中的鸡 PD 1基因序列,经生物信息学比对分析,设计鸡 PD 1胞外区特异性克隆引物,扩增目的基因,连接原核表达载体 pET 28a(+),构建重组表达载体 pET 28a PD 1,转化至 Rosetta(DE3)大肠杆菌,并对IPTG 浓度、诱导温度、诱导时间进行优化,对表达产物进行 SDS PAGE 和 Western blot 分析,应用流式细胞术对所获得重组蛋白的生物学活性进行鉴定。结果显示,成功克隆了鸡 PD 1胞外区基因;SDS PAGE 和 Western blot 分析结果表明,37℃、0.1 mmol/L IPTG 诱导4 h 时,PD 1胞外区融合蛋白表达量最高,以包涵体形式存在;流式细胞术分析结果表明,PD 1胞外区重组蛋白具有一定的生物学活性。 相似文献
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新城疫是当今全球范围内最严重的禽类传染病之一。其病原新城疫病毒是单股负链RNA病毒,编码NP、P、M、F、HN和L 6种结构蛋白,其中最主要的是位于囊膜上的F和HN两种糖蛋白。F蛋白具有使病毒囊膜与宿主细胞膜融合,致使病毒穿入宿主细胞膜的作用,是决定病毒毒力的关键因子;HN蛋白具有血凝素和神经氨酸酶两种活性,这两种活性对于NDV侵染细胞具有重要的作用。这两种糖蛋白不仅对NDV的毒力及致病性方面起着决定性作用,而且也是诱导产生保护性抗体的蛋白。作者主要对这两种蛋白的结构与功能作一概述。 相似文献
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1发病情况2005年10月下旬,河南省新乡市某养猪场87头2~3月龄猪陆续发病,至11月10日发病46头,死亡15头。2临床症状急性病例,营养良好,发热,体温41℃~42.5℃,精神沉郁,食欲下降或废绝,痛性咳嗽,呼吸困难,呈腹式呼吸,体表皮肤发红,耳尖、胸腹下和四肢内侧有紫斑。其中有2个病例腕关节和跗关节肿胀,跛行,发病2~5天死亡。慢性病例,精神沉郁,被毛蓬乱,食欲下降,呼吸困难,腹式呼吸,卧地不愿站立,关节肿大,跛行,步态僵硬,弓腰,生长发育缓慢,有的腹泻。3剖检病变胸腹腔内积有浆液性纤维素性渗出物。心包腔扩张,内有浆液性纤维素性黏性渗出物。肺肿… 相似文献
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根据GenBank中猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)5′NTR的保守序列,设计1对特异性引物和TaqMan探针,以CSFV全长基因重组质粒pGEM-CSFV为标准品,建立TaqMan实时荧光定量PCR标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验,并检测人工感染CSFV后不同时期猪血浆中CSFV的载量。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,R2=0.999;敏感性高,最低检测限为1×101拷贝/μL;特异性强,与猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒无交叉反应性;重复性好,组内和组间变异系数均小于2%。人工感染CSFV后第7天猪血浆中CSFV载量达到峰值,之后逐渐降低。结果表明,建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法具有特异、敏感、重复性好等优点,为CSFV的定量分析及临床诊断奠定基础。 相似文献