牦牛源干燥棒状杆菌的分离与鉴定     

温峰琴  项海涛  郝宝成  邢小勇  包世俊  胡永浩 《畜牧兽医学报》2019,(1):227-232

一只牦牛屠宰后肝有干酪样结节,为了探究其形成原因,本研究对该牦牛肝进行细菌的分离培养,对所分离可疑致病菌的16SrRNA以及rpoB基因序列进行扩增和序列分析,并用Vitek 2全自动微生物鉴定仪进行生化表型的鉴定,用K-B法进行药敏试验。结果显示,经细菌分离培养得到一株革兰阳性、棒状、可疑致病菌;其16S rRNA扩增片段大小1 483bp,GenBank序列编号为MH000696,该菌的16SrRNA与干燥棒状杆菌GD34株(KF928790.1)等的相似性最高,序列一致性为99%,系统进化树显示,本菌与干燥棒状杆菌在同一进化分支上;rpoB基因扩增片段大小434bp,GenBank序列编号为MH006608;Vitek 2全自动微生物鉴定仪鉴定为变异库克菌,可信度为93%。该菌对妥布霉素、氨曲南、头孢哌酮、米诺环素等多种药物高度敏感。综上所述,分离的细菌为干燥棒状杆菌,但基因序列,如rpoB等以及生化表型均存在一定程度的变异,本研究为兽医临床上该菌的分离和鉴定提供了依据,且为该菌的致病性研究奠定了基础。  相似文献   

不同料形对30～50日龄仔猪腹泻率的影响     

许鸿  胡永浩 《甘肃畜牧兽医》2016,(3)

对196头三元断奶仔猪分成三组,用3种不同形式饲料进行试验,研究膨化颗粒料,膨化碎粒料,粉料对30～50日龄仔猪腹泻病的影响。结果表明,粉料组仔猪的腹泻率明显高于其他两组。  相似文献   

抗大肠杆菌O157单克隆抗体制备过程中杂交瘤细胞的观测     

王燕琴  李克生  杜蕙芬  胡永浩 《甘肃农业大学学报》2008,43(3)

采用细胞活力测定、形态学观察和遗传学检测的方法,研究了在用常规方法制备大肠杆菌O157单克隆抗体过程中,融合前后的细胞在细胞活力、细胞形态以及染色体数量的差异.结果表明,与凯骨髓瘤细胞相比,杂交瘤细胞的细胞活力和细胞形态无明显变化;当脾细胞与凯骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞后,其染色体数目接近两亲本细胞染色体数目之和.  相似文献   

新孢子虫SRS2基因的克隆及原核表达     

邢小勇  王权  温峰琴  郝宝成  项海涛  胡永浩 《中国动物检疫》2012,29(9):43-45

为构建表达新孢子虫重组蛋白SRS2原核表达系统,本研究以新孢子虫基因组为模板PCR扩增SRS2蛋白部分基因,获得大小约为998bp的目的片段,并克隆到大肠杆菌PET-32a载体中,IPTG诱导重组大肠杆菌,通过SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并鉴定其生物学活性。经SDS-PAGE分析,表达的重组SRS2蛋白分子量约为54kD,免疫印迹结果表明,表达的重组蛋白与牛抗新孢子虫阳性血清反应形成一条特异性蛋白条带。本实验为进一步研究诊断和治疗新孢子虫病奠定了基础。  相似文献   

表达H5亚型禽流感同义(Consensus)HA蛋白的重组质粒构建及体外表达     

常晓飞  赵双成  田石  柳金雄  王靖飞  曾显营  胡永浩  姜永萍  陈化兰 《中国预防兽医学报》2012,34(7):510-513

为研究禽流感病毒(AIV)H5亚型同义Consensus HA(Cons-HA5)基因的重组表达质粒在体外的表达情况,本研究通过对从NCBI流感数据库中获得的5000条H5亚型AIV的HA蛋白的序列比对、分析获得一条同义HA蛋白,将其相对应的核苷酸序列进行鸡体偏嗜性密码子优化,人工合成Cons-HA5基因并克隆于真核表达载体pCAGGS中构建重组表达质粒pCACons-HA5。将重组质粒转染293-T细胞,在激光共聚焦显微镜下观察转染后不同时间HA蛋白的表达情况,同时在转染后24 h、48 h后分别进行表达蛋白的western blot检测。结果表明,pCACons-HA5转染293-T细胞后,其表达的HA蛋白先分布于细胞质中,而后转移至细胞膜表面;westernblot鉴定结果表明,Cons-HA5重组蛋白可以与AIV多克隆血清反应分子量约为70 ku。该重组质粒的构建将为进一步Cons-HA5核酸免疫对H5亚型不同抗原群AIV的交叉保护免疫效力研究奠定基础。  相似文献   

改良菌落原位杂交技术快速筛选NDV F基因阳性克隆株   总被引：1，自引：0，他引：1  

胡永浩  蒋正军 《中国兽医科技》1998,28(11):20-21

应用从表达型质粒载体构建的ＤＮＶ Ｆ基因文库中筛选阳性克隆株的改良融合蛋白质－抗体蛋白质原位杂交技术，可使菌落在硝酸纤维素薄膜上增殖，经适当处理后，即可用特异性抗体探针进行原位筛选，获得含目的基因编码的特异抗原蛋白的阳性克隆株。  相似文献   

H5N1亚型禽流感病毒起源及演化关系的探讨H5N1亚型禽流感病毒起源及演化关系的探讨   总被引：2，自引：0，他引：2  

易华山常惠芸  胡永浩马鲜平 《动物医学进展》2006,27(7):24-27

通过综述感染人类的H5N1亚型高致病性禽流感病毒起源及演化关系，表明感染人的A／Hongkong／97（H5N1）株及目前流行的高致病性禽流感病毒可能起源于禽源的A型流感病毒株（A／Goose／Guangdong／1／96）。自1996年以来，H5N1亚型禽流感病毒的基因型经Gs／Gd，A，B，C，D，E，V，W，）X0—X3，Y，Z和Z^＋不断的演化为目前流行的基因型Z。高致病性禽流感病毒（H5，H7和H9亚型）在禽，特别是水禽体内的重组或重配而相互传播，并随候鸟的迁徙而传播不易消灭，H5N1亚型的禽流感在不同地区的不断暴发与流行已严重威胁着养禽业的发展及人类的健康，需要进行长期监控。  相似文献   

两种不同抗原制备方法对大肠杆菌O_(157):H_7单克隆抗体亚类的影响     

王燕琴  朱建勇  胡永浩 《黑龙江畜牧兽医》2011,(19)

单克隆抗体技术已深入到医学和生物学的各个领域,成为一种必不可少的工具,具有极为重要的理论研究价值和实用价值。据报道,全菌抗原的主要抗原位点是脂多糖(LPS),刺激机体产生的IgG抗体主要针对脂多糖,故不同血清型间无交叉保护作用;而提纯的外膜蛋白(OMP)作为抗原刺激机体产生的  相似文献   

复方天门冬多糖注射液的靶动物（鸡）安全性试验     

胡国明  胡庭俊  邢小勇  温峰琴  胡永浩 《广西农业科学》2014,45(8):1481-1485

【目的】研究复方天门冬多糖注射液对靶动物（鸡）的安全性,为其临床用药提供参考依据。【方法】以鸡为靶动物进行肌肉注射给药,然后对试验鸡的临床症状、体重变化、饲料报酬及血液常规指标、血液生化指标等进行安全性评估,以确定受试药物的最大耐受剂量或耐受范围。【结果】鸡只注射复方天门冬多糖注射液后,能明显增加其日均增重和降低饲料报酬,促进鸡体生长发育,尤其以5倍剂量组（10.0 mL/kg）的效果最佳;在血液常规指标方面,除血小板数呈明显降低趋势外,白细胞数、红细胞数、红细胞压积、血红蛋白含量等指标的变化不明显,且不同处理组间的差异不显著（P＆gt;0.05）;在血液生化指标方面,注射复方天门冬多糖注射液后1周内各项生化指标呈无规律的升高或降低变化趋势,至给药后第14 d（31日龄）,则以5倍剂量组的各项指标较接近于正常水平。【结论】复方天门冬多糖注射液是一种有效的免疫增强剂,能促进鸡体生长发育,且在实际生产应用中具有较高的安全性,其在靶动物（鸡）上的最大耐受剂量为10.0 mL/kg。  相似文献   

猪戊型肝炎病毒甘肃分离株衣壳蛋白基因序列分析     

郝宝成  梁剑平  兰喜  刑小勇  项海涛  温峰琴  胡永浩  柳纪省 《畜牧与兽医》2011,43(10)

为进行国内猪戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白基因特征研究,参照GenBank中已发表的戊型肝炎病毒核苷酸序列,设计了1对扩增HEV衣壳蛋白(Y)基因的引物,利用RT-PCR等方法成功克隆出HEV甘肃分离株swCH189的Y基因cDNA片段,并与国内其他9株典型HEV分离株进行序列分析,用DNAstar软件进行序列同源性分析,PHYLIP软件绘制基因进化树。结果表明,swCH189株的Y基因与国内9株典型HEV分离株间的核苷酸序列同源性为79.6%～91.8%,推导的氨基酸序列同源性为91.4%～98.85%。基因进化树显示swCH189与基因Ⅳ型swCH25株亲缘关系最近,在同一分支上,属于基因Ⅳ型。  相似文献